A legaktívabb probiotikus törzsek in vitro értékelése, amelyek képesek javítani a bélrendszeri gát funkcióit és megelőzni a gyomor-bélrendszer gyulladásos betegségeitⅡ

2. Anyagok és módszerek

2.1. Sejtkultúrák

Humán kaukázusi vastagbél-adenokarcinóma Caco{{0}} sejteket (ATCC® HTB-37™) és humán vastagbél epiteliális nyálkakiválasztó HT29-MTX sejteket (Sigma Aldrich) először külön tenyésztettünk. DMEM (Gibco) táptalaj kiegészítve 10% magzati szarvasmarha szérummal (Gibco), 100 NE/ml penicillinnel, 100 mg/ml sztreptomicinnel (Gibco) és 2 mM glutaminnal (Gibco), 37 ◦C-on, 5% CO2 atmoszférában. Ezután a kotenyészeteket 12-wellTranswell® lemezeken (12 mm-es polikarbonát betéttel és 0,4 µm-es pórusokkal) állítottuk be úgy, hogy a sejteket a bazolaterális rekeszbe 75:25 Caco-2:HT arányban szélesztik. 29-MTX, és 21 napig végezték, 2 naponta cserélve a médiumot.

Kattintson a székrekedés gyors enyhítésére

2.2. Bakteriális törzsek

Lactobacillus törzsek, köztük a bivalytejből izolált Limosilactobacillus fermentum [32], a Levilactobacillus brevis SP-48, a Lacticaseibacillus rhamnosus IMC501, a Limosilactobacillus reuteri LR92 és a Lacticaseibacillus reuteri LR92 és a Lacticaseibacillus paracasei projekt, amelyet a Farmceatica és Incbe2aticuIBSA IMCcea, Inc. Italia, bioreaktoros fermentációban termesztették eljárásokat és fagyasztva szárítjuk, hogy megkapjuk a kiindulási anyagként használt porokat. A kísérlet előtt a porokat újraszuszpendáltuk, és Man, Rogosa és Sharpe táplevesben (MRS-Oxoid) növesztettük 37 °C-on mikroaerofil körülmények között 24 órán át.

2.3. Sejtkezelés

Az együtt tenyésztett sejteket különböző Lactobacillus spp. törzsekkel kezeltük. (108 CFU/ml) 100-as fertőzési többszörösen (MOI), önmagában vagy 20 µg/ml S. Typhimurium lipopoliszachariddal (LPS) kombinálva, 24 órán keresztül 37 ◦C-on 5% CO2-n DMEM-ben, antibiotikumok nélkül.

2.4. Valós idejű PCR

A pro- és gyulladásgátló citokinek, a HBD-2 és a TJ expressziójának értékeléséhez a kezelések végén a sejteket háromszor mostuk steril PBS-sel, és a teljes RNS-t High Pure RNA Isolation Kit segítségével extraháltuk. Roche Diagnostics). Összesen 2{{20}}0 ng sejt RNS-t írtak át (Expand Reverse Transcriptase, Roche) komplementer DNS-vé (cDNS) véletlenszerű hexamer primerek (randomhexamerek, Roche) segítségével 42 ◦C 45 percig, a gyártó utasításai szerint. Valós idejű PCR IL-6, IL-8, TNF-, IL-1, TGF-, HBD-2, Occludin, Zonulin-1 és Claudin{{ 14}} az LC Fast Start DNA Master SYBR Green kittel (Roche Diagnostics) hajtottuk végre, 2 µL cDNS felhasználásával, ami 10 ng teljes RNS-nek felel meg 20 µl végső térfogatban, 3 mMMgCl2 és 0,5 µM szensz és antiszensz primerek ( Asztal 1). Az amplifikációt követően az olvadási görbe elemzését úgy végeztük, hogy 15 s-ig 95 ◦C-ra melegítettük 20 ◦C/s hőmérséklet-átmeneti sebesség mellett, majd 15 s-ig hűtöttük 60 ◦C-ra 20 ◦C/s hőmérséklet-átmeneti sebességgel, majd a mintát 0,1 ◦C/s-on 95 ◦C-ra melegítjük. Az eredményeket ezután LightCycler szoftverrel (Roche Diagnostics) elemeztük. Az egyes primerpárok standard görbéjét cDNS sorozathígításaival hoztuk létre. Minden PCR-t három párhuzamosban futtattunk. A sajátosságAz amplifikációs termékek mennyiségét 2%-os agaróz gélen végzett elektroforézissel és etidium-bromid festéssel végzett vizualizálással ellenőriztük [6].

2.5. ELISA vizsgálat

IL-6, IL-8, IL-1, TNF-, TGF-, HBD-2, Zonulin-1, Occludin és Claudin{{7} jelenléte }} a különböző laktobacillustörzsekkel fertőzött Caco-2/HT29-MTX sejtlizátumokban LPS-sel vagy anélkül enzimhez kötött immunszorbens vizsgálattal (ELISA; Invitrogen, IL{{12) elemeztük. }}, IL-8, IL-1 alfa, TNF alfa és TGF béta-1 HumanELISA Kit; Phoenix Pharmaceuticals, Inc. Defensin 2, béta (humán) – ELISA Kit; Elabscience Biotechnology Inc. Human Zonulin, Human OCLN (Occludin) és Human CLDN1 (Claudin 1) ELISA Kit).

