Tudja, hogy az oxidatív stressz vesekárosodást okozhat?

További információ:ali.ma@wecistanche.com

Ⅰ rész: Az akut vesekárosodást követő oxidatív stressz a tüdősejt csillóinak megsértését és a bronchoalveoláris mosófolyadékba való felszabadulását okozza, valamint tüdőkárosodást okoz, amit az Idh2 deléció súlyosbít

Yong Kwon Hana, Ji Su Kim, Gwan Beom Leea, Jae Hang Lim, Kwon Moo Park

1. Bemutatkozás

Akut vese sérülés(AKI) különböző klinikai körülmények között fordul elő, beleértve a sokkot, a szepszist, a szervátültetést és az érsebészetet [1-3]. AKI (Akut vese sérülés) károsítja a távoli szerveket, beleértve a tüdőt, a májat, a szívet és az agyat [4-9]. Ez a távoli szervi sérülés az AKI-t követően (Akut vese sérülés)elismerten a rossz eredmények fő kockázati tényezője [5,9]; ezért a távoli szervi sérülések megfelelő kezelése fontos az AKI-s betegek kimenetelének javítása érdekében (Akut vese sérülés). Azonban a pontos mechanizmusok részt AKI (Akut vese sérülés)- kapcsolatos távoli szervi sérülést még meg kell határozni.

Kattintson a Cistanche oldalra az akut vesebetegség és a cistanche mellékhatásaiért

A csillók centriólból származó kiemelkedések a sejtfelszínről, amelyek mikrotubulus alapú citoszkeletont (axonémet) tartalmaznak, amelyet ciliáris membrán vesz körül. A csillókat szerkezetük és mozgékonyságuk jellemzi, és vagy mozdulatlan csillókként (elsődleges csillók) vagy mozgó csillókként határozzák meg. Az elsődleges csillók magányos, nem mozgékony, mikrotubulus alapú 9 plusz 0 axonemalis antennaszerű organellumok, amelyek kinyúlnak a sejtmembránból, és több jelátviteli útvonal koordinálásával extracelluláris jeleket továbbítanak a sejtbe [10-12 ]. A többszörös, 9 plusz 2 axonemalis szerkezetű, mozgékony csillók főként a légzőrendszerben és a petevezetékben találhatók, és anyagok szállítására szolgálnak [10,13]. Egyre több bizonyíték támasztja alá, hogy a csillók képződésének és működésének hibái különféle emberi betegségekkel, köztükpolicisztás vesebetegségekés primer ciliáris dyskinesia [14-20]. Ezenkívül a közelmúltban végzett tanulmányok kimutatták, hogy a csillók szétszakadása kóros állapotok hatására következik be, és ez a zavar szerepet játszik a sejtsérülés és diszfunkció közvetítésében [15-20].

