A Klotho-hiány fokozza az IFN hipoxia által kiváltott expresszióját / a RIG-I felszabályozása révén a vesékben
Mar 25, 2022
Absztrakt A hipoxia gyakori út a végstádium előrehaladásáhozvesebetegség.A retinsavval indukálható gén I (RIG-I) egy RNS-helikázt kódol, amely felismeri a vírusokat, köztük a SARS-CoV2-t, amely az interferon (IFN)-a/ termeléséért felelős a vírusfertőzés terjedésének megakadályozása érdekében. A közelmúltban RIG-l aktivációt találtak hipoxiás körülmények között, és kimutatták, hogy a klotóhiány fokozza a RIG-I aktiválását egéragyban. Ezeknek a funkcióknak a vesegyulladásban betöltött szerepe azonban továbbra is megfoghatatlan. Itt az in vitro vizsgálatokhoz a RIG-I és az IFN-a/ expresszióját vizsgáltuk normál patkánybanvese(NRK)-52E-sejtek hipoxiás körülmények között inkubálva (1 százalék O2). Ezután a RIG-I-t vagy a kódolt siRNS-t megcélzó siRNS-t NRK52E sejtekbe transzfektáltuk, hogy megvizsgáljuk a RIG-I és az IFN-a/ß expresszióját hipoxiás körülmények között. Vizsgáltuk a RIG-I és az IFN-a/ expressziós szintjét is 33humánbanveselgA nephropathiával diagnosztizált biopsziás minták. Az in vivo vizsgálathoz vese hipoxiát váltottunk ki a veseartéria 10 perces szorításával vad típusú egerekben (WT egerekben) és Klotho-knockout egerekben (KIT/egerekben). A hipoxiás körülmények között végzett inkubáció növelte a RIG-lI és az IFN-a/ expresszióját NRK52E sejtekben. Felszabályozásuk gátolt volt a RIG-I-et célzó siRNS-sel transzfektált NRK52E sejtekben. IgA nephropathiában szenvedő betegeknél a vesebiopsziás minták immunhisztokémiai festése azt mutatta, hogy a RIG-I expressziója korrelált az IFN-a/ expressziójával (r=0.57,P).<0.001, and="" r=""><0.001, respectively).="" the="" expression="" levels="" of="" rig-i="" and="" ifn-a/β="" were="" upregulated="" in="">vesehipoxiás WT egerekben, és további felszabályozást figyeltek meg hipoxiás egerekben. Ezek az eredmények arra utalnak, hogy a hipoxia indukálja az IFN-a/ expresszióját a RIG-I felszabályozásán keresztül, és hogy a klotóhiány erősíti ezt a hipoxia által kiváltott expressziótvese.
Kulcsszavak:vesebetegség; vesesejtek; vesecsere; vesekárosodás; vese
A CISTANCHE JAVÍTJA A VESE/VESE MŰKÖDÉSÉT
BevezetésKrónikusvesebetegségA (CKD) 2017-ben világszerte 697,5 millió embert érintett [1], ezért közismert, hogy komoly egészségügyi probléma. A CKD progressziójának késleltetésére a renin-angiotenzin-aldoszteron rendszer (RAAS) útvonal gátlóit alkalmazzák klinikai környezetben [2,3]. Jótékony hatásaik azonban korlátozottak, és sok betegnek végül vesepótló kezelésre van szüksége[4]. Patológiailag a krónikus gyulladás és az intersticiális fibrózis a CKD közös jellemzője, függetlenül az elsődleges betegségtől [5]. Bár a transzformáló növekedési faktor (TGF)- 1 kulcsszerepet játszik az intersticiális fibrózis kialakulásában [6-8], korábbi tanulmányok kimutatták, hogy a gyulladásos sejtek infiltrációja felelős a TGF termeléséért{{12} } [9]. Ezek az eredmények arra utalnak, hogy a gyulladás az intersticiális fibrózis felfelé irányuló eseménye, és hogy a gyulladás a CKD terápiás célpontja.
