HPLC ujjlenyomat-készítés és spektrum-tumorellenes hatás kapcsolat a mylabris Phalerata Pallas és a Mylabris Cichorii Linnaeus közötti megkülönböztetéshez

Kapcsolattartó: emily.li@wecistanche.com

Jian-Yong Zhang, Qi-Hong Chen, Xian Pei1, Rong Yan, Can-Can Duan, Yun Liu4, Xiao-Fei Li

1 Gyógyszerészeti Iskola, Zunyi Orvostudományi Egyetem, Zunyi, Kína,

2 Az Oktatási Minisztérium Farmakológiai Alaplaboratóriuma és az Oktatási Minisztérium Etnomedicina Közös Nemzetközi Kutatólaboratóriuma, Zunyi Orvostudományi Egyetem, Zunyi, Guizhou, Kína.

3 Általános Orvostudományi Alaptudományi Iskola, Zunyi Orvostudományi Egyetem, Zunyi, Kína, 4Guizhou Tartományi Főiskolai alapú kulcslabor a tumorok megelőzéséhez és a megkülönböztető gyógyszerekkel történő kezeléséhez, Zunyi Orvostudományi Egyetem, Zunyi, Kína.

Kattintson ide, ha többet szeretne megtudni a Cistanche tumorellenesről

Kiemeli

Ez a tanulmány alkalmazható, hitelesebb és hatékonyabb HPLC-módszert kínál két Mylabris faj megkülönböztetésére. És a HPLC ujjlenyomat és spektrum-tumorellenes hatásokintegrálódtak, és a három fontos differenciáljelölőt megtalálták a Mylabris új jelölőjéhez.

Elvont

Célkitűzés: Két Mylabris faj közötti megkülönböztetés értékelése HPLC ujjlenyomat-vétel és spektrum alapjántumorellenes hatáskapcsolat. Módszerek: Ebben a tanulmányban egy egyszerű és hatékony, nagy teljesítményű folyadékkromatográfiás (HPLC) módszer, amely integrálódik a kemometriás analízissel és a spektrum-tumorellenes hatása Mylabris két faja, a Mylabris phalerata Pallas (MP) és a Mylabris cichorii Linnaeus (MC) közötti megkülönböztetés érdekében alakult ki kapcsolat. Eredmények: Az ujjlenyomat-elemzés során 14 jellemző csúcsot választottak ki az MP és az MC közötti különbségek értékelésére a hasonlóság és a mintafelismerés elemzésével PCA és OPLS-DA segítségével. Kína 10 régiójából származó minták HPLC-kromatogramjai különbséget mutattak az MP és az MC között, és 7 jellegzetes kémiai markert találtunk. A spektrumban-tumorellenes hatáskapcsolatelemzés, 4 aktivitási marker létfontosságú szerepet játszott az IC50 csökkentésében, és a Mylabris tumorellenes komponensei lehetnek szürke relációs analízissel és többváltozós lineáris regresszióanalízissel. A kemometrikus elemzés spektrum-effektus összefüggésekkel kombinálva azt mutatta, hogy a 2. (citozin), a 4. (ismeretlen) és a 14. (ismeretlen) csúcsok fontos differenciáljelölők voltak a Mylabris két fajának megkülönböztetésében.

Következtetés: A módszer alkalmazható, hiteles és hatékonyabb a parlamenti képviselők és mc megkülönböztetésére, és új módot kínál a rovargyógyszerek minőségellenőrzésének megkönnyítésére.

Kulcsszavak: HPLC, ujjlenyomatvétel, spektrum-tumorellenes hatás, Mylabris, Diszkrimináció

Háttér

A Mylabrist, amelyet Kínában ban mao-nak hívnak, hagyományos kínai orvoslásként (TCM) használták furuncle, mélyen gyökerező fekélyek, hasi tömeg kezelésére, és fontostumorellenesügynök. Ezenkívül Európában széles körben használják népi gyógyászatként [1]. A Mylabris fő aktív összetevője a kantharidin, amely hatékonytumorellenesvegyület [2]. A modern farmakológiai vizsgálatok kimutatták, hogy a Mylabrisnak több tevékenysége van, és kettőssége miatt nagyra értékelik a daganatok kezelésébenrákellenestulajdonságok és a leukociták számának növelésére való képesség [3-4]. Jelenleg a Mylabris-t széles körben alkalmazzák néhány klinikai karcinóma elleni TCM receptben Kínában, mint például az Aidi injekció és a Compound ban mao kapszula.