2.6. Adhéziós és invazivitási vizsgálat

Három különböző kísérleti típusban vizsgálták a L. brevis, L. reuteri és L. rhamnosus S. Typhimurium és EIEC adhéziós és invazivitási képességét csökkentő képességét intestinalis kokultúrákban: (i) kompetitív assay, amelyben a bélhámsejteket egyidejűleg inkubálták. lactobacillusokkal (108 CFU/ml) és S. Typhimuriumor EIEC-vel (108 CFU/ml) 2 órán keresztül. (ii) Gátlási vizsgálat, amelyben a sejteket előinkubáltuk laktobacillusokkal (108 CFU/ml) 2 órán át, majd S. Typhimuriumot vagy EIEC-t (108 CFU/ml) adtunk hozzá, és további 2 órán át inkubáltuk. (iii) Kiszorítási vizsgálat, amelyben a sejteket S. Typhimuriummal vagy EIEC-vel (108 CFU/ml) előinkubáltuk 2 órán át, majd lactobacillusokat (108 CFU/ml) adtunk hozzá, és tovább inkubáltuk 2 órán át. Ennek az időnek a végén a fertőzött egyrétegű rétegeket alaposan mostuk PBS-ben, majd 0,1%-os Triton X-100 (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) PBS-ben készült oldatával lizáltuk 10 percig a szobában. hőmérséklet az internalizált baktériumok megszámlálásához. A sejtlizátumok alikvotjait sorozathígítottuk és Hektoen agarra (OXOID) szélesztettük, és 37 ◦C-on inkubáltuk egy éjszakán át, hogy meghatározzuk az összes életképes sejthez kapcsolódó baktérium mennyiségét (CFU/ml). Az invazivitás vizsgálatokhoz a baktériumokkal való inkubációt követően a fertőzött egyrétegű rétegeket alaposan megmostuk steril PBS-sel, és további 2 órán át inkubáltuk DMEM tápközegben, amelyet gentamicinszulfáttal (250 µg ml–1) (Sigma-Aldrich) egészítettünk ki az extracelluláris baktériumok elpusztítására. majd a sejteket lizáltuk és szélesztettük a korábban leírtak szerint, hogy meghatározzuk az internalizált baktériumok teljes számát (CFU/ml).

2.7. Statisztikai analízis

A csoportok közötti szignifikáns különbségeket a GraphPad Prism 8 segítségével végzett kétirányú ANOVA segítségével értékeltük.0, az átlagok összehasonlítását pedig aStudent-féle t-próbával számítottuk ki. Az adatokat három független kísérlet átlaga ± standard deviációja (SD) fejezi ki.

Természetes növényi gyógyszer a székrekedés enyhítésére-Cistanche

A Cistanche az Orobanchaceae családjába tartozó parazita növények nemzetsége. Ezek a növények gyógyászati ​​tulajdonságaikról ismertek, és évszázadok óta használják őket a hagyományos kínai orvoslásban (TCM). A Cistanche fajok túlnyomórészt Kína, Mongólia és Közép-Ázsia más részein találhatók száraz és sivatagi régiókban. A Cistanche növényeket húsos, sárgás száruk jellemzi, és potenciális egészségügyi előnyeik miatt nagyra értékelik. A TCM-ben úgy gondolják, hogy a Cistanche tonizáló tulajdonságokkal rendelkezik, és általában a vese táplálására, a vitalitás fokozására és a szexuális funkciók támogatására használják. Az öregedéssel, fáradtsággal és általános jóléttel kapcsolatos problémák kezelésére is használják. Míg a Cistanche-t régóta használják a hagyományos orvoslásban, a hatékonyságával és biztonságosságával kapcsolatos tudományos kutatások jelenleg is folynak és korlátozottak. Ismeretes azonban, hogy különféle bioaktív vegyületeket tartalmaz, például fenil-etanol-glikozidokat, iridoidokat, lignánokat és poliszacharidokat, amelyek hozzájárulhatnak gyógyhatásaihoz.

Wecistanche-écisztanche por, cisztanche tabletta, cisztanche kapszula, és más termékek felhasználásával készülteksivatagcistanchealapanyagként, melyek mindegyike jó hatással van a székrekedés enyhítésére. A konkrét mechanizmus a következő: A Cistanche a hagyományos felhasználása és bizonyos vegyületei alapján feltételezhetően potenciális előnyökkel jár a székrekedés enyhítésében. Míg a Cistanche székrekedésre gyakorolt ​​hatásával kapcsolatos tudományos kutatások korlátozottak, úgy gondolják, hogy számos olyan mechanizmusa van, amelyek hozzájárulhatnak a székrekedés enyhítésére. Hashajtó hatás:CistancheA hagyományos kínai gyógyászatban régóta használják székrekedés elleni gyógyszerként. Úgy gondolják, hogy enyhe hashajtó hatása van, ami elősegítheti a bélmozgást és székrekedést okozhat. Ez a hatás a Cistanche-ban található különféle vegyületeknek tulajdonítható, mint például a fenil-etanoid glikozidok és poliszacharidok. A belek nedvesítése: A hagyományos használat alapján a Cistanche hidratáló tulajdonságokkal rendelkezik, különösen a beleket célozza meg. A belek hidratálásának és kenésének elősegítése segíthet a szerszámok lágyításában és megkönnyítheti a járást, ezáltal enyhíti a székrekedést. Gyulladáscsökkentő hatás: A székrekedés néha emésztőrendszeri gyulladással járhat. A Cistanche bizonyos vegyületeket tartalmaz, köztük fenil-etanol-glikozidokat és lignánokat, amelyekről úgy gondolják, hogy gyulladásgátló tulajdonságokkal rendelkeznek. Azáltal, hogy csökkenti a bélgyulladást, javíthatja a bélmozgást és enyhítheti a székrekedést.