A hipoxia olyan állapot, amelyben az elégtelen oxigén jut be a szövetekbe. A hipoxiára adott sejtes válaszként a hipoxia-indukálható faktorok (HIF) fontos szerepet játszanak a szövetkárosodás megelőzésében [10-12]. A súlyos hipoxia azonban akut vaszkuláris betegségekhez vezet, mint például a stroke [13], az angina pectoris [14] és a perifériás artéria betegség [15]. A közelmúltban arról számoltak be, hogy a krónikus hipoxia, mint például az alvási apnoe, szintén hozzájárul különböző betegségek kialakulásához [16]. Tekintettel avese, a hipoxia állítólag a CKD stádiumának előrehaladtával fokozódik, és jelenleg a végstádiumhoz vezető általános patofiziológiának számít.vesebetegség[17]. Ahogy fentebb említettük, a gyulladást felfelé irányuló eseménynek tekintik, ezért molekuláris szinten tisztázni kell azt a mechanizmust, amellyel a hipoxia gyulladást indukál. A gyulladást fájdalom, hőség, bőrpír, duzzanat és funkcióvesztés jellemzi[18]. Alapvetően azonban a sejtsérülés kezdeti okának kiküszöbölésére, valamint a nekrotikus sejtek és a sérült szövetek eltávolítására szolgál. Mindenesetre a gyulladás nem specifikus válasz, és úgy gondolják, hogy a veleszületett immunitás főként a gyulladás kezdeti folyamatában vesz részt az interferon (IFN)- / [19] termelésével. A veleszületett immunitásban szerepet játszó tényezők közül a retinsavval indukálható gén I (RIG-I) felelős a vírusfertőzésekre adott immunválaszért[20. Nevezetesen, a közelmúltban végzett tanulmányok kimutatták, hogy a hipoxia fokozza a RIG-I expresszióját az agyban és a májban, ami IFN-/termelést eredményez [21,22]. Azonban a hypoxia szerepe az IFN-/B RIG-I által közvetített expressziójában avesemegfoghatatlan marad.
A Klotho-t először öregedésgátló fehérjeként számolták be [23]. Valójában a klotho-hiányos egerek élettartama lerövidült, az emberi öregedéshez hasonló fenotípusok kíséretében. Ezzel szemben a klotho transzgenikus egerek élettartama meghosszabbodik [24]. Ami a renoprotektív hatást illeti, a klotho-hiány fokozza a vesekárosodást a vesebetegségek kísérleti modelljeiben, míg a klotho túlzott expressziója vagy a klotho fehérje beadása javítja azt [25]. A Klotho fehérje három formában létezik: membrán, szekretált és intracelluláris koto. Ezek közül az intracelluláris klotó a gyulladással együtt gátolja a RIG-I expressziót [26], ami felveti annak lehetőségét, hogy a klotóhiány súlyosbítja a hipoxia által kiváltott RIG-I és IFN-/in szabályozást.vese.Ezek az eredmények arra a hipotézisünkre vezettek, hogy a RIG-I és az IFN-/ expressziója hipoxiás körülmények között megnövekedett egy vesetubuláris sejtvonalban, és ezek hipoxia által kiváltott felszabályozása felerősödött klotho-knockout egerekben (KI-7). egerek). Ebben a tanulmányban kimutattuk, hogy a hipoxia normál patkányban felszabályozza a RIG-I-et és az IFN-a/-t.vesesejtek (NRK-52E) és egérvesék. Azt is kimutattuk, hogy a RIG-I felelős az IFN-c/B hipooxia által kiváltott felszabályozásáért.veseIgA nephropathiával diagnosztizált betegek mintáiból kiderült, hogy a RIG-I expresszió pozitívan korrelált az IFN- / . Végül a RIG-I és az IFN- / hipoxia által kiváltott upregulációja felerősödött KI-/- egerekben. Ezek az eredmények arra utalnak, hogy a klotho-hiány fokozza az IFN-/ hipoxia által kiváltott expresszióját a RIG-I felszabályozása révén.vese.