A Kínai Népköztársaság gyógyszerkönyve (2015-ös változat) szerint a Mylabris a Mylabris phalerata Pallas (MP) és a Mylabris cichorii Linnaeus (MC) szárított testeként határozható meg, amelyek botanikai jellemzőikben, populációdinamikájukban és ökológiájukban különböznek [5-6]. A Mylabris szintén nagyon mérgező gyógyszer. Mivel a Kínában rendelkezésre álló gyógyszerek általában az MP és az MC keverékei, meg kell határozni a két faj közötti kémiai és aktivitási különbségeket.

Mivel a TCM-ek számos ismert és ismeretlen összetevőt tartalmaznak, kémiai összetevőik kvantitatív profilelemzése jelentős kihívást jelent. A nagy teljesítményű folyadékkromatográfiás (HPLC) ujjlenyomatok fontos szerepet játszanak a TCM minőségellenőrzésében (QC), mivel egy komplex rendszerben a legtöbb vegyület általános profiljellemzői vannak. Ezenkívül a TCM-ek ujjlenyomat-elemzése jó reprodukálhatósággal és stabilitással rendelkezik a fajok hitelesítéséhez és a minőségértékeléshez, és azt az Egészségügyi Világszervezet, a Kínai Állami Élelmiszer- és Gyógyszerügyi Hivatal (SFDA) és az Európai Gyógyszerértékelő Ügynökség (EMEA) is elfogadja. A közelmúltban kifejlesztettek egy kemometrikus elemzést, amely ötvözi a HPLC ujjlenyomatokat a QC-hez és a különböző összetett természetes források megkülönböztetéséhez [7]. Nem hatékony azonban megkülönböztetni a TKK-ok közötti különbségeket, mivel nem tudja tükrözni az aktív összetevők közötti különbségeket, ami a klinikai alkalmazás szempontjából fontosabb. Eddig a spektrum-tumorellenes hatáskapcsolat megközelítéseket alkalmaztak a TCM-ek bioaktív összetevőinek sikeres azonosítására [8]. A HPLC ujjlenyomatok kemometrikus analízissel és spektrum-tumorellenes effektus kapcsolattal kombinálva jobban megvilágítják a TCM-ek több forrásának különbségét.

A közelmúltban néhány módszert jelentettek a kantharidin tartalmának meghatározására, amelyek felhasználhatók a Mylabris minőségének meghatározására [9]. Néhány kromatográfiás ujjnyomtatást is alkalmaztak a QC-re [10-11]. Csak egy tanulmány alkalmazott olyan módszert, amely magában foglalta a Mylabris vízben oldódó vegyületeinek HPLC-n alapuló gradienselú elúcióját. Eközben csak tíz mintát használtak fel, és nem használtak MC-mintát [12]. Legjobb tudomásunk szerint az MP és MC kémiai összetétel és aktivitás alapján történő megkülönböztetését még nem vizsgálták.

Ennek a tanulmánynak az volt a célja, hogy egy egyszerű és hatékony módszert dolgozzon ki a Mylabris két fajának megkülönböztetésére HPLC ujjlenyomattal, kemometriai elemzéssel és spektrummal kombinálva.tumorelleneshatáskapcsolat, amely alapot ad a Mylabris QC-jének. Ez a módszer más TKM-ek minőség-ellenőrzési markerének azonosítására is alkalmazható.

Anyagok és módszerek

Összesen 20 adag Mylabris phalerata Pallas (MP) és Mylabris cichorii Linnaeus (MC) gyűjtött össze Kína különböző tartományaiból (1. táblázat), és profánunk, Xiao-Fei Li azonosította. Az utalványokat laboratóriumainkban helyeztük el.

A citozin, az uridin, a guanozin és az adenozin referenciastandardot a ChengduPush Biotechnology Co., Ltd.-től (Chengdu, Kína) vásárolták. A HPLC minőségű acetonitrilt és metanolt a Thermofisher Scientific-től (Fairlawn, NJ, USA) vásárolták. Watson tiszta vizét használták a vizsgálat során. Más vegyi anyagok és oldószerek analitikai minőségűek voltak, és Aladdin Reagent (Sanghaj, Kína), Chengdu Kelong Reagens (Chengdu, Kína) és Sinopharm Chemical Reagent (Peking, Kína)

