A TLR9 aktiválása aberráns IgA glikozilációt indukál APRIL- és IL-6-közvetített útvonalakon keresztül IgA nefropátiában

Kapcsolatba lépni:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Yuko Makita1, Hitoshi Suzuki1, Toshiki Kano1, Akiko Takahata1, Bruce A. Julian2,3, Jan Novak3 és Yusuke Suzuki1

KULCSSZAVAK: ÁPRILIS; galaktózhiányos IgA1; IgA nefropátia; IL-6; immunkomplex

A galaktózhiányos IgA1 (Gd-IgA1) döntő szerepet játszik aIgA nefropátia(IgAN). A Gd-IgA1 termelést előidéző ​​patogén mechanizmusok azonban nem teljesen tisztázottak. Ismeretes, hogy a Toll-like receptor 9-en (TLR9) keresztül történő veleszületett immunaktiváció részt vesz a Gd-IgA1 termelésben. Egy proliferációt indukáló ligandum (APRIL) és az IL-6 is ismert, hogy fokozzák a Gd-IgA1 szintézist az IgAN-ban. Ennek hátterében azt vizsgáltuk, hogy az IgA-t szekretáló sejtekben a TLR9 aktiválása hogyan eredményez nefritogén IgA túltermelést az IgAN-ra hajlamos ddY egérben és a humán IgA{14}}szekretáló sejtekben. A TLR9 ligandum CpG-oligonukleotidjainak injektálása megnövelte az aberránsan glikozilált IgA és IgG-IgA immunkomplexek képződését ddY egerekben, ami viszont súlyosbítottavese sérülés. A CpG-oligonukleotiddal stimulált egerekben megemelkedett az APRIL szérumszintje, ami korrelált a rendellenesen glikozilált IgA és IgG-IgA immunkomplexek szintjével. In vitro,TLR9 aktiválásfokozta a nefritogén IgA, valamint az APRIL és az IL-6 termelődését ddY egerek lépsejtekben és humán IgA1-szekréciós sejtekben. Az APRIL siRNS leütése azonban teljesen elnyomta a Gd-IgA1 IL-6 által kiváltott túltermelését. Az IL-6 semlegesítése csökkentette a CpG-oligonukleotidok által kiváltott Gd-IgA1 túltermelést. Ezenkívül az APRIL és az IL{11}} útvonal egymástól függetlenül közvetítette a TLR9-a Gd-IgA1 túltermelését. Így a TLR9 aktiválása fokozta az aberránsan glikozilált IgA szintézisét, ami az IgAN egérmodelljében tovább fokozta a vesekárosodást. Ezért az APRIL és az IL{16}} szinergikusan és egymástól függetlenül is fokozza a Gd-IgA1 szintézisét.

Fordítási nyilatkozat

A galaktózhiányos IgA1-et célzó betegség-specifikus terápia a jövőbeni kezelést jelenthetiIgA nefropátia. Ennek a tanulmánynak az eredményei, amelyek egy proliferációt indukáló ligandum (APRIL) és az interleukin-6 (IL-6) szerepét mutatták be az aberránsan glikozilált IgA túltermelésében, alátámasztják az APRIL és az IL{ megcélzásának okát. {3}} IgA nephropathiában (IgAN). Valójában egy nemrégiben végzett tanulmány kimutatta az anti-APRIL monoklonális antitest pozitív hatását rágcsáló IgAN-ban1, és jelenleg is folyik egy klinikai vizsgálat a neutralizáló APRIL antitesttel IgAN-ban szenvedő betegeken.

Az IgA nephropathia (IgAN), a leggyakoribb primer glomerulonephritis2, a betegek 20-40 százalékában okoz végstádiumú vesebetegséget a betegség megjelenését követő 20 éven belül.3 Bár az IgAN patogenezise még teljesen tisztázatlan, epizodikus a felső légúti fertőzéssel egyidejűleg jelentkező makroszkópos hematuria arra utal, hogy a nyálkahártya immunrendszere fontos szerepet játszik az IgAN klinikai megnyilvánulásaiban.4

Cistanchetubulosamegakadályozzavesebetegség, kattintson ide a minta megtekintéséhez

Az IgA rendellenes glikozilációjaközponti szerepet játszik az IgAN patogenezisében. Az IgAN-ban szenvedő betegek glomeruláris IgA-ja az IgA1 alosztályra korlátozódik, és olyan molekulákkal gazdagodik, amelyekben néhány galaktózhiányos csuklórégió O-glikán található (galaktózhiányos IgA1 [Gd-IgA1]).5,6 Továbbá a Gd szérumszintjei -IgA1 és IgA{11}}tartalmúimmunkomplexekA Gd-IgA1-specifikus autoantitestek (IC) szintje emelkedett az IgAN-ban szenvedő betegekben.7–9 A Gd-IgA1 termelésének mechanizmusa azonban még mindig nem teljesen ismert.

Ebben a vizsgálatban az IgAN-ra hajlamos ddY egérmodellt használtuk. A ddY egerekben olyan glomeruláris sérülések alakulnak ki, amelyek utánozzák az IgAN-nal rendelkező emberekét.10 Bár az egerek nem rendelkeznek a humán IgA1-re jellemző O-glikánokat tartalmazó IgA-molekulákkal, a humán IgAN és ez az IgAN-re hajlamos ddY egérmodell bizonyos betegség-specifikus jellemzőket, például szérumemelkedést mutat. az aberránsan glikozilált IgA és IgG-IgA IC.6,11 Valójában a b1 hiánya miatti aberráns IgA glikoziláció, az N-glikánok galaktozilációja indukálja az egér IgAN-t a nagy molekulatömegű szérumszintek emelkedése miatt IgA és IgA tartalmú IC, az azt követő vese lerakódással és glomeruláris sérüléssel.12 ddY egerek proteinuriát és mezangiális proliferatív glomerulonephritist mutatnak, az IgA és C3 együttes lerakódásával a glomerulusokban. Egy genomot átfogó asszociációs vizsgálat azonosított olyan jelölt lókuszokat, amelyek az IgAN progressziójához kapcsolódnak ddY egerekben.13 A lókuszok olyan géneket tartalmaznak, amelyek funkcionálisan hasonlóak a humán IgAN-hez kapcsolódókhoz.14,15 Ezek az eredmények arra utalnak, hogy a ddY egerekben és az emberekben az IgAN hatással lehet. legalábbis részben ugyanazon fogékonysági gének által. Bár az egér IgA és a humán IgA1 molekuláris jellemzői különböznek, az aberránsan glikozilált IgA hajlamos polimer IgA és IgG-IgA IC-k képzésére, amelyek ezt követően a vesekárosodás progresszióját idézik elő az IgAN ddY egérmodelljében, valamint a humán IgAN-ban. Így a ddY egérmodellnek van néhány közös jellemzője a humán IgAN-nal, és hasznos eszköz lehet az IgAN különféle patogenetikai jellemzőinek elemzésére.

A Toll-like receptorok (TLR-ek) a veleszületett immunrendszer kulcsmolekulái, és szerepet játszanak az IgAN patogenezisében.16–20 A kórokozókból származó exogén antigének aktiválják a TLR9-MyD88 jelátviteli útvonalat.21 Ez a folyamat a jelentősen megnövelte a gyulladásos citokinek, például az 1-es típusú interferon és az interleukin-6 (IL-6) ​​szintézisét.22 Nemrég kimutattuk, hogy a TLR9 aktiváció súlyosbítjavese sérülésIgAN-ra hajlamos ddY egerekben, az IgA és IgG-IgA IC-k szérumszintjének emelkedésével.16 Ezen túlmenően, specifikus TLR9 polimorfizmusok társulnak a betegség progressziójához IgAN-ban szenvedő betegeknél.16 A tumornekrózis faktor-a és IL{{ 6}} emelkedett IgAN-ban szenvedő betegekben.23 Ezen túlmenően, az IL-6 és IL-4 fokozza az IgA1 termelődését és fokozza a galaktózhiány mértékét, növelve a Gd-IgA1 szintézisét az IgA által{{13} }sejtvonalakat választanak ki az IgAN-ban szenvedő betegekből.24 Ezek az eredmények arra utalnak, hogy az IL-6 kulcsfontosságú közvetítője lehet ennek a folyamatnak.24,25.