A CISTANCHE JAVÍTJA A vese-/veseelégtelenséget
Anyagok és módszerek ÁllatokA hím C57BL/6J vad típusú (WT) egereket (8 hetesek és 20-25 g tömegűek) a Charles River Laboratories Japantól (Yokohama, Japán) szereztük be. A hím egereket (6 hetesek és körülbelül 15 g tömegűek) a CLEA Japan, Inc.-től vásároltuk. Az egereket a Hirosima Egyetem Laboratóriumi Állattudományi Intézetében (Hirosima, Japán) helyezték el a korábban leírtak szerint [27]. Minden kísérletet jóváhagyott a Hiroshima Egyetem Intézményi Állatgondozási és Felhasználási Bizottsága (engedélyszámok: A19-158 és 2019-156), és a National Institutes of Health (NIH) laboratóriumi állatok használatára vonatkozó iránymutatásai szerint hajtották végre. A WT és KI-' egereket kontrollcsoportra vagy hipoxiás csoportra osztották (minden csoportban n=5). A bal veseartéria 10 perces, általános érzéstelenítésben (0,3 mg/kg medetomidin, 4 mg/kg midazolam és 5 mg/kg butorfanol) történő szorításával váltottunk ki hipoxiás állapotokat[28]. A kontrollcsoportba tartozó egereken álműtétet hajtottak végre, amely ugyanaz volt, mint a hipoxiás csoport egereiben, kivéve az artéria lekötésének hiányát. 10 perces hipoxia után az egereket szívpunkcióval elaltatták, ésvesebetakarították. Hipoxia aveseWestern blot vizsgálattal igazolták az eritropoetin expresszióját (S1 ábra).
SejttenyésztésA normál patkányvese(NRK)-52Az E sejteket az American Type Culture Col. lectiontől (Manassas, VA, USA) vásároltuk. Az NRK-52E sejteket 10 százalék magzatot tartalmazó RPMI-1640 tápközegben tenyésztettük. szarvasmarha szérum (FBS) (Nichirei Bioscience, Tokió, Japán) és penicillin/streptomy-cin (Nacalai Tesque, Kyoto, Japán). Ezeket a sejteket 10 cm-es tenyészedényekbe oltottuk. A szubkonfluenciáig történő növekedés után a sejteket 1%-os O2Moduláris inkubátorkamrában (MIC 101; Billups-Rothenberg, San Diego, CA, USA) inkubáltuk 30, 60, 90 és 120 percig. Teljes sejt lizátumokat készítettünk és alávetettük. Western blot analízishez. Az NRK-52E sejtek hipoxiáját Western blottal igazoltuk a HIF-1 expressziójára (S2 ábra).
A RIG-I siRNS transzfekciójaAz NRK52E sejteket 20 nM siRNS-sel transzfektáltuk, amely RIG-I-et (RSS311418: Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) vagy negatív kontroll siRNS-t (4390843; Applied Biosystems, Waltham, MA, USA) Lipofectamine 2000 ReagentThe FisherificThe Transfection (SharerificoThe Transfection) alkalmazásával. , a gyártó utasításainak megfelelően. 43-45 óra elteltével ezen sejtek egy részét hipoxiás körülmények között (1% O,) 30 percig inkubáltuk a RIG-I értékelésére. A többi sejtet friss táptalajra cseréltük. 24 óra elteltével ezeket a sejteket hipoxiás körülmények között (1% O2) inkubáltuk 60 és 120 percig, hogy igazoljuk az IFN-a/szuppressziót. Teljes sejt lizátumokat készítettünk és Western blot analízisnek vetettük alá.