Készülék és kromatográfiás körülmények

A HPLC-elemzést Egy Agilent 1260 Infinity HPLC rendszerrel végeztük 30 °C-on, Phenomenex Synergy Polar-RP80 (4,6 mm ×250 mm, 5 μm) ujjnyomatvételre. Az elválasztáshoz lineáris gradiens elúciót használtunk A eluensekkel (víz/jégecetsav, 100:1, v/v) és B-vel (metanol). A gradiens programot a következőképpen fejlesztették ki: 0-1 perc, 3,0-4,6% B; 1-9 perc, 4,6-6,8% B; 9-25 perc, 6,8-51,0% B; 25-30 perc, 51,0-100%. A mozgó fázis áramlási sebessége 1,0 ml/perc volt. A kromatogramot 254 nm-en figyeltük. 15 perces egyensúlyi időszak után 10 μl mintát használtunk fel az injekcióhoz.

A minta előkészítése

A szárított mintákat porrá aprítottuk, és minden porított mintából kétszer 2,5 g-ot extraháltunk 50 ml 75%-os etanollal reflux útján, minden alkalommal 1,5 órán keresztül. A kivont mintát összekevertük, és 20 ml-re csökkentett nyomás alatt koncentráltuk. Az elegyet ezután 80 ml vízzel 24 órán át 4 °C alatt kicsaptuk. Ezt követően a kivonatot 3000 g min-1-es centrifugálással centrifugáltuk 10 percig, hogy szétválasszuk a felülúszót. A felülúszót 25 ml-re csökkentett nyomás alatt koncentrálták. Végül a felülúszót egy 0,22 μm-es Millipore-filmen keresztül szűrtük a HPLC-elemzés előtt.

Módszertan validálása

A HPLC-módszert validáltuk a pontosság, a reprodukálhatóság és a stabilitás szempontjából (0 óra, 2 óra, 4 óra, 8 óra, 12 óra, 24 óra). A validálást a retenciós idő (RT) és a csúcsterület (PA) alapján becsülték meg. Végül 20 darab Mylabris-tételből álló kémiai ujjlenyomatokat hoztak létre több vegyület integrált kémiai jellemzőinek azonosítására. Néhány kemometrikus technikát vezettek be a kémiai ujjlenyomaton elemzés céljából.

Mintafelismerési elemzés

A csúcsterületek két faja közötti különbségeket páratlan Student t-teszt segítségével értékeltük statisztikai szignifikancia szempontjából. A 0,05-nél kisebb p-értéket statisztikailag szignifikánsnak tekintették. Klasszikus felügyelet nélküli módszerként a főkomponens-elemzést (PCA) széles körben alkalmazzák a statisztikai adatelemzéshez. Ahelyett, hogy sok változót használna, a PCA kis számú számítógépet vesz igénybe anélkül, hogy sok információt veszítene, majd a pontszámdiagramokat a megfigyelések szabad elkülönítése érdekében vizualizálják. Ebben a tanulmányban a PCA-t a HPLC ujjlenyomatok egyes összetevőinek normalizált csúcsterületein végezték a SIMCA-P +14.0 szoftver (Umetrics, Umea, Svédország) segítségével, hogy megtalálják a Mylabris két faja közötti megkülönböztetést.

A két Mylabris faj közötti előnyösebb megkülönböztetés érdekében az ortogonális parciális legkisebb négyzetek diszkrimináns analízisének (OPLS-DA) felügyelt módszerét alkalmaztuk a HPLC ujjlenyomatok egyes komponenseinek normalizált csúcsterületein mutatkozó különbségek elemzésére. A VIP érték az OPLS-súlyok négyzeteinek súlyozott összege, amely tükrözi az egyes X változók modellhez való relatív hozzájárulását. A VIP > 1-gyel rendelkező változókat az S-diagrammal együtt befolyásosnak tekintették a minták szétválasztására az OPLS-DA elemzésből generált pontszámdiagramokban. Ezután megkaptuk a megkülönböztetés jellegzetes kémiai markereit.