A tumor nekrózis faktor ligandum szupercsalád 13-as tagjának génje (TNFSF13) egy proliferációt indukáló ligandumot (APRIL) kódol, amely központi citokin a B-sejtek éréséhez és túléléséhez.26 Az APRIL a B-sejtek fejlődéséhez fontos jelátviteli receptorokon osztozik egy másikkal. TNF szupercsalád ligandum, B-sejt aktiváló faktor (BAFF). A BAFF részt vesz a B-sejtek affinitási érésében is. Egy genomszintű asszociációs vizsgálat a TNFSF13-at az IgAN-hoz kapcsolódó egyik jelölt génként azonosította.27 Valójában az IgAN-ban szenvedő betegeknél az APRIL szérumszintje emelkedett28, és a szint a vese prognózisával függ össze.28

Annak érdekében, hogy jobban megértsük az aberránsan glikozilált IgA túltermelésében szerepet játszó mechanizmusokat a ligand CpG oligodezoxinukleotidok (ODN-ek) általi aktiválása révén, IgAN-ra hajlamos ddY egereket és humán IgA1--szekretáló sejteket használtunk.

EREDMÉNYEK

A TLR9 aktiválása súlyosbította a ddY egerek vesekárosodását a nefritogén IgA fokozott termelésével

A TLR9 aktiválható a megfelelő ligandumokkal, például a CpG-ODN-nel. A TLR9 aktiváció hatásának tesztelésére IgAN egérmodellben a ligandum injekcióját alkalmaztuk IgAN-ra hajlamos ddY egerekben. A CpG-ODN-nel injektált egerekben mezangiális proliferáció és extracelluláris mátrix expanzió alakult ki (1a. ábra). A CpG-ODN-nel injektált egerek mezangiális proliferációján és mezangiális mátrix expanzióján alapuló veseszövettani pontszámok szignifikánsan magasabbak voltak, mint a kontrollegerekben (P < 0.01;="" 1a.="" ábra).="" a="" cpg-odn-nel="" injektált="" egerek="" vizeletalbuminszintje="" szignifikánsan="" megemelkedett="" a="" kontroll="" egerekhez="" képest="" (p="">< 0.{{20}}1;="" 1a.="" ábra).="" csak="" a="" cpg-odn-nel="" injektált="" egereknél="" alakultak="" ki="" mezangiális="" iga,="" igg="" és="" komplement="" c3="" lerakódások="" (1b.="" ábra).="" a="" cpg-odn-nel="" injektált="" egerek="" szignifikánsan="" magasabb="" szérumszintet="" mutattak="" az="" iga="" (p="">< 0,01)="" és="" az="" igg="" (p="">< 0,01)="" szérumban,="" mint="" a="" kontrollegerek="" (1c.="" ábra).="" a="" cpg-odn-nel="" injektált="" egerekből="" származó="" szérum="" iga="" alacsonyabb="" reaktivitást="" mutatott="" a="" ricinus="" communis="" agglutinin-i="" (rca-i)="" és="" a="" sambucus="" nigra="" agglutinin="" lektinekkel,="" mint="" a="" kontrollegerekből="" származó="" szérum="" iga="" (1c.="" ábra),="" ami="" azt="" jelzi,="" hogy="" az="" n-en="" alacsonyabb="" a="" galaktóz="" és="" sziálsav="" tartalma.="" -="" az="" egér="" iga="" glikánjai.="" ezenkívül="" a="" cpg-odn-nel="" injektált="" egerekben="" az="" igg-iga="" ic="" szérumszintje="" szignifikánsan="" magasabb="" volt,="" mint="" a="" kontrollegerekben="" (p="">< 0,05;="" 1c.="" ábra).="" ezek="" a="" megállapítások="" arra="">TLR9 aktiválásA CpG-ODN abnormálisan glikozilált IgA és IgG-IgA IC túltermelését eredményezte, amiimmunkomplexlerakódás és vesekárosodás.

A B-sejtek és a dendritikus sejtek részt vettek a CpG-ODN válaszokban

Megvizsgáltuk, hogy mely sejttípusok vesznek részt az aberránsan glikozilált IgA túltermelésének indukciójában a CpG-ODN hatására. A B-sejteket és a dendritikus sejteket (DC-ket) izoláltuk ddY egerek lépéből egér-CD19 és CD11c elleni antitestek felhasználásával, FL fluoreszcenciával aktivált sejtválogatással. Az izolált B-sejtek CpG-ODN stimulálása IgA túltermelést indukált. Ezenkívül a CpG-ODN szignifikánsan növelte az IgA termelést, amikor a B-sejteket DC-kkel együtt tenyésztették (S1 kiegészítő ábra). Ezek az eredmények arra utalnak, hogy a CpG-ODN közvetlenül aktiválta a B-sejteket, és a DCS tovább fokozta az IgA termelést a TLR9 aktiválásakor.

Az APRIL túltermelése fokozta a rendellenesen glikozilált IgA és IgG-IgA IC-k szintézisét

Megvizsgáltuk, hogy az APRIL és/vagy a BAFF részt vett-e a TLR9 aktiváció által kiváltott nefritogén IgA szintézisében. A CpG-ODN injekció ddY egerekbe szignifikánsan megemelte az APRIL és a BAFF szérumszintjét (2a. ábra). Az APRIL expressziós szintje lépsejtekben korrelált az aberránsan glikozilált IgA termelődésével és az IgG-IgA IC képződésével (2b. ábra). A lépsejtekben a BAFF expressziós szintje korrelált az aberránsan glikozilált IgA termelődésével, de nem az IgG-IgA IC képződésével (2b. ábra). Ezenkívül az APRIL szérumszintje, de a BAFF nem, szignifikánsan korrelált a rendellenesen glikozilált IgA és IgG-IgA IC szérumszintjeivel a CpG-ODN-nel injekciózott egerekben (2c. ábra). Ezek az eredmények arra utalnak, hogy mind az APRIL, mind a BAFF részt vehet az aberránsan glikozilált IgA termelésében, bár az APRIL jobban részt vehet az IgG-IgA IC termelésében.