Western blot analízisA mintagyűjtést és a Western blottingot a korábban leírt módszerek szerint végeztük[29]. Nyúl monoklonális anti-RIG-I antitest (#3743S; Cell Signaling Technology, Danvers, MA, USA), nyúl poliklonális anti-IFN- 11 antitest (bs-7023R; Bioss Anti-bodies, Woburn, MA, USA), nyúl poliklonális anti-IFN-antitest (GTX37658; GeneTex, Irvine, CA, USA), nyúl monoklonális anti-RIG-I antitest (=700366; Invitrogen, Carlsbad, CA, USA), nyúl poliklonális anti-IFN- 2 antitest (ab193055; Abcam, Cambridge, Egyesült Királyság), nyúl poliklonális anti-IFN-antitest (PA5-20390; Invitrogen), patkány monoklonális anti-humán klotho antitest (KO603; TransGenic, Fukuoka , Japán), egér monoklonális anti- -aktin antitestet (A5316; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) és egér monoklonális anti- -tubulin antitestet (T9026; Sigma-Aldrich) használtak. mint elsődleges antitestek. Másodlagos antitestként torma-peroxidázzal konjugált kecske anti-nyúl immunglobulin G-t (Dako, Glostrup, Dánia) és kecske anti-egér immunglobulin G-t (Dako) használtunk. A SuperSignal West Dura-t és a Pico rendszert (Thermo Fisher Scientific) használták a jelek észlelésére. Az egyes sávok intenzitását ImageJ szoftverrel (1.47y verzió; National Institutes of Health, Bethesda, MD, USA) mértük, és az -aktin vagy -tubulin szintjére normalizáltuk.
A CISTANCHE JAVÍTJA A VESE-/VESEBETEGSÉGET
Az egér veseszövetének immunhisztokémiai elemzéseAz immunhisztokémiai festést a korábban leírt módszerek szerint végeztük [27]. Elsődleges antitestként a következő termékeket alkalmaztuk: nyúl monoklonális anti-RIG-I antitest (#700366; Invitrogen), nyúl poliklonális anti-IFN- 2 antitest (ab193055; Abcam), nyúl poliklonális anti-IFN-antitest ( PA5-20390; Invitrogen) és patkány monoklonális anti-humán klotho antitest (KO603; TransGenic). A RIG-I-, IFN-a/ - és kloto-pozitív területeket 20 véletlenszerűen kiválasztott mező átlagaként határoztuk meg. ImageJ szoftver.
Klinikai mintagyűjtés és etikai nyilatkozatVesemintákat vettek vesebiopsziával a Hiroshima Egyetemi Kórházban 2014 augusztusa és 2016 novembere között 33 betegtől, akiknél IgA nefropátiát diagnosztizáltak. Ez a tanulmány megfelelt a Helsinki Nyilatkozatban foglalt elveknek, és a Hiroshima Egyetem Etikai Bizottsága (E-1718) hagyta jóvá. A tájékozott beleegyezés a leiratkozás formájában történt egy webhelyen (httns:/inzounaika). Hiroshima-uaciplresearchl opt out.html).
Az emberi veseszövet immunhisztokémiai elemzéseAz immunfestést a korábban leírt módszerek szerint végeztük [27]. A következő elsődleges antitesteket használtuk: nyúl monodonális anti-RIG-I antitest (#700366; Invitrogen), egér monoklonális anti-IFN-antitest (sc-373757; Santa Cruz Biotechnology, Dallas, TX, USA) és nyúl A poliklonális anti-IFN-antitest (PA{9}}; Invitrogen), a RIG-I- és IFN-a/-pozitív területeket öt véletlenszerűen kiválasztott mező átlagaként határoztuk meg az Image] szoftverrel.