Spektrum-tumorellenes hatás kapcsolat analízis

Felfedezni atumorellenesaz ujjlenyomatadatokkal integrált Mylabris-minták csúcsterületének hatáspontja, és hasonlítsa össze a két faj közötti különbségeket, az ujjlenyomat csúcsa és az ujjlenyomat-csúcs közötti korrelációtanti-daganathatásokat vizsgáltak. Az SPSS19.0 (IBM, USA) és a GM6.0 lágy (Grey Systems Theory Institution, NUAA, Kína) két módszert alkalmazott, amelyek ötvözik a szürke relációs analízist és a többváltozós lineáris regresszióanalízist (MLRA). Aanti-daganata tesztet publikált módszereinkkel végeztük [12], a humán hepatocelluláris karcinóma sejtvonal HepG2 sejtvonalát RPMI1640 táptalajban tartottuk fenn, kiegészítve 10% magzati szarvasmarha szérummal. A sejteket párásított légkörben növesztettük, amely 5% CO2-t tartalmazott 37 C-on. Az ESZT-módszert alkalmazták aanti-daganatTevékenységek, majd kiszámítottuk a HepG2 sejtek IC50-jét, végül az IC50-et és a normalizált csúcsterületeket használtuk a kemometrikus elemzéshez. Ezután megkapták a Mylabris jellegzetes aktivitásjelzőit.

Eredmények és vita

A kivonat feltételeinek optimalizálása

A Mylabris víz-oldott vegyületeinek megfelelő extrakciójához optimalizálták az extrakciós rendszert. Ultrahangos és refluxing azt mutatta, hogy ezeket a vegyületeket optimálisan ki lehet vonni refluxálással.

HPLC módszer optimalizálása

A gyógynövény általános jellemzőjének leírására szolgáló maximális kromatográfiás csúcsok elérése érdekében megvizsgálták a kromatográfiás oszlop, a mobil fázis és a detektálási hullámhosszak (200, 254, 265 és 278 nm) összetételét. Az eredmények azt mutatták, hogy a Phenimenex Synergy Polar-RP80 oszlop, a víz (amely 1% jégecetsavat tartalmaz) és a metanol, valamint a 254 nm volt a legjobb feltétel a Mylabris HPLC analízishez (1. ábra), 4 standard anyag szerkezetét a 2. ábra mutatja.

Módszer érvényesítése

Ebben a tanulmányban 14 csúcsot jól elválasztottak egymástól, és "közös csúcsként" használták. A pontosság, az ismételhetőség és a stabilitás a retenciós időn (RT) és a csúcsterületen (PA) alapult. Az RT és PA pontosságra vonatkozó RSD-értékei (n = 6) nem haladták meg a 0,2,2,illetve a 4% -ot; Az RA és PA megismételhetőségre vonatkozó RSD-értékei (n = 6) 0,2, illetve 4% alatt voltak, és a stabilitás RSD-értékei (0-24 óra) 0,4% -nál, illetve 5% -nál kisebbek voltak, ami azt mutatta, hogy a minták 24 órán belül stabilak voltak. Ezek az eredmények azt mutatták, hogy a vizsgált minták és a HPLC-módszer minősége stabil és jól kontrollált volt.

Ujjlenyomat-hasonlóságok értékelése

Az ujjlenyomat-hasonlóság elemzését a HPLC-csúcsok hasonlóságának értékelésére használtuk. Az MP és az MC hasonlóságait a referencia HPLC ujjlenyomat alapján számítottuk ki. Amint azt az 1. táblázat mutatja, két MP-minta (Guizhou2-ből és Guizhou5-ből) kivételével, amelyek kisebb hasonlóságokkal (0,880 és 0,920) rendelkeztek, az MP más mintáit >0,930-ra. Az MC minták hasonlóságai >0,921 voltak, kivéve az MC mintákat (Guizhou2-ből és Guizhou4-ből), amelyek hasonlósága 0,888, illetve 0,887 volt. Ezek az adatok azt mutatták, hogy a Mylabris minősége egy fajon belül stabil volt. A referencia HPLC-ujjlenyomattal összehasonlítva azonban csak három MP-minta hasonlósága volt > 0,930-ra; és csak két MC minta hasonlósága a referencia HPLC ujjlenyomattal összehasonlítva > 0,921 volt. Ezek az eredmények azt mutatták, hogy a Mylabris két faja jelentős eltéréseket mutatott egyes csúcsterületeken.

