A MiR-214 javítja a szepszis által kiváltott akut vesesérülést a PTEN/AKT/mTOR által szabályozott autofágián keresztül
Feb 28, 2022
Absztrakt. Korábbi tanulmányok azt sugallták, hogy az oxidatív stressz és az autofágia akut következményekkel járvese sérülés (AKI) szepszis alatt és a mikroRNS (miR)-214 létfontosságú szerepet játszik aveseoxidatív stressznek van kitéve. Jelen tanulmány célja annak tesztelése volt, hogy a miR-214 renoprotekciója összefüggésben van-e a szepszisben szenvedő autofágiával. Az autofágia szerepét vakbélligálás és szúrás (CLP) egérmodellben vizsgálták. Reverz transzkripciós kvantitatív polimeráz láncreakciót (RT-qPCR) használtak a miR-214 expressziójának elemzésére. Felépítése és funkciójaveseaz egerekből betakarított.VeseAz autofágia szinteket immunhisztokémiai, immunfluoreszcens és Western blot módszerrel detektáltuk. Azt találták, hogy a miR-214 enyhítheti az AKI-t szeptikus egerekben azáltal, hogy gátolja aveseautofágia. Ezenkívül a miR-214 gátolta az autofágiát azáltal, hogy elnémította a PTEN expresszióját aveseszeptikus egerek szövetei. Ezek az eredmények azt mutatták, hogy a miR-214 javította a CLP-indukálta AKI-t az oxidatív stressz csökkentésével és az autofágia gátlásával a PTEN/AKT/mTOR útvonal szabályozásán keresztül.
Kulcsszavak:mikroRNS-214, szepszis, akut vesekárosodás, autofágia, vese
Bevezetés Akutvese sérülés(AKI) a szepszis egyik leggyakoribb szövődménye, és a szeptikus betegek 40-50 százalékánál fordul elő, a halálozási arány pedig eléri a 60 százalékot (1). A szepszis által kiváltott AKI patogenezise azonban továbbra is tisztázatlan. Az autofágia kulcsszerepet játszik a szepszis által kiváltott AKI-ban, és az autofágia gátlása AKI kialakulását eredményezi a szepszis során (2, 3). Korábbi tanulmányok (4, 5) megerősítették, hogy a szepszis több szervben autofágiát vált ki, beleértve avese(6) és autofág folyamatok vesznek részt a sérült mitokondriumok és az oxidatív stressz eltávolításában (7). A túlzott autofágia azonban nem kívánt és káros sejthalált okozhat (8). Ezért az autofágia mérsékelt szintje a kulcsa a szepszis által kiváltott AKI csökkentésének. Korábbi tanulmányok arról számoltak be, hogy a miR-214 az apoptózis gátlásával javítja az ischaemia-reperfúzió által kiváltott AKI-t (9), a miR-214 pedig a reaktív oxigénfajták (ROS)/AKT/mTOR jelátviteli útvonalon keresztül elnyomja az oxidatív stresszt diabéteszes nephropathiában (10). A jelen tanulmány kimutatta, hogy a miR-214 az autofágia gátlásával mérsékelheti a szepszis által kiváltott szívizom diszfunkciót egerekben (11). Azt azonban még tisztázni kell, hogy a miR-214 képes-e javítani a szepszis által kiváltott AKI-t. Jelen tanulmányban azt feltételezték, hogy a miR-214 gyengíti a CLP-indukálta AKI-t az oxidatív stressz csökkentésével és az autofágia gátlásával a PTEN/AKT/mTOR útvonal szabályozásán keresztül.
A CISTANCHE JAVÍTJA A VESE-/VESEBETEGSÉGET
Anyagok és metódusok
Állatok.Összesen 100 Kunming hím egeret (tömeg, 20,40±2,92 g; életkor, 6-8 hetes) használtunk a Hebei Orvostudományi Egyetem (Shijiazhuang, Kína) Orvosi Laboratóriumi Állatközpontjától. Minden egeret hozzászoktattunk a 12 órás világos/sötét ciklushoz 24°C-on, 50 százalékos páratartalom mellett, és szabad hozzáférést kaptak élelemhez és vízhez legalább 1 héttel a kísérletek előtt. Minden kísérleti eljárást szigorúan az Országos Egészségügyi Intézet iránymutatásaival (85-23. számú NIH, felülvizsgálva 1996-ban) és a Cangzhou Központi Kórház Intézményi Állatgondozási és Felhasználási Bizottságai jóváhagyásával (jóváhagyási szám: 2017-020-) hajtottak végre. 01). Minden műtétet altatásban végeztek, és mindent megtettek a szenvedés minimalizálása érdekében.