Statisztikai analízisAz eredményeket átlag ± standard deviáció (SD) formájában mutatjuk be. A korrelációkat egyváltozós regressziós analízissel számítottuk ki. Többszörös összehasonlításhoz egyirányú varianciaanalízist (ANOVA) alkalmaztunk, amelyet Student-féle t-teszt követett Bonferroni korrekcióval. A két csoport közötti különbségeket Student-féle t-próbával elemeztük.P<0.05 was="" considered="" as="" statistically="">
Eredmények:A hipoxia fokozza a RIG-I és az IFN-a/ szabályozását a vesehámsejtek patkánysejtvonalábanA hipoxia RIG-I és IFN-a/ expressziójára gyakorolt hatásának azonosítására in vitro Western blot analízist végeztünk ezekre a fehérjékre hipoxiás körülmények között tenyésztett NRK-52E sejtekben. A RIG-I fehérjeszintje 30 percnél érte el a csúcsot, majd fokozatosan csökkent az NRK-52E sejtekben hipoxiás stimuláció hatására (1A ábra). -52E-sejtek hipoxiás stimulációval (Eig 1Band1C). A RIG-I leütése csökkenti az IFN-a/ expresszióját hipoxiás NRK52E sejtekben Annak felmérésére, hogy a RIG-I részt vesz-e az IFN- / expressziójában hipoxiás körülmények között, megvizsgáltuk expressziójukat az NRK-52E-sejtekben, amelyek transzfektált RIG-I siRNS vagy negatív
kontroll siRNS. Először is megerősítettük a RIG-siRNS leütő hatását NRK-52E sejtekben. A RIG-I Western-blot vizsgálata kimutatta, hogy a RIG-I siRNS csökkentette a RIG-I expresszióját NRK-52E sejtekben, akár hipoxiás stimulációval, akár anélkül (Eig 2A). Ezt követően a RIG hipoxia által kiváltott felszabályozásának szerepét vizsgáltuk -I az IFN- /B expressziójában NRK-52E sejtekben RIG-I siRNS vagy negatív kontroll alkalmazásával. A RIG-siRNS elnyomta az IFN- / expresszióját NRK-52Esejtekben (Eig2Band2C).
A RIG-I korrelál az IFN-/expressziós szintekkel az IgA nefropátia humán vesemintájábanMegvizsgáltuk, hogy a RIG-I expressziós szintje összefüggésben van-e az IFN-a/-val az IgA nephropathiában szenvedő betegek vesebiopsziás mintáiban (n=33). Ezen betegek részletes klinikai jellemzőit az S1 táblázat tartalmazza. A RIG-I és az IFN- / immunhisztokémiai festése kimutatta expressziójukat a glomerulusokban és vesetubulusokban (3A. ábra), és kimutatta, hogy a RIG-I pozitív korrelációt mutat az IFN-o/-val (r=0.57,P).<0.001, and="" r=""><0.001, respectively)(eig="">
A hipoxia nem változtatja meg a klotho expressziós szintjét WT és K1-/ egerekbenAnnak érdekében, hogy meghatározzuk a hipoxiás stimuláció hatását a klotho expresszióra in vivo, megvizsgáltuk expresszióját WT és K-/egerekben 10 perces hipoxiás stimulációval vagy anélkül. Western-blot és immunhisztokémiai festés kimutatta, hogy a klotho-expresszió nem különbözött a hypoxiás és nem hypoxiás WT-egerek között, és a klotho-expresszió nem volt megfigyelhető KIT/egerekben, függetlenül a hipoxiás stimuláció meglététől vagy hiányától (Eig 4A and 4B). A WT egerekben a klotho fehérje festődött a tubuláris sejtek citoplazmájában (4B. ábra).A RIG-I expressziója felerősödik hipoxiás körülmények között K~ egerekben.Az intracelluláris klotó a jelentések szerint képes elnyomni a RIG-I által közvetített gyulladást, ezért megvizsgáltuk a RIG-I expressziós szintjét és lokalizációját hipoxiás betegekben.veseWT és Kl−/− egerek esetében. A Western-blot kimutatta, hogy a RIG-I expressziója megnövekedett WT egerekben hipoxiás stimuláció hatására, és hogy felerősödött Kl-/- egerekben (5A. ábra). Az immunhisztokémia azt mutatta, hogy a RIG-I-pozitív terület megnőtt a Kl-/- egerekben, ami hasonló volt a Western-blottal kapott eredményekhez (5B. ábra).
Az IFN-hipoxiás körülmények között a KI--egerekben fokozottan szabályozottAnnak érdekében, hogy azonosítsuk a hypoxia hatását az-a expressziójára wvo-ban, megvizsgáltuk annak expressziós szintjét és lokalizációját hipoxiás WT és KI egerekben. A Western-blot kimutatta, hogy az IFN-expresszió nőtt WT egerekben hipoxiás stimuláció hatására, és tovább fokozódott egerekben (6A. ábra). Az immunhisztokémiai festés azt is feltárta, hogy az IFN- -pozitív területet főként tubuláris sejtekben figyelték meg, és az IFN-expressziós szintje ugyanazt a tendenciát mutatta, mint a Western-blot (6B. ábra).