Mp és MC megkülönböztetése mintafelismerési elemzéssel

A különbség globális elemzéséhez PCA-t használtunk a Mylabris két fajából származó minták minőségi változásának megtalálására. A 3. ábra azt mutatja, hogy a kétdimenziós PCA modellt az első két számítógép építette, amelyek az eredeti adatok körülbelül 61,8% -át tették ki. A pontszámdiagram azt mutatta, hogy az MP és AZ MC mintákat nem lehet PCA-val elválasztani. Az MP és az MC közötti különbségek megértéséhez egy OPLS-DA modellt hoztak létre. Amint az a 4. ábrán látható, a Mylabris-minták két csoportba sorolhatók: R2X=0,502, R2Y=0,492 és Q2=0,0769 a PCA modellhez képest. Ezek az eredmények azt mutatták, hogy az OPLS-DA modell alkalmasabb volt a PCA-modellnél a vizsgálati minták különböző komponenseken alapuló különálló elválasztására. Az OPLS-DA S-parcellájából az MP és AZ MC közötti 1., 2., 4., 7., 9., 12. és 14. csúcsokat tartalmazó csúcsjelölőket tartalmazó csúcsjelölők találhatók (5. ábra). A VIP>1 alapján az 1., 2., 4., 7., 9., 12. és 14. csúcsok lehetnek a legjelentősebb változók a két faj közötti megkülönböztetésben (6. ábra). A csúcscsoport (1, 2, 4, 7, 9, 12 és 14) létfontosságú szerepet játszhat az MP és az MC mint jellegzetes kémiai markerek megkülönböztetésében.

Spektrum-effektus kapcsolat szürke relációs analízissel

A normalizált csúcsterület és az IC50 változásai közötti kapcsolat további értékeléséhez szürke relációs elemzést (GRA) végeztünk. A normalizált csúcsterület szerinti hatástávolság P13>P14>P3>P2>P12>P4>P9>P1>P10>P7>P6>P8>P5> P11 volt, amint azt a 2. táblázat mutatja. Az eredmények azt mutatták, hogy a top-6 csúcs, beleértve a 13., 14., 12., 2., 3. és 4. csúcsokat, a tumorellenes hatás fő befolyásoló tényezői voltak a relatív szürke korrelatív fok (RGCE) >0,75-ös szabványa alapján.

Spektrum-effektus kapcsolat az MLRA-tól

MLRA modell a leggyakoribb modellezési módszer a két vagy több változó és a következő képlettel felépített válasz közötti kapcsolat összetettségének levezetésére

Ahol Y a becsült érték és a választ képviseli; Xn egy független változó, b0 az elfogás, bn pedig az Xn regressziós együtthatója. Ebben a tanulmányban az MLRA-t alkalmazták a HPLC ujjlenyomatok csúcsterületeinek értékei és az anti-HepG2 IC50 értékei közötti ujjlenyomat-hatékonysági kapcsolat megállapítására, majd a lehetséges tumorellenes komponensek megtalálására. Az adatok kollineációját egy közös MLRA-modell találta meg, amely nem alkalmas az Y (IC50) és az X (PA) közötti korreláció feltárására. Az ujjlenyomat-hatás kapcsolat tanulmányozására PCA MLRA modellt használtunk, és az első hat pc-t, amelyek kumulatív variancia-hozzájárulási arányával rendelkeztek: 91,068% -ot választottak elemzésre. Végül a következő egyenletet állapítottuk meg az SPSS kimenet és a PC-k szerint: IC50=1,115864 +( 1,87268PA1- 699,722PA2 + 25,7138PA3 - 24,1528PA4 + 7,22878PA5 - 40,2114PA6 + 2,95283PA7- 15,5305PA8 + 13,0297PA9 + 22,5683PA10 - 10,3462PA11 + 123,762PA12 + 31,0428PA13 - 10,702PA14) ×10-6. (R 0,682 volt, P<>

Két Mylabris faj integrálásával történő elemzése

A kísérlet azt mutatta, hogy a HPLC ujjlenyomatok felhasználhatók a Mylabris kémiai jellemzőinek tükrözésére. A hasonlósági algoritmusokat, a PCA-t és az OPLS-DA-t alkalmaztuk az MC és az MP közötti különbség megtalálására. A csúcscsoportot (1, 2, 4, 7, 9, 12 és 14) jellegzetes kémiai markerekként határozták meg.

Ezenkívül mind a GRA, mind az MLRA kielégítő módszernek bizonyult a további megkülönböztetéshez. A GRA és MLRA elemzési eredmények integrálásával a 2., 4. és 14. csúcsoknak, mint a Mylabris aktivitási markereinek felelősnek kell lenniük a tumorellenes hatásért, amely a Mylabris farmakodinámiás anyagalapja lehet.

A fontos differenciáljelölőket a csúcsra jellemző kémiai és aktivitásjelző tulajdonságokkal határoztuk meg. Tehát a spektrum-hatás kapcsolatelemzés után a HPLC ujjlenyomatokon lévő MC és MP között a 2. (citozin), a 4. (ismeretlen) és a 14. (ismeretlen) csúcsok fontos differenciáljelölők voltak az MP és AZ MC közötti különbségek szempontjából, amint azt a 7. ábra mutatja.