Vakbél lekötés és szúrás (CLP).CLP-t végeztünk egereken, hogy létrehozzuk az egér szepszis modelljét, amint azt korábban leírtuk (12). Az izoflurán inhalációval történő érzéstelenítést követően (3 százalékban indukált és 0,5 százalékban tartottuk) egy 1 cm-es középvonali metszést vágtunk. A szabaddá tett vakbélt (1 cm távolságra a végétől) két szúrással lekötöttük egy 23-as tűvel. A vakbél finoman kinyomott egy kis mennyiségű ürüléket, és visszahelyezték anatómiai helyzetébe. A hasfalat rétegesen varrták 3-0 selyemfonattal. Az eljárást követően 1 ml 0,9 százalékos sóoldatot fecskendeztek be szubkután. Az egerek csak vízhez kaptak szabad hozzáférést. Az álmodell egereket ugyanúgy kezeltük, mint a CLP nélküli CLP-modellt.
Kísérleti terv. Az egereket (n=6 színlelt műtéthez és CLP-hez) véletlenszerűen hét csoportba osztották: ál-csoport, CLP-csoport, adenovírus (Ad)-zöld fluoreszcens fehérje (GFP) plusz CLP-csoport, Ad-miR-214 plusz CLP-csoport. , anti-miR-214 plusz CLP csoport, PTEN inhibitor plusz CLP csoport és Ad-miR-214 plus PTEN inhibitor plus CLP csoport. A Sham csoport egereit ugyanilyen eljárásnak tesszük ki, de a vakbél lekötése és punkciója nélkül. A többi csoport egerei vakbéllekötést és perforációt kaptak. Minden egeret gyorsan elaltattunk izoflurán inhalációval, hogy vért, vizeletet ésvesemintákat 24 órával az utolsó kezelés után.
Adenovírus által közvetített Ad-miR-214, anti-miR-214 vagy Ad-GFPgéntranszfer in vivo és PTEN inhibitor injekció. Az Ad-miR-214, az anti-miR-214 vagy az Ad-GFP (Shanghai GenePharma Co., Ltd.) 4 nappal a CLP előtt került be az egerek hasüregébe. Röviden, az egereket izoflurán belélegzéssel érzéstelenítettük. Egy 200 µl adenovírust (2x1011 pfu, miR-214-et, anti-miR-214-et vagy Ad-GFP-t expresszáló) tartalmazó katétert adtunk be normál egereknek intraperitoneális injekcióval. A PTEN-inhibitort (VO-OHpic, intraperitoneális, Sigma-Aldrich; Merck KGaA) olyan CLP-egereknek adták be, amelyek anti-miR-214-et kaptak intraperitoneális injekcióban egyszeri, 10 µg/kg dózisban 30 perccel az adenovírus beadása előtt. .
A veseműködés értékelése. Vérmintákat vettünk az egér szívéből, majd centrifugálást végeztünk (szobahőmérsékleten 15 percig, 3, 000 xg) a szérum összegyűjtése céljából. A vér karbamid-nitrogén (BUN) és szérum kreatinin (Cr) szérumszintjét Hitachi 7600 automata analizátorral (Hitachi, Ltd.) határoztuk meg. ELISA-t használtunk a szint elemzésérevese sérülésmolekula-1 (KIM-1; katalógusszám: RKM100; R&D Systems, Inc.) és neutrofil zselatinázzal asszociált lipokalin (NGAL; katalógusszám: DY3508; R&D Systems, Inc.) vizeletmintákban.
A szérum gyulladásos citokin vizsgálata.A szérum TNF- (kat. sz. H052) és az IL-6 (kat. sz. H007) kereskedelemben kapható ELISA kitekkel (Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute) vizsgáltuk a gyártó utasításai szerint.Oxidatív stressz markerek mérése. A megfelelő vizsgálati készletet (Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Nanjing, Kína) használtuk a malondialdehid (MDA) szintjének mérésére és a szuperoxid-diszmutáz (SOD) aktivitásának tesztelésére a gyártó utasításainak megfelelően.
Szövettani és tubuláris sérülés pontszáma. Minden egeret alávetettünkveseperfúzió érzéstelenítésben 24 órával a CLP után. AzveseA mintákat 4%-os paraformaldehidben fixáltuk 72 órán keresztül 4°C-on. A szövetmintákat ezután etanolos oldatok fokozatos sorozatában dehidratáltuk, paraffinba ágyazva és 4 µm-es metszetekre vágva. A metszeteket (4 µm) mikrotommal vágtuk, és a szövetmetszeteket hematoxilinnel (5 perc) és eozinnal (1 perc) festettük szobahőmérsékleten szövettani vizsgálat céljából. A tárgylemezeket mikroszkóppal (BX51, Olympus Corporation) értékeltük és osztályoztuk.Vesetissues with the following histopathological changes were judged injured: Loss of brush border, vacuolization, cast formation, tubular dilation and disruption, cell lysis and cellular necrosis. Tissue damage was checked in a blinded manner and scored by the percentage of damaged tubules: 0, no damage; 1, 0‑25; 2, 25‑50; 3, 50‑75; 4, >75 százalék (13).