K1T-/egerekben hipoxiás körülmények között megnövekszik az IFN-szintAz IFN-c mellett megvizsgáltuk az IFN-Bin hipoxiás WT és egerek expressziós szintjét és lokalizációját. A Western blot eredményei szerint az IFN-expresszió nőtt WT egerekben hipoxiás stimuláció hatására, míg további növekedést figyeltek meg a KIT/egerekben (7A. ábra). Az IFN- -pozitív terület számszerűsítésekor az IFN-expresszió szintje megnőtt a KI-/- egerekben a WT' egerekéhez képest (7B. ábra).
Kl−/− egerekben megfigyelhető, függetlenül a hipoxiás stimuláció jelenlététől. Kimutattuk, hogy a vese hypoxia fokozta a RIG-I és az IFN- / expresszióját, és expressziójuk tovább fokozódott Kl−/− egerekben. Ezek az eredmények arra utalnak, hogy a klotho-hiány fokozta a RIG-I hipoxia által kiváltott expresszióját, ami az IFN- / felszabályozását eredményezte. Megállapítottuk, hogy a hipoxia indukálta a RIG-I és az IFN- / expresszióját mind in vitro, mind in vivo vizsgálatokban. A hipoxiás körülményekhez való alkalmazkodás érdekében a HIF stabilizálódik, és transzkripciós faktorként működik [30]. Egy korábbi tanulmányban arról számoltak be, hogy a RIG-I részt vesz a HIF-indukálható molekulákban. Azonban nem tudtuk azonosítani, hogy a RIG-I a HIF downstream effektora. A vírusfertőzés mellett a RIG-I expressziója fokozódik hipoxiás körülmények között [31]. Bár korábbi tanulmányok arról számoltak be, hogy a hipoxia hatással van a tubuláris epiteliális sejtekre, az endothelsejtekre, a pericitákra, a fibroblasztokra, a gyulladásos sejtekre és a progenitor sejtekre a vesékben [32,33], kimutattuk, hogy a RIG-I fokozódását elsősorban egerek tubuláris epiteliális sejtjeiben figyelték meg. hipoxiás stimulációval, valamint IgA nephropathiában szenvedő betegeknél. Mivel a vesetubulusokat a transzuretrális kórokozók belépési helyének tekintik [34], a RIG-I kulcsszerepet játszhat a tubuláris epiteliális sejtek immunválaszában hipoxiás körülmények között. A veleszületett immunválaszt nemcsak a mikroorganizmusok aktiválják, hanem a sérült, sérült vagy stresszes sejtek vészjelzései is [35]. Ebben a vizsgálatban kimutattuk, hogy a RIG-I hipoxia által kiváltott expressziója részt vett az IFN- / termelésben egy vesetubulusok patkánysejtvonalában. A bemutatott adatok arra utalnak, hogy a RIG-I expresszió a citoszol veleszületett immunrendszereként funkcionál, válaszul a hipoxiás stresszre, valamint a vírusfertőzésre. Korábbi tanulmányok leírták, hogy a hypoxia fokozódik a CKD kialakulása során, függetlenül az elsődleges betegségtől, és hogy a hipoxia hozzájárul a vesekárosodás progressziójához [17]. Egy vér oxigenizációs szinttől függő mágneses rezonancia képalkotást alkalmazó klinikai vizsgálatban a vese hipoxia nemcsak felerősödött a CKD progressziója során, hanem előre jelezte is a progressziót [36]. Így jelenleg a hipoxiát tekintik a végstádium előrehaladásának közös útjánakvesebetegség, ezért a hypoxia által kiváltott gyulladásnak terápiás célpontnak kell lennie a CKD progressziójának gátlásában.