1. ábra|CpG-oligodezoxinukleotid (ODN) stimuláció által kiváltott nefritogén IgA termelés. A CpG-ODN injekció megnövelte az aberránsan glikozilált IgA és IgG-IgA immunkomplex (IC) szintjét a vérben, és súlyosbította a vesekárosodást ddY egerekben. (a) ddY egerek a kifejlődése előttIgA nefropátia(IgAN) intravénásán CpG-ODN-t injektáltunk hetente háromszor 12 héten keresztül. A glomeruláris elváltozások szövettani elemzése során a CpG-ODN-nel injekciózott egerek mezangiális sejtproliferációt és extracelluláris mátrix expanziót mutattak. A jobb oldali panel a vesekárosodások szemikvantitatív pontozással történő értékelését mutatja. A veseszövettani pontszámok, amelyeket a fent említett elváltozásokkal rendelkező glomerulusok százalékos arányával értékeltek, azt mutatták, hogy a CpG-ODN-nel injekciózott egerek vesekárosodása súlyosbodott. A CpG-ODN-nel injektált egerek vizeletalbuminszintje szignifikánsan megemelkedett a kontroll egerekhez képest. Az alsó paneleken lévő sávok ¼ átlag ± SEM. (b) A glomeruláris IgA, IgG és C3 lerakódások immunhisztokémiai elemzése. Csak a CpG-ODN-nel injektált egerekben alakultak ki mezangiális IgA, IgG és C3 lerakódások. (c) Az IgA, IgG és IgG-IgA IC-k szérumszintjei szignifikánsan megemelkedtek a 12 hetes CpG-ODN kezelés után. A CpG-ODN-nel injektált egerekben a szérum IgA szignifikánsan alacsonyabb reaktivitást mutatott a Ricinus communis agglutinin-I (RCA-I) és a Sambucus nigra agglutinin (SNA) lektinekkel, mint a kontroll egerekben az IgA. Ezek az eredmények azt mutatják, hogy a CpG-ODN injekciója megnövelte az aberránsan glikozilált IgA szérumszintjét. Az egyes pontok megjelennek. *P < 0.05,="" **p="">< 0,01.="" od,="" optikai="" sűrűség.="" a="" kép="" megtekintésének="" optimalizálásához="" tekintse="" meg="" a="" cikk="" online="" változatát="" a="" www.kidney-international.org="">

2. ábra|A proliferációt indukáló ligandum (APRIL) és a rendellenesen glikozilált IgA túltermelése közötti összefüggés CpG-oligodezoxinukleotiddal (ODN) injektált egerekben. (a) A ddY egerek CpG-ODN-nel történő injekciója megnövelte a B-sejt aktiváló faktor (BAFF) és az APRIL szérumszintjét. (b) A BAFF expressziós szintje teljes lépsejtekben korrelált a Ricinus communis agglutinin-I (RCA-I) lektinnel való csökkent reaktivitással, de nem korrelált az IgG-IgA immunkomplex (IC) kialakulásával. Eközben az APRIL expressziós szintjei összefüggésbe hozhatók a rendellenesen glikozilált IgA termelésével és az IgG-IgA IC képződésével. (c) CpG-ODN-nel injektált egerekben az APRIL szérumszintje az IgA RCA-I lektinnel való csökkent reaktivitásával és az IgG-IgA IC emelkedett szintjével társult. A BAFF szérumszintjei nem korreláltak a glikozilált IgA termelődésével és az IgG-IgA IC képződésével. A ¼ oszlopok jelentése - SEM. *P < 0.05.="" od,="" optikai="">

Az IL-6 rendellenesen glikozilált IgA termelődését indukálta

Az IL{0}} szérumszintje a CpG-ODN-nel injektált egerekben szignifikánsan magasabb volt, mint a kontrollegereknél (P < 0,05;="" 3a.="" ábra).="" igan-ra="" hajlamos="" ddy="" egerek="" lépsejtjeinek="" felhasználásával="" megvizsgáltuk,="" hogy="" a="" tlr9-indukált="" sejtaktivációt="" és="" az="" aberránsan="" glikozilált="" iga="" túltermelését="" az="" il-6="" közvetíti-e.="" a="" cpg-odn="" stimuláció="" in="" vitro="" fokozta="" a="" lépsejtek="" il-6="" termelését.="" az="" il{10}}="" hozzáadása="" a="" lépsejtek="" tápközegéhez="" növelte="" az="" iga-termelést.="" ezenkívül="" az="" il-6="" fokozta="" a="" rendellenesen="" glikozilált="" iga="" szintézisét="" és="" az="" igg-iga="" ic="" képződését,="" és="" növelte="" az="" april="" termelést="" (3a.="" ábra).="" az="" il-6-neutralizáló="" antitest="" csökkentette="" a="" cpg-odn-indukált="" össz-iga-t,="" a="" rendellenesen="" glikozilált="" iga-termelést="" és="" az="" igg-iga="" ic-képződést="" (3b.="" ábra).="" ezek="" az="" eredmények="" azt="" mutatják,="" hogy="" a="" tlr9="" aktiválását,="" legalábbis="" részben,="" az="" il-="" 6="" közvetítette.="" ezenkívül="" egy="" másik="" tlr{20}}közvetített="" útvonal(ok)="" is="" részt="" vehet(nek)="" a="" rendellenesen="" glikozilált="" iga="">

cistanchejavíthatvesefunkció

APRIL és IL{0}} fokozta a Gd-IgA1 szintézisét humán IgA1- szekretáló sejtekben

Megvizsgáltuk továbbá, hogy az APRIL és az IL-6 közösek-e a fő mediátorokban, amelyek fokozzák a nefritogén IgA termelődését a humán IgA1-szekretáló sejtekben. A CpG-ODN kiegészítés fokozta az IL-6 növekedését, az APRIL expresszióját, az APRIL fehérje termelődését, valamint az IgA és Gd-IgA1 termelődését (4a. ábra). Az IL-6-val és APRIL-lel végzett stimuláció fokozta az IgA és Gd-IgA1 termelődését (4b, c ábra). A CpG-ODN stimuláció IgA- és Gd-IgA1-termelésre gyakorolt ​​hatásait részben csökkentették az IL-6-neutralizáló antitestek (4d. ábra). Ezenkívül az APRIL kisméretű, zavaró (si)RNS-leütése csökkentette az IL-6 stimuláció által kiváltott IgA és Gd-IgA1 termelődését (4b. ábra), ami azt jelzi, hogy az APRIL és az IL-6 szinergikusan elősegíti a Gd képződését -IgA1.

VITA

A humán IgAN mezangiális IgA-ja nem tartalmazza azt az IgA1 alosztályt, amely abnormális O-glikozilációt mutat. 29,30 A humán IgA1-nek van egy csuklórégiója O-glikánokkal, amelyek hiányoznak az egér IgA-ból.6,31,32 Az N-glikánok rendellenes glikozilációja azonban részt vesz az IgAN egérmodelljének patogenezisében ddY egerekben. az aberránsan glikozilált IgA és IgA-tartalmú IC emelkedése.11,12 Az IgA szénhidrátok aberráns módosulásai akár O-, akár N-glikánokban a nefritogén IgA-tartalmú IC jellemző tulajdonságai.

Számos tanulmány kimutatta a TLR9 aktiválódását az IgAN progressziójában.17–19 Jelen tanulmányban kimutattuk, hogy a TLR9 aktiválása CpG-ODN ip injekcióval ddY egerekben súlyosbította a vesekárosodást, amelyet glomeruláris IgA és IgG lerakódások kísértek, valószínűleg azért, mert az aberránsan glikozilált IgA és IgG-IgA IC megnövekedett szérumszintje. Ezenkívül kimutattuk, hogy a TLR9 aktiváció részt vesz a Gd-IgA1 szintézisében humán IgA{9}}-szekréciós sejtvonalakban.