A felgyülemlett bizonyítékok azt bizonyítjákveseischaemia-reperfúzió (IR), az AKI egyik oka (Akut vese sérülés), távoli szervi sérülést okoz [6-8,21]. A távoli szervi sérülések gyulladásos reakciókkal, a sejthalálhoz és a túléléshez kapcsolódó jelátviteli utak megváltozásával járnak, ésoxidatív stressz [8,22-24]. Oxidatív stresszközvetlenül kapcsolódik a sejtösszetevők működési zavarához, ami szervi rendellenességeket okozhat, és az egyik fő okaként ismerik el.veseIR által kiváltott távoli szervi sérülés [21,25,26]. Ezt már korábban bemutattukveseIR- és ciszplatin-indukált AKI (Akut vese sérülés)megváltoztatja az elsődleges csillók hosszátvesehámsejtek a csillószálak összeszerelése, szétszerelése és megszakítása (csillapítása, leválása vagy töredezése) révén [17-19]. Ezek a folyamatok a reaktív oxigénfajtákhoz (ROS) ésoxidatív stressz. a hidrogén-peroxid koncentrációjától és mértékétől függőenoxidatívfeszültség; az alacsony H2O2 koncentráció a primer csillók hosszának megnyúlását idézi elő, míg a magas H, O koncentráció zavart okoz [17-20]. Ezenkívül azt találtuk, hogy a sérült elsődleges csillói megszakadtakvesea tubuláris hámsejtek a vizelettel választódnak ki, és ez a zavar és a kiválasztás antioxidáns kezeléssel megelőzhető [17-20]. Rodriguez-Ribera et al. beszámoltak arról is, hogy a reakcióképes karbonilvegyületek, például a malondialdehid, aoxidatív stressz, az elsődleges csillók elvesztését idézik elő emberbenveseproximális tubulussejtek [27]. Ezért azt feltételeztük, hogy az AKI (Akut vese sérülés)- az indukált akut tüdőkárosodás (ALD) és a sejtkárosodás a csillókhoz és a tüdősejtekhez kapcsolódikoxidatívfeszültségés annak megelőzéseoxidatívfeszültségcsökkenti az AKI-t (Akut vese sérülés)- indukált tüdősérülés. Jelen tanulmányunkban azt vizsgáltuk, hogyveseIR-indukált AKI (Akut vese sérülés)okozza a csillók és a tüdő sejtjeinek károsodását, és ha igen, akkor ezek a zavarok összefüggésben állnak-eoxidatívB. Ennek érdekében farmakológiai és genetikai megközelítéseket alkalmaztunk, beleértve az izocitrát-dehidrogenáz 2(Idh2)-deletált egereket. Az IDH2 a mitokondriumokban lokalizált enzim [28]. A mitokondriumokban az IDH2 katalizálja az izocitrát oxidatív dekarboxilációját -ketoglutaráttá, amit a NADP NADPH-vá való redukálása kísér, ami kritikus tényező a tioredoxin és glutation antioxidáns rendszerben [29-32]. Ezenkívül megvizsgáltuk, hogy a ciliáris fehérjék és fragmensek jelenléte a bronchoalveoláris mosófolyadékban (BALF) tüdőkárosodásra utal-e. Itt számolunk be először arról, hogy az AKI (Akut vese sérülés)a tüdősejt csillók megzavarását és a BALF-ba való felszabadulását, valamint tüdőkárosodást okoz, amit az IDH2 deléció súlyosbít.

oxidatív stressz vesekárosodást okoz

2. Anyagok és módszerek

Állat előkészítése.

Minden kísérletet 8-10-hetes hím C57BL/6 egerekkel (Koatech, Pyeongtaek, Gyeonggi-do, Korea), nőstény Idh2-gén-deletált (Idh2~/) egerekkel és vad típusú (dh2 plusz / )egerek [28]. Az egerek szabad hozzáférést kaptak a vízhez és a standard egértáphoz. Az állatkísérletet a Koreai Köztársaság Kyungpook Nemzeti Egyetemének intézményi állatgondozási és felhasználási bizottsága hagyta jóvá. A kétoldali vese ischaemia kiváltására avesepentobarbitál-nátriummal (60 mg/ttkg) érzéstelenítés közben oldalsó bemetszéseken keresztül exponáltuk, majd azvesemikroaneurizma bilincsekkel 35 percig teljesen összefogtuk. Ugyanez az eljárás, kivéveveselábszár befogást végeztek az álműtétben. A testhőmérsékletet 36,5 °C -37 °C-on tartottuk a sebészeti beavatkozások során, hőmérséklet-szabályozott fűtőberendezéssel (FHC, Bowdoin, ME, USA). Néhány egérnek {{4} }}(2,2,6,6-Tetrametilpiperidin-1-ox-il-4-arilamino)-2-oxoetil-trifenil-foszfónium-klorid (Mito--TEMPO,{{14 }},7 mg/ttkg; Sigma, St. Louis, MO, USA) vagy 17 és 1 órával a műtét előtt (előkezelés), vagy 6 órával a műtét után (utókezelés).

A kísérletek végén a tüdő illveseA szöveteket folyékony nitrogénben, vagy PLP (4% paraformaldehid, 75 mM L-lizin, 10 mM nátrium-perjodát: Sigma) oldattal perfúzióval fixáltuk biokémiai, illetve szövettani vizsgálatokhoz. A fagyasztott szöveteket -70 fokon tároltuk, amíg szükség volt rá.

BALF gyűjteménye.