Transzmissziós elektronmikroszkópia (TEM).Frissvesefoszfáttal pufferolt sóoldattal mostuk, 1 mm-es kockákra vágtuk, és egymás után 2,5%-os glutáraldehidben fixáltuk 24 órán keresztül 4 °C-on. A metszeteket 1%-os ozmium-tetroxidba merítettük 2 órára 4 °C-on, dehidratáltuk fokozatos etanolban és epoxigyantába ágyaztuk. Végül az ultravékony metszeteket (60 nm) kétszeresen megfestettük uranil-acetáttal és ólom-citráttal 20°C-on 60 percig. A megfigyelést transzmissziós elektronmikroszkóppal (Tecnai; Hitachi, Ltd.) végeztük 80 kV-on Electron Microscopy Film 4489 (ESTAR vastag alap; Kodak) segítségével.
Immunhisztokémia (IHC).FrissveseA szöveteket 4 százalékos paraformaldehidben rögzítettük (72 órán át 4 °C-on), és paraffinba ágyaztuk. A mintákat 4 µm vastag metszetekre vágtuk, és xilolban paraffinmentesítettük. Miután a szövetmetszeteket PBS-sel mostuk, 10 mM citrát pufferben (pH 60) 4 percig forraltuk az antigén kinyerésére, majd szobahőmérsékleten blokkoltuk 10 százalékos kecskeszérummal PBS-ben. 1 óráig. Az elsődleges antitestet (anti-LC3B; 1:400; katalógusszám: 4412; Cell Signaling Technology, Inc.) adtuk hozzá az utasításoknak megfelelően, és 4 °C-on 12 órán át inkubáltuk. A másodlagos antitestet (kecske antinyúl HRP; 1:2, 000; katalógusszám: BS13278; Bioworld Technology, Inc.) hozzáadtuk, és szobahőmérsékleten 10 percig inkubáltuk. DAB-t (100 µl) adtunk hozzá, és 5 percig ellenfestettük a fénymikroszkóp alatt megfigyelt festődéssel (CX31-P modell; Olympus Corporation). A barnának tűnő pozitív festődés intenzitását Image-Pro Plus 6.0 képelemző szoftverrel (Media Cybernetics, Inc.) határoztuk meg. Az integrál optikai sűrűséget (IOD) úgy számítottuk ki, hogy az az intenzitást reprezentálja. Az IOD értékek nőttek a fehérje expresszió növekedésével.
Fordított transzkripció – kvantitatív(RT-q) PCR. A teljes RNS-t extraháltukveseszöveta modell indukcióját követően TRIzol reagenssel (Thermo Fisher Scientific, Inc.). A TaqMan reverz transzkripciós kit (kat. szám: N8080234; Invitrogen; Thermo Fisher Scientific, Inc.) utasításai szerint az RNS-t cDNS-vé fordítottuk át. A következő termociklusos körülményeket alkalmaztuk (miR-214): Kezdeti denaturálás 95˚C-on 5 percig; ezt követi 40 ciklus denaturáció 95 °C-on 30 másodpercig, lágyítás 60 °C-on 30 másodpercig és megnyújtás 72 °C-on 30 másodpercig. Az RT-qPCR-t egy ABI Prism 7500 Sequence Detection System (PerkinElmer, Inc.) és egy szabványos SYBR Green PCR készlet (Toyobo Life Science) segítségével végezték el. Az U6-ot a miR-214 belső vezérlőjeként használták. A primer szekvenciák a következők voltak: miR-214, előre, 5'-AGCATAATACAGCAGGCACAGAC-3' és fordított, 5'-AAAGGTTGTTCTCCACTCTCTCAC-3'; U6, előre, 5'-ATTGGAACGATACAGAGAAGATT-3" és hátrafelé, 5'-GGAACGCTTCACGAATTTG-3". Ezeket a kísérleteket hatszor megismételték. Az eredményeket a 2-ΔΔCq módszerrel elemeztük (14). Az LC3, p62, PTEN, AKT és mTOR mRNS expressziós szintjeit RT-qPCR segítségével értékeltük. E gének belső referenciaként az aktint használva a 2-ΔΔCq-t használták a célgének relatív expressziójának mérésére. Az I. táblázatban látható primer szekvenciákat a Sangon Biotech Co., Ltd. szintetizálta.