3. ábra|A CpG-oligodezoxinukleotid (ODN) és az interleukin (IL)-6 hatása ddY egerek tenyésztett lépsejtekére. (a) Az IL-6 szérumszintje a CpG-ODN-nel injektált egerekben szignifikánsan magasabb volt, mint a kontrollegereknél. A CpG-ODN stimuláció növelte a ddY egerek lépsejtek IL-6 termelését a tenyészetben. A ddY egerek lépsejtek rekombináns IL-6-val való inkubálása megnövelte a teljes IgA és a rendellenesen glikozilált IgA termelődését, ami az IgG-IgA immunkomplex (IC) kialakulását eredményezte. A rekombináns IL-6 növelte a proliferációt indukáló ligandum (APRIL) túltermelését. (b) A tenyészetben lévő lépsejteket CpG-ODN-nel stimuláltuk IL-6-semlegesítő antitest jelenlétében vagy hiányában. Az anti-IL-6 antitest csökkentette a teljes IgA és a rendellenesen glikozilált IgA termelődését, következésképpen csökkentette a CpG-ODN által indukált IgG-IgA IC képződését. Oszlopok ¼ átlag ± SEM. * P < 0.05,="" **p="">< 0,01.="" od,="" optikai="" sűrűség;="" pbs,="" foszfáttal="" pufferolt="" sóoldat;="" rca-i,="" ricinus="" communis="" agglutinin-i;="" sna,="" sambucus="" nigra="">

4. ábra|A CpG-oligodezoxinukleotid (ODN) vagy egy proliferációt indukáló ligandum (APRIL) kiegészítés hatása az IgA1-en, galaktózhiányos IgA1-en (Gd-IgA1) és interleukin-n (IL) kiválasztó humán IgA1-sejtvonalakra 9}} gyártás. (a) A CpG-ODN kiegészítés fokozta az IL-6 termelését. A CpG-ODN fokozta az APRIL génexpresszióját. Western blot analízis kimutatta, hogy a CpG-ODN növelte az APRIL fehérjeszintjét. Az eredményeket denzitometriásan értékeltük. A CpG-ODN-nel végzett stimuláció IgA és Gd-IgA1 termelődését indukálta. (b) APRIL kisméretű, interferáló RNS (siRNS) leütése csökkentette az IL-6 által kiváltott IgA és Gd-IgA1 túltermelést. (c) A rekombináns APRIL-lel stimulált IgA{{2{{30}}}}termelő sejtek több IgA-t és Gd-IgA1-et termeltek. (d) Az IgA1-szekretáló sejteket anti-IL-6 antitesttel inkubáltuk CpG-ODN stimuláció után. A CpG-ODN által kiváltott fokozott IgA és Gd-IgA1 termelést csökkentette az anti-IL-6 antitest és az APRIL siRNS leütése. Oszlopok ¼ átlag ± SEM. *P < 0,05,="" **p="">< 0,01.="" gadph,="" gliceraldehid-3-foszfát-dehidrogenáz;="" pbs,="" foszfáttal="" pufferolt="">

Megvizsgáltuk azt a mechanizmust, amellyel a TLR9 aktiválása közvetítette az aberránsan glikozilált IgA fokozott termelését. A BAFF és az APRIL a B-sejtek túlélésében és differenciálódásában játszott szerepéről ismertek. McCarthy és munkatársai33 kimutatták, hogy a BAFF-ot túltermelő transzgenikus egerekben mezangiális IgA lerakódások alakulnak ki vesekárosodással és vizeletürítési rendellenességekkel.33 Nemrég kimutattuk, hogy az APRIL génexpressziója megemelkedett IgAN-ban szenvedő betegek mandula csíracentrumában. Ezenkívül az APRIL mandulagerminális centrumokban való túlzott expressziója korrelált a szérum Gd-IgA1 szintjével és a betegség súlyosságával IgAN-ban szenvedő betegeknél.34 Ezek az eredmények arra utalnak, hogy a BAFF és az APRIL is részt vehet az IgAN patogenezisében. A BAFF/APRIL és a TLR9 aktiválása közötti összefüggés azonban nem világos. Jelen tanulmányban a TLR9 aktiválása növelte az APRIL génexpresszióját és szérumszintjét. Az aberránsan glikozilált IgA szérumszintje korrelált a BAFF és az APRIL expressziós szintjével lépsejtekben. Az IgG-IgA IC szérumszintjei azonban korreláltak az APRIL expressziós szintjével, de nem a BAFF expressziós szintjével. Ezenkívül az APRIL szérumszintjei összefüggésbe hozhatók az aberránsan glikozilált IgA és IgG-IgA IC túltermelésével a TLR{12}}aktivált egerekben. Az IgA{13}}szekretáló sejtekben a TLR9 aktiválása a Gd-IgA1 túltermelését is indukálta az APRIL-on keresztül. Ezek az eredmények arra utalnak, hogy az APRIL fontos szerepet játszik a TLR{18}}indukált nefritogén IgA túltermelésében és az IgG-IgA IC képződésében.

Tisztázni kell a sejttípusonkénti választ a B- és T-sejtek, valamint a DC-k szerepének meghatározására. Jelen tanulmányban a B-sejtek és a plazmacitoid DC-k szerepét értékeltük. A TLR9-et a DC-k, a B-sejtek és a makrofágok expresszálják, de a T-sejtek nem.35–37 A BAFF/APRIL hozzájárulása a T-sejt-független antitestválaszhoz ismert.38,39 Itt azt teszteltük, hogy a TLR9 aktiválása fokozhatja-e az antitestek szintézisét. rendellenesen glikozilált IgA és IgG-IgA IC képződése APRIL-on keresztül T-sejt-független módon. Klónozott humán IgA1--t szekretáló sejtvonalakat is alkalmaztunk, és kimutattuk, hogy a TLR9 aktiválása fokozta a Gd-IgA1 termelését APRIL-on és IL-6-on keresztül, ami arra utal, hogy a folyamat T-sejt-független. Továbbá értékeltük a B-sejtek és a DC-k szerepét. Kimutattuk, hogy a B-sejtekre és a DC-kre specifikus CpG-ODN növelte az aberránsan glikozilált IgA termelődését teljes lépsejtekben. Továbbá megvizsgáltuk, hogy a CpG-ODN stimuláció in vitro fokozhatja-e az IgA termelést. Az izolált B-sejtek CpG-ODN stimulálása IgA túltermelést indukált. Ezenkívül a CpG-ODN szignifikánsan növelte az IgA termelést, amikor a B-sejteket DC-kkel együtt tenyésztették (S1 kiegészítő ábra). Ezek az eredmények arra utalnak, hogy a CpG-ODN aktiválása nagyobb hatást eredményezIgA termelés és aberráns glikozilációa TLR9 közvetíti T-sejt-független módon.

Az IL-6 köztudottan fokozza az immunglobulintermelő sejtek proliferációját és a plazmasejtek terminális differenciálódását.40–42 Ezen túlmenően, az IL-6 elsődleges citokinjelölt lehet a T follikuláris segítő sejtek differenciálódásához .43,44 A T follikuláris helper sejtek nélkülözhetetlenek a B-sejt affinitás éréséhez, az osztályváltó rekombinációhoz, valamint a memória B-sejt és plazmasejtek generálásához a csíraközponton belül.43,44 Lupus egérmodellben az IL-6 A hiány megakadályozta a T follikuláris helper sejtek differenciálódását és a germinális központ B-sejt expanzióját, ami csökkent autoantitest termelést eredményezett.45 A jelen tanulmány tisztázta, hogy a CpG-ODN általi TLR9 aktiválása fokozta az IL-6 termelést az egér IgAN lépsejtekben. Az IL-6 abnormálisan glikozilált IgA és IgG-IgA IC túltermelését indukálta az IgAN egérmodelljében. Humán IgA1-kiválasztó sejtekben megerősítettük, hogy az IL-6 fokozta a Gd-IgA1 termelését.24 Eredményeink arra utalnak, hogy az IL-6 lehet az egyik fő molekula, amely a nefritogén IgA túltermelését indukálja. A TLR9 aktiválása közvetíti.