Következtetés

Meggyőző módon a jelenlegi kutatásban hplc-módszert javasoltak az MP és MC kémiai ujjlenyomatvételére. A HPLC ujjlenyomat-készítés, a PCA és a spektrum-hatás kapcsolatelemzés, például a GAS és az MLRA kombinálásával a Mylabris két közeli fajának kémiai és farmakológiai tulajdonságait lehet megkülönböztetni. Ez azt jelezte, hogy a 2(citozin), a 4(ismeretlen) és a 14-es (ismeretlen) csúcsok vegyületei, mint fontos differenciáljelölők domináns szerepet játszottak az MP és az MC megkülönböztetésében. A 4. és 14. csúcs szerkezetét más technológiával kell azonosítani. A HPLC ujjlenyomat-készítés módszere statisztikai, kemometrikus analízissel és spektrum-hatás kapcsolatelemzéssel kombinálva hatékonynak bizonyult a marker komponensek felfedezésében vagy a QC népszerűsítésébengyógynövénykészítmények.

Hivatkozások

1 Wang GS. A Mylabris orvosi felhasználása az ókori Kínában és a legújabb tanulmányok. J Ethnopharmacol 1989, 26(2): 147-162.

2. Lin YS, Lia YH, Peng ZP és mtsai. Kantharidin-tartalom meghatározása és gátló hatása a humán hepatoma HepG2 sejtekre. Biomed Res-India 2016, 27(2): 533-536.

3. Xu MZ, Lee WS, Kim MJ és mtsai. Acil-CoA: a Mylabris phalerate Pallas-ból izolált zsírsav-amidok koleszterin-aciltranszferáz-gátló aktivitása. Bioorg Med Chem Lett 2004, 14(16): 4277-4280.

4. Day RM, Harbord M, Forbes A és mtsai. Kantharidin hólyagok: a leukocita-kereskedelem és a citokintermelés vizsgálatára szolgáló technika az emberek gyulladásának helyén. J Immunol módszerek 2001, 257(1-2): 213-220.

5. Mo RY, Sun NX, Peng R. Tanulmány a felnőtt Mylabris phalerata preferált ételeiről különböző földrajzi populációkban. Zhongguo Zhong Yao Za Zhi 2014, 39(22): 4293-4296.

6. Wang XM, Cheng XS, Li XF. A Meloidae biológiai jellemzői és mesterséges táplálása. Guizhou Mezőgazdasági Tudományok (Chin) 2007, 35(2): 140-142.

7. Yang Y, Zhang J, Jin H, et al. Kvantitatív elemzés ujjlenyomat-technológiával és kemometrikus elemzéssel kombinálva, amelyet hat vadon élő párizsi faj értékelésére alkalmaztak UHPLC-UV-MS használatával. J Anális módszerek Chem 2016: e3182796.

8. Liu Y, Liu Z, Sun G és mtsai. A Compound Bismuth Aluminate tabletták minőségi konzisztenciájának monitorozása és értékelése egyszerű, kvantált arányú ujjlenyomat módszerrel, öt vegyület egyidejű meghatározásával kombinálva és az antioxidáns aktivitással korrelálva. Plos One 2015; 10: e0118223.

9. Mehdinia A, Asiabi M, Jabbari A és mtsai. Kantharidin elemzése hamis buborékcsomagolású bogarakban (Coleoptera: Oedemeridae) fejtéri szilárd fázisú mikroextrakcióval és gázkromatográfiás-tömegspektrometriával. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci 2011, 879(27): 2897-2901.

10. Li XM, Xiao JS. Tanulmány a Mylabris phalerata GC ujjlenyomatairól. China Journal of Hospital Pharmacy (Chin) 2010; 30(2): 116-119.

11. Luo CX, Sun, GX és Shi XF. Digitalizált ujjlenyomatok a Mylabris by HPCE-től. Central South Pharmacy (Chin) 2008; 6(2): 230-235.

12. Sun GX, Luo CX és Wang, Z. Tanulmány a Mylabris digitalizált HPLC ujjlenyomatairól. Chinese Journal of Pharmaceutical Analysis (Chin) 2008;28(7): 1031-1036.

13. Guo K, Li XF, Yan R és mtsai. A Guizhou tartományból és a környező régiókból származó kantharidin anti-humán hepatocelluláris karcinóma HepG 2 sejtaktivitása. Journal of Modern Medicine &Health (Chin) 2016; 32(5): 648-650.