Kimutattuk, hogy a hipoxia IFN- / termelést indukál, amelyek az 1-es típusú interferonok közé tartoznak. Az 1-es típusú interferonok alapvetően a vírusreplikáció gátlása [37] és ellenáll a hipoxia által kiváltott immunszuppressziónak [21,22]. Az eddig elvégzett vizsgálatok azonban beszámoltak arról, hogy az 1-es típusú interferonok a természetes ölősejtek aktiválásához vezetnek, és nemcsak a vírussal fertőzött sejtek eltávolításában játszanak fontos szerepet, hanem a szövetkárosodásban is [38]. Valójában korábbi tanulmányok arról számoltak be, hogy a RIG-I hozzájárul a különböző szervek, például a tüdő gyulladásához [39],vese[40] és az idegrendszer [21]. Ebben a tanulmányban azt is kimutattuk, hogy a RIG-I hipoxia által kiváltott felszabályozása felelős az IFN- / termelésért. Így az 1-es típusú interferonok védhetnek a fertőzésekkel szemben hipoxiás állapotban, de nem fertőzött körülmények között károsak lennének. Ezenkívül egy korábbi tanulmány arról számolt be, hogy az 1-es típusú interferonok mellett a RIG-I különféle citokinek, például IL-1, IL- 6 és TNF-termelésben is részt vesz [41]. Mivel ezek a citokinek szövetkárosodást okoznak, a RIG-I hipoxia által kiváltott felszabályozása részt vehet a CKD progressziójában. Kimutattuk, hogy a klotho-hiány fokozza a hipoxia által kiváltott RIG-I expressziót, ami az IFN- / emelkedésével jár együtt. A Klotho expressziója állítólag csökken az öregedéssel és a CKD progressziójával [42,43]. Emiatt a RIG-I expressziója fokozottabban szabályozható időseknél és CKD-s betegeknél hipoxiás körülmények között, ami IFN- / termeléshez vezet. Mint fentebb említettük, a klotho három formában létezik – membrán, szekretált és intracelluláris klotó –, amely utóbbi felelős a gyulladásos citokinek RIG-I által közvetített termelésének elnyomásáért [26]. A lokalizációt tekintve kimutattuk, hogy a klotho expresszió főként a vese tubuláris sejtjeiben fordul elő, és bizonyíték arra, hogy a RIG-I expresszió főként a vese tubuláris sejtjeiben fokozódik hipoxiás körülmények között. Ezek az eredmények arra utalnak, hogy a klotho expresszió csökkenése hozzájárul az 1-es típusú interferonok fokozott RIG-I által közvetített termeléséhez hipoxiás körülmények között.
A CISTANCHE JAVÍTJA A VESE-/VESEFÁJDALÁST
Összefoglalva, kimutattuk, hogy a hipoxiás stimuláció által kiváltott RIG-I és IFN- / egérvesében és patkány vese tubuláris sejtvonalában, valamint hogy a RIG-I részt vett a hipoxiában indukált IFN- / in vitro kísérletekben. Az IgA nephropathiában szenvedő betegek vesebiopsziás mintáiban a RIG-I expresszió korrelált az IFN- / emelkedő szabályozásával. Végül, a hipoxia által kiváltott RIG-I expressziója felerősödött klotho-knockout egerekben, az IFN- / upregulációjával együtt. Az 1-es típusú interferon RIG-I által közvetített expressziója megnövekedett hipoxiás körülmények között, és további upregulációt figyeltek meg a klotho downreguláció állapotában. Klinikai vizsgálatok szerint a hypoxia az előrehaladott CKD stádiumban súlyosbodik [36], és előrejelzi a CKD hosszú távú progresszióját [36]. Ezenkívül a klotho expresszió csökken a vesefunkció hanyatlásával, és a klotho expresszió csökkenése vesekárosodáshoz kapcsolódik [44]. Ebben a tanulmányban kimutattuk, hogy a klotho-hiány fokozza az IFN- / hipoxia által kiváltott expresszióját a RIG-I vesékben történő felpörgetésén keresztül, és hogy a RIG-I expressziója összefüggésben van az IFN- / expressziójával az IgA nephropathiában szenvedő betegekben. Ezeket az eredményeket összesítve megállapítható, hogy a CKD progressziója során mind a hipoxia, mind a klotho redukciója elősegíthető, így a veleszületett immunitás aktiválódása fokozódik a CKD-s betegekben.