Az APRIL fontos szerepet játszik az IgA-osztály váltásában és a plazmacitoid differenciálódásban.46,47 Az IL-6 elősegíti a B-sejtek terminális differenciálódását IgA-t termelő plazmasejtekké.41,42 A jelen tanulmány kimutatta, hogy az IL{{7} } stimuláció indukálta APRIL termelődését. Ezután azt feltételeztük, hogy összefüggés van az APRIL és az IL-6 között, amelyet a TLR9 aktiválása közvetít, ami aberránsan glikozilált IgA termelődését indukálta. Azt találtuk, hogy az IL-6–semlegesítő antitest nem blokkolta teljesen a CpG-ODN által kiváltott Gd-IgA1 túltermelést, és hogy az APRIL siRNS leütése csökkentette az IL-6 által kiváltott Gd-IgA1 túltermelését. Ezek az adatok arra utalnak, hogy az APRIL és az IL{17}} szinergikusan elősegítette a Gd-IgA1 termelődését a TLR9 aktiválása által. Ezenkívül mind az IL-6-semlegesítő antitest, mind az APRIL siRNS-ének leütése jobban csökkentette az IgA és Gd-IgA1 termelődését, mint az IL-6-neutralizáló antitest önmagában. Így a TLR9 aktiválási útvonala magában foglalja az IL-6 és APRIL szinergikus hatását az antitest-termelésre és glikozilációra (5. ábra). A legújabb tanulmányok azt is kimutatták, hogy az IL-6 az APRIL-lel kombinálva plazmasejtek képződését és túlélését indukálta.48,49 Azonban jövőbeli vizsgálatokra van szükség az APRIL és az IL-6 közötti intercelluláris jelátviteli útvonalak tisztázásához nefritogén IgA termelése.

cistancheszámáravesefertőzés

Összefoglalva,TLR9 aktiválássúlyosbította a vesekárosodást az IgAN egérmodelljében az aberránsan glikozilált IgA termelésének és az IgG-IgA IC képződésének fokozásával. Ebben a folyamatban a TLR9 aktiváció által kiváltott APRIL és IL-6 túltermelése fokozta a nefritogén IgA termelődését. Ezen túlmenően a jelen tanulmány tisztázta, hogy az APRIL és az IL-6 szinergikusan, valamint egymástól függetlenül is funkcionál, és rendellenesen glikozilált IgA-t termel. Ezek az eredmények megalapozhatják az IgAN új terápiás megközelítéseinek jövőbeli kidolgozását.

5. ábra|A Toll-like receptor 9 (TLR9), egy proliferációt indukáló ligandum (APRIL) és az interleukin (IL)-6 szinergikus szerepe az IgA-termelő sejtekben IgA nephropathiában (IgAN). A TLR9 aktiválása APRIL és IL-6 termelését indukálta, aminek eredményeként

az aberránsan glikozilált IgA túltermelése. Az APRIL és az IL{0}} szinergikusan működik, elősegítve a rendellenesen glikozilált IgA képződését. Amellett, hogy az APRIL indukálja az IL-6 termelését, amint azt korábban közöltük, az IL-6 az APRIL szintézisét is fokozhatja. Ezenkívül az APRIL és az IL-6 egymástól függetlenül elősegíti a rendellenesen glikozilált IgA termelődését. NF-kB, nukleáris faktor-kB.

MÓD

Állatok és kísérleti protokollok

Az IgAN-ra hajlamos ddY egér a spontán IgAN ismert modellje, amely a glomeruláris sérülések eltérő előfordulási gyakoriságával és mértékével utánozza a humán IgAN-t.vesekárosodás: korai vagy késői megjelenésű és nyugalmi állapotú egerek. A ddY egerek korai megjelenése proteinuriával és glomeruláris IgA lerakódásokkal jelentkezik 20 hetes kor után.13 Ezért 18 hetes korban ddY egereket használtunk annak értékelésére, hogy a TLR9 aktiválása súlyosbítja-e az IgAN-t ebben a modellben. Összesen 30 nőstény ddY egeret (SLC Japan, Shizuoka, Japán) tartottak fenn a Juntendo Egyetem állattenyésztésében, Tokióban, Japánban. Az egereket szokásos étellel (Oriental Yeast Co., Tokió, Japán) és vízzel ad libitum etettük, és egy speciális kórokozómentes helyiségben tartottuk őket. A kísérleti protokollt a Juntendo Egyetem Orvostudományi Karának Állatkísérletek Etikai Felülvizsgáló Bizottsága hagyta jóvá. 6 hetes korukban az egereket véletlenszerűen 2 csoportra osztották. Az egyik csoport hetente háromszor ip. CpG-ODN-t kapott 12 héten keresztül; a második csoportot (kontroll) nem-CpG-ODN-nel injektálták. A CpG-ODN-t és a nem-CpG-ODN-t kémiai úton szintetizálták (Invitrogen; Thermo Fisher Scientific, Kanagawa, Japán). Az ODN szekvenciája TCGTCGTT TTCGGCGCGCGCCG vagy TGCTGCTTTTGGGGGGCCCCCC (50/30 ) CpG vagy nem CpG ODN esetén.

Az IgA, IgG, IgG-IgA IC és a rendellenesen glikozilált IgA meghatározása egérszérumban

A vérmintákat a bukkális vénából vettük. A szérum IgA-t, IgG-t és IgG-IgA IC-t szendvics enzimhez kötött immunszorbens vizsgálattal (ELISA; Bethyl Laboratories, Montgomery, TX) mérték a korábbi jelentésünk alapján módosított módszerrel.50 A lektinkötési teszteket az IgA glikoformájához való hozzáférésre használják. Ebben a vizsgálatban biotinilált RCA-I-t (Vector Laboratories, Burlingame, CA) és Sambucus nigra kéreglektint (Vector Laboratories) használtak, amelyek felismerték a galaktózhoz kapcsolódó galaktózt, illetve sziálsavat (elsősorban a2,6-kötésben).51 Hígított szérum lyukanként 100 ng IgA-t adtunk hozzá. A szérum IgA mennyiségi meghatározásához 1 mg/ml kecske anti-egér IgA-val (100 ml/lyuk) bevont mikrotiter lemezeket inkubáltunk ezekkel a mintákkal, majd biotinilezett Sambucus nigra agglutinint vagy RCA-I-et adtunk hozzá. Avidin-torma peroxidáz konjugátumot (ExtrAvidin; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) alkalmaztunk. Az aberránsan glikozilált kötött IgA szérumszintjét egységekben fejeztük ki (1 egység optikai sűrűségként 1,0 490 nm-en mérve). Az APRIL és a BAFF szérumszintjét egér APRIL ELISA készlettel (MyBioSource, San Diego, CA) és egér BAFF ELISA készlettel (R&D Systems, Minneapolis, MN) mértük a gyártó protokollja szerint.

A humán IgA1-szekréciós sejtek által termelt Gd-IgA1 vizsgálata

A Gd-IgA1 szendvics ELISA-ját állítottuk elő Gd-IgA1-specifikus antitest (IBL, Japán) felhasználásával. 52 Gd-IgA1-specifikus antitestet (7,5 mg/ml) foszfáttal pufferolt sóoldattal hígítottunk fel egy ELISA lemezre 18 °C-on. óra szobahőmérsékleten. A mintákat felvittük és 2 órán át szobahőmérsékleten inkubáltuk. A lemezeket mostuk és 2 órán át szobahőmérsékleten 1:1000- hígított torma-peroxidázzal konjugált egér anti-humán IgA1 a1-láncspecifikus monoklonális antitesttel inkubáltuk (Southern Biotech, Birmingham, AL). Mosás után a lemezeket SIG-MAFAST o-fenilén-diamin oldattal (Sigma-Aldrich) előhívtuk, és a reakciót 1 M kénsav (Wako, Osaka, Japán) hozzáadásával állítottuk le. A Gd-IgA1 szintjeit egy standard görbe (4-paraméter logisztikus görbe illesztése) alapján extrapoláltuk az optikai sűrűség 490 nm-en, és egységekben fejeztük ki. A humán plazma IgA152-ből enzimatikusan előállított Gd-IgA1-et sorozathígítással (1,37–1000 ng/ml) standard görbét állítottunk elő. Ebben a vizsgálatban 1 egység a standard Gd-IgA1.52 1 ng/ml-ét jelenti.