A BALF-ot összegyűjtöttük, miután az egereket pentobarbitál-nátrium túladagolásos injekciójával elaltattuk. A tüdő szivárgását a BALF fehérjekoncentrációjának és sejtszámának meghatározásával értékeltük. A BALF összegyűjtéséhez a bal tüdő hörgőjét teljesen befogtuk mikroaneurizmabilincsekkel. Tűt szúrtak a légcsőbe, és lassan 0,8 ml hideg foszfáttal pufferolt sóoldatot (PBS) fecskendeztek be a jobb tüdőlebenyekbe. A BALF-ot a fecskendő dugattyújának egyszeri visszahúzásával gyűjtöttük össze. A BALF-ben a teljes sejtszámot és a fehérjekoncentrációt azonnal elemeztük hematocitométer és BCA vizsgálati kit (Thermo Fisher Scientific, Waltham, Massachusetts, USA) segítségével. A BALF-ot -70 fokon tartottuk mindaddig, amíg a Western blot elemzéshez nem szükséges.

Vesefunkció. Az egerekből vért vettünk heparinizált fecskendővel. A vér karbamid-nitrogénjének (BUN) koncentrációját a plazmában Vitros 250 Chemistry Analyzer (Johnson & Johnson, New Brunswick, NJ, USA) segítségével határoztuk meg.

Periodikus sav-Schiff (PAS) és hematoxilin és eozin (H&E) festés.

PLP-fixveseés a tüdőszöveteket paraffinba ágyazták, mikrotom segítségével 3- μm vastag metszetekre vágták (Leica, Bensheim, Németország), és üveglemezekre szerelték.Veseés a tüdőmetszeteket PAS-sel és H&E-vel festették. Azvesekárpontszámot vakon értékelték a kutatók a korábban leírtak szerint [3,19].

Western blot analízis.

A Western blottingot a korábban leírtak szerint végeztük [3]. A Western blottinghoz használt antitestek a következők voltak: anti-4-hidroxi nominális (4-HNE; Abcam, Cambridge, MA, USA), anti- -tubulin (Santa Cruz, CA, USA) , anti-acetilált -tubulin (ac- -tubulin, Sigma), anti-mangánfüggő szuperoxid-diszmutáz (MnSOD; Calbiochem, San Diego, CA, USA), anti-kataláz (Fitzgerald, Concord, MA, USA) , anti-ADP-ribozilációs faktor-szerű protein 13B (Arl13B, Proteintech, Chicago, IL, USA), antiizocitrát-dehidrogenáz 2 (IDH2; Santa Cruz), anti-optikai atrófia 1 (Opal; BD Bioscience, San Diego, CA ), hasadásgátló 1 (Fis1; Sigma), anti-dinamin-kapcsolódó protein 1 (Drpl; Cell Signaling Technology, Danvers, MA, USA) és anti-gliceraldehid 3-foszfát-dehidrogenáz (GAPDH; NOVUS, Littleton, CO, USA).

Immunfluoreszcens festés.

Paraffinmentesítés után a metszeteket 1 percig {{0}},2% Triton X-100(Sigma)-t tartalmazó PBS-ben inkubáltuk, majd 10 percig PBS-ben mostuk. Az antigén-epitóp feltárásához a metszeteket 10 mm-es nátrium-citrát pufferben (pH 6,0) 10 percig forraltuk, 20 percig hűtöttük, majd minden mosásnál háromszor 5 percig PBS-sel mostuk. A metszeteket 3% szarvasmarha szérum albuminnal blokkoltuk PBS-ben (blokkoló puffer) 30 percig, majd anti-Arll3b antitesttel inkubáltuk 4 fokon egy éjszakán át. Mosás után a metszeteket FITC-konjugált kecske anti-nyúl IgG-vel (Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA) inkubáltuk 60 percig, majd háromszor mostuk PBS-sel 5 percig. A sejtmagokat 4'-6-diamidino-2-fenilindollal (DAPI; Sigma) festettük.

Szuperoxid mérése a tüdőszövetben.

A szuperoxid szinteket dihidroetidiummal (DHE; Sigma) mértük a korábban leírtak szerint (【33,34】). Röviden, 10 μM DHE-t 1 ml előmelegített (37 fokos) PBS-ben adtunk egy 96-lyukú lemezhez, amely 20 ul tüdőszövet-lizátumot tartalmazott. A lemezt 10 percenként, összesen 30 percig olvastuk le 530 nm/620 nm gerjesztő/emissziós szűrőkkel.

Az IL-6 mérése.