A vesekárosodás értékelése ddY egerekben

Vesewere removed after perfusion with normal saline solution. Renal tissue specimens for microscopic examination were fixed in 20% formaldehyde, embedded in paraffin, cut into 3-mm-thick sections, and then stained with periodic acid–Schiff. Specimens were quantitatively analyzed to determine the percentage of glomeruli with segmental and global sclerosis and/or mesangial cell proliferation and/or increase in the mesangial matrix. Each section was scored semiquantitatively for percentages of glomeruli with aforementioned lesions (0, 0%; 1, 1% to 24%; 2, 25% to 49%; and 3, >20 glomerulus 50 százaléka).13,53,54 Az egyes metszeteknél a maximális pontszám 9 volt. Az immunfluoreszcenciához szükséges vesemintákat optimális vágási hőmérsékletű keverékbe merítettük (Sakura Finetek Japan Co., Tokió, Japán) és –80 fokon tároltuk. A mintákat 3-mm vastag metszetekre vágtuk, acetonnal –20 fokon 5 percig fixáltuk, foszfáttal pufferolt sóoldattal mostuk, blokkolószerrel blokkoltuk (DS Pharma Biomedical Co., Osaka, Japán). szobahőmérsékleten 30 percig, majd szobahőmérsékleten 2 órán át a következő elsődleges antitestekkel inkubáltuk: kecske anti-egér IgA, Alexa konjugált kecske anti-egér IgG és patkány anti-C3 (Bethyl Laboratories). A foszfáttal pufferolt sóoldattal végzett további 3 mosás után a tárgylemezeket rögzítőközeggel (Dako, Tokió, Japán) rögzítettük. A mintákat konfokális lézermikroszkóppal elemeztük és leképeztük (Olympus Corporation, Tokió, Japán).

Valós idejű kvantitatív polimeráz láncreakció

A lépsejtekből származó RNS-t Torizol oldattal (Invitrogen, Tokió, Japán) extraháltuk, és RNeasy Mini Kit-tel (74106; Qiagen, Valencia, CA) tisztítottuk. A valós idejű kvantitatív polimeráz láncreakciót az Applied Biosystems 7500 Real-Time polimeráz láncreakciós rendszerrel hajtottuk végre SYBR Green PCR Master Mix (Applied Biosystems, Tokió, Japán) és specifikus primerek felhasználásával: egér TLR9 forward primer TCTCCCAACATGGTTCTCCGTCG, fordított primer TCTGCCCAGTGGATGCCCAGTCC; egér MyD88 előremenő primer GCACCTGTGTCTGGTCCATT, fordított primer CTGTTGGA CACCTGGAGACA; és a housekeeping gén gliceraldehid-3-foszfát-dehidrogenáz forward primer CATTGTGGAAG GGCTCATGA, reverse primer TCTTCTGGGTGGCAGTGATG. Az amplifikáció körülményei a következők voltak: előmelegítés 95 fokon 20 másodpercig, majd 40 denaturálási ciklus 95 fokon 3 másodpercig, és lágyítás és extenzió 60 fokon 30 másodpercig. Homo sapiens-specifikus TaqMan génexpressziós vizsgálatokat (Life Technologies, Carlsbad, CA) vásároltunk az APRIL, Hs00601664_g1, Mm03809849-s1 és BAFF, Mm01168134-m1 primerekhez. . A TaqMan polimeráz láncreakció ciklus körülményei a következők voltak: előmelegítés 95 fokon 20 másodpercig, majd 40 ciklus denaturálás 95 fokon 3 másodpercig, valamint lágyítás és meghosszabbítás 60 fokon 30 másodpercig.

In vitro vizsgálatok ddY egerek lépsejtekkel

A lépsejteket Roswell Park Memorial Institute–1640 táptalajban tenyésztjük, amelyet 20% magzati borjúszérummal, 100 mg/ml sztreptomicinnel és 100 U/ml penicillinnel egészítettek ki. A vörösvérsejteket Vörösvérsejt-lizáló pufferben (R7757; Sigma-Aldrich) szobahőmérsékleten 1 percig lizáltuk, majd Roswell Park Memorial Institute–1640 táptalajban mostuk.50 A sejttenyészeteket 37 fokos párásított inkubátorban tartottuk. 5 százalék CO2. C osztályú CpG-ODN-t (TCGTCGTTTTCGGCGCGCGCCG) használtunk TLR9 ligandumként. A rekombináns IL-6, az anti-IL-6 antitest és a patkány IgG1 izotípus kontroll az R&D Systemstől származott. A sejteket tápközeggel vagy az ajánlott koncentrációjú CpG-ODN-nel, 10 ng/ml rekombináns IL{19}} és 100 ng/ml anti-IL6 antitesttel tenyésztettük. A lépsejtek által termelt IgA, aberránsan glikozilált IgA, IgG-IgA IC és APRIL mennyiségét ELISA-val mértük 72-órás in vitro inkubáció után.

In vitro vizsgálatok humán IgA-t{0}}kiválasztó sejtvonalakkal

Egy egészséges ember véréből származó B-sejteket Epstein-Barr vírussal örökítettük meg, szubklónoztuk, hogy IgA1-szekréciós sejtvonalakat kapjunk, és a leírtak szerint tenyésztjük.9 Továbbá megerősítettük az APRIL/BAFF és IL receptorok expresszióját. -6. A sejteket Roswell Park Memorial Institute–1640 táptalajban tenyésztettük, amelyet 20% magzati borjúszérummal, sztreptomicinnel és penicillinnel egészítettek ki, párásított inkubátorban, 37 fokos hőmérsékleten, 5% CO2 mellett. B osztályú CpG-ODN-t (TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT) használtunk TLR9 ligandumként. A rekombináns IL-6, a rekombináns APRIL, az anti-IL-6 antitest és a kecske IgG kontroll antitest az R&D Systemstől származott. A sejteket tápközeggel vagy ajánlott koncentrációjú CpG-ODN-nel, 50 ng/ml rekombináns IL-6-rel, 40 ng/ml rekombináns APRIL-lel és 100 ng/ml anti-IL{18}} antitesttel tenyésztettük 72 órán keresztül.

Western blot

Az IgA{0}}kiválasztó sejtek felülúszóit nátrium-dodecil-szulfát-poliakrilamid gélelektroforézissel választottuk el redukáló körülmények között, 5-15 százalékos gradiens lemezgélek alkalmazásával. A géleket polivinilidén-difluorid membránokra vittük át, és APRIL-re (Abcam Inc., Cambridge, MA) és glicerinaldehid-3-foszfát-dehidrogenázra (Abcam Inc.) specifikus antitestekkel inkubáltuk. A blotokat kemilumineszcenciával tettük láthatóvá, fokozott kemilumineszcenciával (GE Healthcare, Tokió, Japán) és lumineszcenciadetektorral (Konica Minolta Healthcare, Tokió, Japán). Az eredményeket denzitometriásan értékeltük.

ÁPRILIS siRNA leütés

A humán IgA{0}}kiválasztó sejteket 24-lyukú tenyésztőlemezeken tenyésztettük, és APRIL-specifikus siRNS-sel (GS8741, Qiagen) vagy siRNS non-targetting kontrollal (GS10673, Qiagen) transzfektáltuk a transzfekciós protokollt alkalmazva a gyártó utasításai szerint. . 24 órás inkubáció után a sejteket 50 ng/ml rekombináns IL-6-mal (R&D Systems) 72 órán át inkubáltuk. Inkubálás után a sejteket és a felülúszókat összegyűjtöttük az IgA és Gd-IgA1 mérésére.

Statisztikai analízis

A különböző paraméterek közötti összefüggést varianciaanalízissel elemeztük. Az adatokat átlag ± SD vagy medián értékben fejeztük ki. A < {{0}},05="" p="" értékeket="" statisztikailag="" szignifikánsnak="" tekintettük.="" minden="" statisztikai="" elemzést="" a="" graphpad="" prism="" 6.0="" for="" windows="" (graphpad="" software,="" san="" diego,="" ca)="" verziójával="">

cistancheszámáravesebetegség tünetei

KÖZZÉTÉTEL

Egyik szerző sem nyilatkozott egymással versengő érdekekről.

KÖSZÖNETNYILVÁNÍTÁS

Ezt a tanulmányt részben a 18K08252 számú JSPS KAKENHI Grant és a Japán Orvosi Kutatási és Fejlesztési Ügynökség, az AMED vesebetegségek gyakorlati kutatási projektje támogatta. A JN-t és a BAJ-t részben az Országos Egészségügyi Intézet DK078244 és DK082753 számú pályázata támogatta. Köszönjük Terumi Shibata asszony kiváló technikai segítségét. Köszönetet mondunk továbbá Takako Ikegami asszonynak és Tomomi Ikedának (a Juntendo Egyetem Orvostudományi Karának Molekuláris és Biokémiai Kutatási Osztálya) és Tamami Sakanishi asszonynak (Sejtbiológiai Osztály, Juntendo Egyetemi Orvostudományi Iskola) kiváló technikai segítségükért .

KIEGÉSZÍTŐ ANYAG

Kiegészítő fájl (PDF)

S1 ábra. A CpG-oligodezoxinukleotid (ODN) által aktivált B-sejtek és dendritikus sejtek (DC-k) tovább fokozzák az IgA-termelést. B-sejteket és DC-ket izoláltunk ddY egerek lépéből. A CpG-ODN stimuláció növelte az IgA termelést az izolált B-sejtekben. Ezt a növekedést tovább fokozta a B-sejtek és a DC-k együttes tenyésztése. *P < 0.05.="" a="" részletes="" módszereket="" a="" kiegészítő="" módszerek="" tartalmazzák.="" kiegészítő="">

IRODALOM

1. Myette JR, Kano T, Suzuki H, et al. A proliferációt indukáló ligandum (APRIL) célzott antitest az egér IgA nefropátia biztonságos és hatékony kezelése. Kidney Int. 2019;96:104–116.

2. Levy M, Berger J. Az IgA nephropathia világméretű perspektívája. Am J Kidney Dis. 1988;12:340–347.

3. D'Amico G. A világon a leggyakoribb glomerulonephritis: IgA nephropathia. QJ Med. 1987;64:709–727.

4. Feehally J, Beattie TJ, Brenchley PE és társai. Az IgA rendszer szekvenciális vizsgálata a visszaeső IgA nefropátiában. Kidney Int. 1986;30:924–931.

5. Wyatt RJ, Julian BA. IgA nefropátia. N Engl J Med. 2013;368:2402–2414.

6. Suzuki H, Yasutake J, Makita Y és mtsai. Az IgA nephropathia és a nephritissel járó IgA vasculitis közös jellemzője a galaktózhiányos IgA1- orientált patogenezis. Kidney Int. 2018;93:700–705.

7. Glassock RJ. Az antitestaktivitás elemzése IgA nephropathiában. J Clin Invest. 2009;119:1450–1452.

8. Moldoveanu Z, Wyatt RJ, Lee JY és munkatársai. Az IgA nephropathiában szenvedő betegek szérum galaktózhiányos IgA1 szintje megemelkedett. Kidney Int. 2007;71: 1148–1154.

9. Suzuki H, Moldoveanu Z, Hall S és mtsai. Az IgA-nephropathiában szenvedő betegek IgA1-kiválasztó sejtvonalai rendellenesen glikozilált IgA1-et termelnek. J Clin Invest. 2008;118:629–639.

10. Imai H, Nakamoto Y, Asakura K és mtsai. Spontán glomeruláris IgA lerakódás ddY egerekben: az IgA nephritis állatmodellje. Kidney Int. 1985;27:756–761.

11. Okazaki K, Suzuki Y, Otsuji M és társai. A korai kezdetű IgA nefropátia modelljének kidolgozása. J Am Soc Nephrol. 2012;23:1364–1374.

12. Nishie T, Miyaishi O, Azuma H, et al. Immunglobulin A nephropathia-szerű betegség kialakulása béta-1,4-galaktoziltranszferáz-I-hiányos egerekben. Am J Pathol. 2007;170:447–456.

13. Suzuki H, Suzuki Y, Yamanaka T és mtsai. Egy új IgA nefropátia-modellben végzett genomszintű szkennelés egy fogékonysági lókuszt azonosít az egér 10. kromoszómán, a 6q kromoszómán lévő humán IGAN1-gyel szintetikus régióban22-23. J Am Soc Nephrol. 2005;16:1289–1299.

14. Takei T, Iida A, Nitta K et al. Kapcsolat a szelektin gének egynukleotidos polimorfizmusai és az immunglobulin A nefropátia között. Am J Hum Genet. 2002;70:781–786.

15. Gharavi AG, Yan Y, Scolari F és mtsai. Az IgA nephropathia, a glomerulonephritis leggyakoribb oka, a 6q22-23-hoz kapcsolódik. Nat Genet. 2000;26:354–357.

16. Suzuki H, Suzuki Y, Narita I, et al. A Toll-like receptor 9 befolyásolja az IgA nephropathia súlyosságát. J Am Soc Nephrol. 2008;19:2384–2395.

17. Nakata J, Suzuki Y, Suzuki H, et al. Változások a nefritogén szérum galaktóz-hiányos IgA1-ben IgA nephropathiában mandulaeltávolítás és szteroidterápia után. PLoS One. 2014;9:e89707.

18. Sato D, Suzuki Y, Kano T et al. A mandula TLR9 expressziója és a tonsillectomia hatékonysága szteroid pulzusterápiával IgA nephropathiás betegekben. Nephrol Dial Transplant. 2012;27:1090–1097.

19. Coppo R, Camilla R, Amore A és mtsai. Az immunglobulin A nephropathiában szenvedő betegek keringő mononukleáris sejtjeiben a Toll-like receptor 4 expressziója fokozott. Clin Exp Immunol. 2010;159:73–81.

20. Maiguma M, Suzuki Y, Suzuki H és mtsai. Az étrendi cink az IgA nefropátia progressziójának kulcsfontosságú környezeti módosítója. PLoS One. 2014;9: e90558.

21. Kawai T, Akira S. Signaling to NF-kappaB by Toll-like receptors. Trends Mol Med. 2007;13:460–469.

22. Kuwata H, Matsumoto M, Atarashi K és mtsai. Az IkappaBNS gátolja a Toll-szerű receptor-függő gének egy részcsoportjának indukcióját, és korlátozza a gyulladást. Immunitás. 2006;24:41–51.