A plazma és a BALF IL-6 szintjét ELISA vizsgálattal határoztuk meg ELISA assay kit segítségével, a gyártó utasításai szerint (BD Bioscience).

Statisztika.

Minden adatot GraphPad Prism 7 szoftverrel elemeztünk (San Diego, CA, USA). Az eredményeket az átlag átlag±standard hibájaként (SEM) fejezzük ki. A statisztikai elemzést Student-féle t-próbával és egyirányú varianciaanalízissel, Tukey post hoc eljárásával végeztük. A különbségeket statisztikailag szignifikánsnak tekintettük, ha p-értékek voltak<>

3. Eredmények

1. A vese IR tüdősérülést okoz.

A várakozásoknak megfelelően jelentős morfológiai károsodás avese(1A és B ábra) és a plazma BUN növekedését (1C ábra) figyelték meg 4 és 24 órával 35 perces kétoldali kezelés után.veseischaemia. A tüdőben a neutrofilek számának növekedését és az alveoláris fal megvastagodását figyelték meg 4 és 24 órával azutánveseischaemia (1D. ábra). Ezenkívül a limfocita antigén 6 komplex G6D lókusz (Ly6G, a monociták, granulociták és neutrofilek markere) expressziójának növekedését figyelték meg a tüdőszövetben a reperfúziós időtől függő módon (1E és F ábra). Az interleukin-6 (IL-6) koncentrációja a plazmában ezt követően nőttveseIR, csúcspontja 4 órával az ischaemia után (1G. ábra). Az I-6 és a fehérje koncentrációja, valamint a teljes sejtszám a BALF-ben fokozatosan emelkedett a vese ischaemia után 4 és 24 órával (1H-J ábra). A túlélési arány 24 óra után 35 perc utánveseAz IR körülbelül 92 százalék volt (az adatokat nem mutatjuk be).

MikorveseAz ischaemiás idő 45 percre nőtt, a plazma BUN-koncentrációjának, valamint a BALF-ben a teljes fehérjekoncentrációnak és a sejtszámnak az ischaemiás növekedése nagyobb volt, mint 35 perces ischaemia után (1K-M ábra). Ezek az adatok azt mutatják, hogy a tüdőkárosodást aveseAz IR sérülés mértékétől függvesesérülés.

1. ábra A tüdő szövettani és funkcionális károsodása vese IR után. A C57BL/6 hím egereket 35 (A–M) és 45 (K–M) perces kétoldali vese ischaemiának vagy álműtétnek vetettük alá. Vese4 és 24 órával a műtét után gyűjtöttük a tüdőt, a vért és a BALF-et. A BALF-ot az Anyagok és módszerek részben leírtak szerint gyűjtöttük össze. (A–J) Az egereket 35 perces ischaemia után 4 vagy 24 órával leöltük. (A, B)Vesemetszeteket (3 μm) festettük PAS-szal, ésvesecsősérülést állapítottak meg. (C, K) A BUN koncentrációkat a plazmában mértük. (D) A tüdőmetszeteket (3 μm) H&E-vel festették meg. (E, F) A Ly6G expresszióját a tüdőszövetben Western blottal elemeztük. A GAPDH-t használtuk betöltési kontrollként. A sávok sűrűségét ImageJ szoftverrel mértük. (G, H) Az IL-6 koncentrációt plazmában és BALF-ben mértük. (I, J, L, M) A fehérjekoncentrációt és a teljes sejtszámot BALF-ban mértük. (K-M) Az egereket 35 vagy 45 perces ischaemia után 4 órával leöltük. Az eredményeket átlag ± SEM (n=3–6) formában fejezzük ki. *p < 0.{10}}5="" vs.="" színlelt.="" †p="">< 0,05="" vs.="" 4="" órával="" ischaemia="" vagy="" ischaemia="" után="" 35="">

2. Vese IRa tüdő hámsejtek csillóinak szétesését okozza, és ezek a fragmentumok a BALF-ba szabadulnak fel.

A tüdőszövet metszeteket és a BALF-fel töltött tárgylemezeket anti-ADP-ribozilációs faktor-szerű protein 13B (Arl13B, csillók markere) antitesttel festettük meg. Arll3B pozitív jeleket figyeltünk meg az alveolusok luminális részén és a tüdő terminális hörgőin (2A. ábra). Az Arl13B-pozitív jel elvesztését figyelték meg a tüdejébenveseIR-vizsgálatnak alávetett egerek (2A. ábra). Az Arll13B-pozitív jel elvesztése fokozatosan növekedettveseischaemia idővel (2A. ábra). A BALF-ban különböző hosszúságú Arl13B-pozitív részecskéket figyeltek meg vese ischaemia után, és az Arl13B-pozitív részecskék száma a BALF-ben az ischaemia után idővel fokozatosan növekedett (2B és C ábra). Az Arl13B, az acetilált -tubulin (ac- -tubulin, granulociták és neutrofilek) expresszióját a tüdőszövetben reperfúziós időtől függő módon figyelték meg (1E. és F. ábra). Az interleukin-6 (IL-6) koncentrációja a plazmában ezt követően nőttveseIR, csúcspontja 4 órával az ischaemia után (1G. ábra). Az I-6 és a fehérje koncentrációja, valamint a teljes sejtszám a BALF-ben fokozatosan emelkedett a vese ischaemia után 4 és 24 órával (1H-J ábra). A túlélési arány 24 órával 35 perces vese IR után körülbelül 92% volt (az adatokat nem mutatjuk be).

MikorveseAz ischaemiás idő 45 percre nőtt, a plazma BUN-koncentrációjának, valamint a BALF-ben a teljes fehérjekoncentrációnak és a sejtszámnak az ischaemiás növekedése nagyobb volt, mint 35 perces ischaemia után (1K-M ábra). Ezek az adatok azt mutatják, hogy a tüdőkárosodást aveseAz IR sérülés mértékétől függvesesérülés.

2. ábra: Tüdősejt csillókban és azok fragmenseiben, valamint a BALF-ba felszabaduló fehérjéiben bekövetkezett zavarok a vese IR után.A C57BL/6 hím egereket 35 perces bilaterális vese ischaemiának vagy álműtétnek vetettük alá. A tüdőszövetet és a BALF-et a műtét után 4 és 24 órával összegyűjtöttük az Anyagok és Módszerek részben leírtak szerint. (A) A tüdőmetszeteket (5 μm) immunfluoreszcens festésnek vetettük alá anti-Arl13B antitesttel; zöld Arl13B-pozitív. DAPI-festést (4′,6-diamidino-2-fenilindol; kék) használtunk a sejtmagok megjelenítésére. A nyilak a csillókat jelzik. (B) BALF-ot (10 ul) tettünk egy tárgylemezre, amelyet immunfluoreszcens festéssel festettek meg anti-Arl13B antitesttel; zöld Arl13B-pozitív (n=3). (C) Az Arl13B-pozitív részecskék számát fluoreszcens mikroszkóp alatt megszámoltuk (n=3). (D-G) Az Arl13B, az acetilált- -tubulin (ac- -tub) és a -tubulin (-tub) expresszióját BALF-ben Western-blottal elemeztük. A sávok sűrűségét ImageJ szoftverrel mértük. Az eredményeket átlag ± SEM (n=3) formában fejezzük ki. *p < 0.05="" vs.="" színlelt.="" †p="">< 0,05="" vs.="" 4="" órával="" az="" ischaemia="" után.="" v:="" alveolusok,="" tb:="">

3. A vese IR növeli a szuperoxid és az oxidatív stressz szintjét mind a tüdőszövetben, mind a BALF-ban.

VeseAz IR növelte a szuper-oxid szintjét a tüdőszövetben (3A. ábra), míg csökkentette az IDH2 expresszióját (3B. és C. ábra), de nem csökkentette az MnSOD és a kataláz expresszióját (3B. ábra, DE). Ezek az eredmények azt mutatják, hogy a vese IR által kiváltott tüdőkárosodás a ROS-szint emelkedésével ésoxidatív stressza tüdőben. Ezt alátámasztja, hogy a tüdőszövetben a lipidperoxidáció termékének, a 4-hidroxi nominális (4-HNE) szintje szignifikánsan megemelkedett 4 és 24 órával azután.veseischaemia(3F-D ábra). 4-A HNE szinte minden területen megfigyelhető volt a tüdőszövetben, beleértve az alveolusokat és a hörgőket (3H és D ábra. Továbbá a 8-hidroxi-2'-dezoxiguanozin ({{) 7}}OhdG), a DNS-oxidáció jól ismert markere a dezoxi-guanozin oxidált származékaként, a tüdőhámsejtek citoszoljában és sejtmagjaiban egyaránt megemelkedettveseischaemia (3J és K ábra. A BALF-ban a 4-HNE expresszió is növekedettveseischaemiareperfúziós időtől függő módon (3L. ábra, M). Továbbá, amikor a vese ischaemiás idejét 45 percre növelték, a tüdőben a 4-HNE expresszió poszt-ischaemiás növekedése nagyobb volt, mint 35 perc után.veseischaemia (3N. ábra, O). Ezek az eredmények azt mutatják, hogy mind a mitokondriális DNS, mind a nukleáris DNS oxidatívan sérült a fokozott ROS képződés és az eltávolítási rendszerek károsodása miatt, ami arra utal, hogy a tüdőhámsejt csillóinak károsodásaoxidatív stressz.