23. Rostoker G, Rymer JC, Barnard G és munkatársai. A szérum proinflammatorikus citokinek és oldható receptoraik egyensúlyhiánya: feltételezett szerepe az idiopátiás IgA nephropathia (IgAN) és a Henoch Schönlein purpura nephritis progressziójában, valamint az immunglobulinterápia lehetséges célpontja? Clin Exp Immunol. 1998;114:468–476.

24. Suzuki H, Raska M, Yamada K et al. A citokinek megváltoztatják az IgA1 O-glikozilációját a C1GalT1 és ST6GalNAc-II enzimek diszregulációjával. J Biol Chem. 2014; 289:5330–5339.

25. Yamada K, Huang ZQ, Raska M és társai. A STAT3 jelátvitel gátlása csökkenti az IgA1 autoantigén termelődését IgA nephropathiában. Kidney Int Rep. 2017;2:1194–1207.

26. Schneider P, MacKay F, Steiner V és mtsai. A BAFF, a tumornekrózis faktorok családjába tartozó új ligandum serkenti a B-sejtek növekedését. J Exp Med. 1999;189: 1747–1756.

27. Kiryluk K, Li Y, Scolari F és mtsai. Az IgA nefropátia új kockázati lókuszainak felfedezése olyan géneket jelent, amelyek részt vesznek a bélkórokozók elleni immunitásban. Nat Genet. 2014;46:1187–1196.

28. Han SS, Yang SH, Choi M és társai. A 13. TNF szupercsaládtag szerepe az IgA nefropátia progressziójában. J Am Soc Nephrol. 2016; 27:3430–3439.

29. Hiki Y, Odani H, Takahashi M és társai. A tömegspektrometria igazolja a glomeruláris IgA1 O- alatti glikozilációját IgA nefropátiában. Kidney Int. 2001;59: 1077–1085.

30. Allen AC, Bailey EM, Brenchley PE, et al. A mezangiális IgA1 IgA nephropathiában rendellenes O-glikozilációt mutat: megfigyelések három betegnél. Kidney Int. 2001;60:969–973.

31. Hiki Y. Az IgA1 csuklórégió O-kapcsolt oligoszacharidjai: rendellenes szerkezetének szerepe az IgA nefropátia előfordulásában és/vagy progressziójában. Clin Exp Nephrol. 2009;13:415–423.

32. Mestecky J, Tomana M, Moldoveanu Z és mtsai. Az IgA1 molekulák aberráns glikozilációjának szerepe az IgA nefropátia patogenezisében. Kidney Blood Press Res. 2008;31:29–37.

33. McCarthy DD, Kujawa J, Wilson C, et al. A BAFF-ot túlzottan expresszáló egerekben kommenzális flflóra-függő, IgA-asszociált nefropátia alakul ki. J Clin Invest. 2011;121:3991–4002.

34. Muto M, Manfroi B, Suzuki H és mtsai. Toll-like receptor 9 stimuláció indukálja a proliferációt indukáló ligandum aberráns expresszióját a mandula germinális centrum B-sejtjeiben IgA nephropathiában. J Am Soc Nephrol. 2017;28:1227–1238.

35. Latz E, Schoenemeyer A, Visintin A et al. TLR9 jelek az ER-ből a lizoszómában lévő CpG DNS-be történő transzlokáció után. Nat Immunol. 2004;5:190–198.

36. Hornung V, Rothenfusser S, Britsch S et al. Toll-like receptor 1-10 mRNS kvantitatív expressziója humán perifériás vér mononukleáris sejtjeinek sejtalcsoportjaiban és érzékenység a CpG oligodezoxinukleotidokra. J Immunol. 2002;168:4531–4537.

37. Kadowaki N, Ho S, Antonenko S et al. A humán dendritesejt-prekurzorok alcsoportjai különböző toll-szerű receptorokat expresszálnak, és különböző mikrobiális antigénekre reagálnak. J Exp Med. 2001;194:863–869.

38. He B, Xu W, Santini PA, et al. A bélbaktériumok T-sejt-független immunglobulin A(2) osztályváltást váltanak ki az APRIL citokin hámsejt szekréciójának indukálásával. Immunitás. 2007;26:812–826.

39. Mackay F, Schneider P. A BAFF kód feltörése. Nat Rev Immunol. 2009;9: 491–502.

40. Kunimoto DY, Nordan RP, Strober W. Az IL-6 az IL-1 erős kofaktora az IgM szintézisben és az IL-5 az IgA szintézisben. J Immunol. 1989;143:2230–2235.

41. Beagley KW, Eldridge JH, Lee F és mtsai. Interleukinok és IgA szintézis. A humán és egér interleukin 6 nagy sebességű IgA szekréciót indukál az IgA által elkötelezett B-sejtekben. J Exp Med. 1989;169:2133–2148.

42. Ramsay AJ, férj AJ, Ramshaw IA és társai. Az interleukin-6 szerepe a nyálkahártya IgA antitestválaszában in vivo. Tudomány. 1994; 264:561–563.

43. Nurieva RI, Chung Y, Martinez GJ és mtsai. A Bcl6 közvetíti a T follikuláris helper sejtek fejlődését. Tudomány. 2009;325:1001–1005.

44. Poholek AC, Hansen K, Hernandez SG és mtsai. A Bcl6 és T follikuláris segítő sejtek fejlődésének in vivo szabályozása. J Immunol. 2010;185: 313–326.

45. Jain S, Park G, Sproule TJ és mtsai. Az interleukin 6 felgyorsítja a mortalitást azáltal, hogy elősegíti a BXSB.Yaa egerek szisztémás lupus erythematosus-szerű betegségének progresszióját. PLoS One. 2016;11:e0153059.

46. ​​Litinskiy MB, Nardelli B, Hilbert DM és társai. A DC-k CD40-független immunglobulin osztályváltást indukálnak a BLyS és APRIL révén. Nat Immunol. 2002;3:822–829.

47. Castigli E, Wilson SA, Scott S és mtsai. A TACI és a BAFF-R izotípusváltást közvetít a B-sejtekben. J Exp Med. 2005;201:35–39.

48. Jourdan M, Chen M, Robert N és mtsai. Az IL-6 támogatja a hosszú életű emberi plazmasejtek létrehozását APRIL-lel vagy stromasejtekben oldódó faktorokkal kombinálva. Leukémia. 2014;28:1647–1656.

49. Chu VT, Fröhlich A, Steinhauser G et al. Az eozinofilek szükségesek a plazmasejtek fenntartásához a csontvelőben. Nat Immunol. 2011;12: 151–159.

50. Suzuki H, Suzuki Y, Aizawa M, et al. Th1 polarizáció egér IgA nefropátiában, amelyet csontvelő-eredetű sejtek irányítanak. Kidney Int. 2007;72: 319–327.

51. Chintalacharuvu SR, Emancipator SN. Az egér B-sejtek által termelt IgA glikozilációját a Th2 citokinek megváltoztatják. J Immunol. 1997;159:2327–2333.

52. Yasutake J, Suzuki Y, Suzuki H, et al. Új, lektin-független megközelítés a galaktózhiányos IgA1 kimutatására IgA nefropátiában. Nephrol Dial Transplant. 2015;30:1315–1321.

53. Katafuchi R, Kiyoshi Y, Oh Y és társai. A glomeruláris pontszám mint prognosztikátor az IgA nefropátiában: hasznossága és korlátai. Clin Nephrol. 1998;49:1–8.

54. Ballardie FW, Roberts IS. A prednizolon és a citotoxikus szerek ellenőrzött prospektív vizsgálata progresszív IgA nephropathiában. J Am Soc Nephrol. 2002;13: 142–148.