3. ábra: Oxidatív stressz a tüdőszövetben vese IR után. A C57BL/6 hím egereket 35 (A–O) és 45 (N, O) perces kétoldali vese ischaemiás vagy álműtétnek vetettük alá.Tüdő ésvese4 és 24 órával 35 vagy 45 perces ischaemia után gyűjtöttük be. (A–M) Az egereket 35 perces ischaemia után 4 vagy 24 órával leöltük. (A) A tüdőszövet szuperoxidszintjét az Anyagok és módszerek részben leírtak szerint mértük (n=3–5). (B–E) Az IDH2, kataláz és MnSOD expresszióját a tüdőszövetben Western blottal elemeztük (n {{10}}). A GAPDH-t használtuk betöltési vezérlőként. (C–E) A sávok sűrűségét ImageJ szoftverrel mértük. (F, G) 4-A tüdőben a HNE-expressziót Western blottal elemeztük, a sávsűrűséget pedig az ImageJ (n=4) segítségével mértük. (H–K) A tüdőmetszeteket (3 μm) immunhisztokémiailag festettük anti-4-HNE és 8-OHdG antitestekkel, majd hematoxilinnel ellenfestettük; barna 4-HNE- és 8-OHdG-pozitív (n {{20}}). (I, K) A 4-HNE- és 8-OHdG-pozitív jelek intenzitását az i-Solution programmal mértük (n=3). (L, M) 4-A BALF-ben a HNE expressziót Western-blottal elemeztük, és a sávsűrűséget az ImageJ (n=3) segítségével mértük. (N, O) Az egereket 35 vagy 45 perces ischaemia után 4 órával leöltük. 4-A tüdőben a HNE-expressziót Western blottal elemeztük, a sávsűrűséget pedig az ImageJ (n=3) segítségével mérték. Az eredményeket átlag ± SEM (n =3–5) formában fejezzük ki. *p < 0,05="" vs.="" †p="">< 0,05="" vs.="" 4="" órával="" az="" ischaemia="" után="" vagy="" 35="" perccel="" az="" ischaemia="" után.="" (a="" jelen="" ábra="" jelmagyarázatában="" szereplő="" színekre="" való="" hivatkozások="" értelmezéséhez="" a="" cikk="" webes="" változata="">

A sejtekben, a mitokondriumokban. egy fő ROS-termelő intracelluláris organellum általában fúzión és hasadáson megy keresztül, hogy alkalmazkodjon a fiziológiás és kóros állapotokhoz. Ezeknek a fúziós és hasadási folyamatoknak a károsodása sejtműködési zavarokat és sejtkárosodást okozhat[36]. Korábbi tanulmányok ezt bizonyítottákoxidatívfeszültségrontja a mitokondriális fúzió és hasadás normál dinamikáját, ami mitokondriális diszfunkcióhoz és sejtkárosodáshoz vezet [32,36-38]. A mitokondriális dinamikát a mitokondriális hasadást és fúziót szabályozó fehérje expressziójának meghatározásával igyekeztünk értékelni. A mitokondriális hasadást szabályozó Fis1 és Drp1 expressziója szignifikánsan megnövekedett az egerek tüdejében.veseischaemia(4A-C. ábra). A mitokondriális fúziót szabályozó OPA1 expresszióját azonban nem változtatta meg szignifikánsan a vese IR (4A, D ábra). Ezek az adatok azt mutatják, hogy az AKI következtében megbomlik a mitokondriális fúzió és hasadás egyensúlya a tüdősejtekben. (Akut vese sérülés).

4. ábra Mitokondriális dinamika változása a tüdőben vese IR után. A C57BL/6 hím egereket 35 perces bilaterális vese ischaemiának vagy álműtétnek vetettük alá.A tüdőt 4 és 24 órával az ischaemia után gyűjtöttük be. (A–D) A Drp1, Fis1 és OPA1 expresszióját a tüdőszövetekben Western blottal elemeztük. A GAPDH-t használtuk betöltési vezérlőként. A sávok sűrűségét ImageJ szoftverrel mértük. Az eredményeket átlag ± SEM (n=4) formában fejezzük ki. *p < 0.05="" vs.="" színlelt.="" †p="">< 0,05="" vs.="" 4="" órával="" az="" ischaemia="">

4. A mitokondrium-specifikus antioxidáns kezelés csökkenti a vese IR által kiváltott tüdőkárosodását és a tüdő csillósérülését.

A mitokondriális szerepének megerősítéseoxidatívfeszültségtovábbveseIR-indukált tüdősérülés és a tüdő hámsejt csillóinak megsértése, megvizsgáltuk, hogy a Mito-TEMPO-val, egy mitokondrium-specifikus antioxidánssal végzett előkezelés (5A-D ábra vagy utókezelés (5J-L ábra) gátolja-e a vese IR-indukálta hatásátoxidatívfeszültség, I-6 termelés és tenyésztés a C57BL/6 hím egerek tüdejében. A Mito-TEMPO-val végzett előkezelés (5A-D. ábra), de nem az utókezelés (5J-L. ábra), szignifikánsan gátolta a BUN- és IL-6-koncentráció növekedését a plazmában (5A. és B. ábra). valamint az IL-6 koncentrációját, a teljes fehérjekoncentrációt és a teljes sejtszámot a BALF-ban (5C-E. ábra). Az Arl13B, ac- -tubulin és -tubulin expressziója a Mito-TEMPO-val előkezelt egerek BALF-jában kisebb volt, mint a vivőanyaggal kezelt egerekben (5F-I. ábra). Ebben a vizsgálatban egy 6-h utókezelés nem védte meg a tüdőt az ellenveseIR (5J-L ábra). Ezek az eredmények azt mutatják, hogy a korai ROS termelés, annak felhalmozódása, illoxidatívfeszültségjelentősen hozzájárulhat az AKI-hoz (Akut vese sérülés)- indukált tüdősérülés. A szuperoxidszint és a 4-HNE expresszió a tüdőszövetben (6A-C. ábra) és a BALF-ban (6D. és E. ábra) kisebb volt a Mito-TEMPO-val előkezelt egerekben, mint a hordozóval kezelt egerekben. Ezek az eredmények azt mutatjákveseAz IR által kiváltott tüdőkárosodás és a tüdő epiteliális sejtjei összefüggenek a mitokondriálisoxidatívfeszültség.

5. ábra: A vese IR által kiváltott tüdősérülésének és a csillók felbomlásának megelőzése Mito-TEMPO-val, egy mitokondrium-célzott antioxidánssal. A C57BL/6 hím egereket 35 perces bilaterális vese ischaemiának vetettük alá.Néhány egeret Mito-TEMPO-val (Mito-T, 0,7 mg/ttkg, ip) adtunk 17 és 1 órával ischaemia előtt, kétszer (A–I) vagy 6 órával ischaemia után (J– L). A tüdőt, a BALF-ot és a vért 24 órával az ischaemia után gyűjtöttük össze. (A, J) Megmértük a BUN koncentrációt a plazmában. (B, C) Az IL-6 koncentrációját a plazmában és a BALF-ben ELISA assay kit segítségével mértük. (D, E, K, L) A BALF fehérjekoncentrációját és sejtszámát mértük. (F–I) Az Arl13B, az acetilált{{10}}tubulin (ac- -tub) és a -tubulin (-tub) expresszióját BALF-ben Western-blot-eljárással elemeztük. A sávok sűrűségét ImageJ szoftverrel mértük. Az eredményeket átlag ± SEM (n=4) formában fejezzük ki. *p < 0,05="" a="" járműhöz="">

A RÉSZÉHEZ KATTINTSON IDE Ⅱ