Western blot. VeseA szövetet RIPA lizátummal (Beyotime Institute of Biotechnology) kevertük a homogenizálás érdekében, és a lízist leállítottuk, ha nem volt látható szövet. A mintákat 13, 000 xg-vel centrifugáltuk 10 percig -4 °C-on, és a felülúszót kinyertük a Western blot analízishez. Röviden, a fehérjekoncentrációkat a micro BCA protein assay kit (Thermo Fisher Scientific, Inc.) segítségével határoztuk meg. A fehérjemintákat (mintánként 80 µg) 12%-os nátrium-dodecil-szulfát-poliakrilamidegél-elektroforézissel elválasztottuk, majd polivinilidén-difluorid membránokra vittük át 4 °C-on egy éjszakán át. Az elválasztott fehérjéket PVDF membránokra vittük át. 5%-os fölözött tejben, szobahőmérsékleten 2 órán át történő blokkolást követően a membránokat egy éjszakán át (4°C-on) inkubáltuk elsődleges antitestekkel. A következő elsődleges antitesteket (minden Cell Signaling Technology, Inc.) használtuk: Könnyű lánc 3B (1:1, 000; kat. sz. 4412), p62 (1:1, 000; kat. szám . sz. 4060), anti-AKT (1:1,000; kat. sz. 9272), anti-p-mTOR (Ser 2448) (1:1, 000; kat. sz. . 5536), anti-mTOR (1:1, 000; kat. sz. 2972) és -aktin (1:2, 000; kat. sz. 4970). Mosás után a membránokat (szobahőmérsékleten 2 órán át) inkubáltuk a HRP-vel konjugált anti-nyúl másodlagos antitestekkel (1:3, 000; katalógusszám: A0208; Beyotime Institute of Biotechnology). A fehérjesávokat Immobilon Western (MilliporeSigma) segítségével detektáltuk, és Total-Lab TL120 szoftverrel (Nonlinear Dynamics, 2.01) elemeztük. A fehérje expressziója -aktinra normalizálódott.
Statisztikai analízis. A statisztikai elemzés a GraphPad Prism 9.{1}} (GraphPad Software, Inc.) segítségével történt. Minden adatot átlag ± szórásként vagy mediánként (interkvartilis tartományok) mutattunk be a folytonos változókra, azok eloszlásától függően. Az alapjellemzőket és az eredményeket egyirányú ANOVA-val, majd Tukey posthoc teszttel vagy Kruskal-Wallis teszttel, majd Dunn teszttel hasonlították össze. P<0.05 was="" considered="" to="" indicate="" a="" statistically="" significant="">
Eredmények
Időpont 24 órával a CLP után. Korábbi tanulmányok (6, 15, 16) beszámoltak arról, hogy a biokémiai (pl. LC3 és p62) analízis azt mutatja, hogy az autofágia fluxusa elnyomja a szepszis progresszióját 6-8 órás CLP után. Jelen tanulmányban az autolizoszómák száma aveseA CLP-vel kezelt egerek száma nőtt a műtétet követő 24 órán belül. Ezen kívül a markerek elemzésevese sérülésazt mutattaveseműködésa legsúlyosabban a CLP után 24 órával sérült. Ezért a CLP után 24 órával az időpontot választottuk a következő kísérletekhez.
Szabályozó hatás a miR-214-re a veseszövetekben. RT-qPCR analízist használtak a miR-214 expresszió kimutatására CLP-vel kezelt egerekben. Azt találták, hogy a miR-214 expressziója enyhén felszabályozott aveseszövetek CLP-műtét után 24 órával, összehasonlítva az ál-csoporttal (1,47-szeres, P<0.01, fig.="" 1a).="" the="" present="" study="" examined="" the="" reactive="" increase="" in="" mir‑214="" expression="" during="" sepsis="" as="" a="" compensatory="" protective="" mechanism.="" therefore,="" it="" evaluated="" the="" role="" of="" mir‑214="" in="" aki="" during="" sepsis="" by="" regulating="" its="" expression.="" as="" shown="" in="" fig.="" 1b,="" ad‑mir‑214="" increased="" mir‑214="" expression="" by="" 4.13‑fold="" 4="" days="" after="" intraperitoneally="" injecting="" 2x1011="" pfu/mice="" adenovirus,="" whereas="" anti‑mir‑214="" decreased="" mir‑214="" expression="" by="" 81.16%="" in="" the="">veseszövet, összehasonlítva a hamis csoporttal (mindkettő P<0.01). by="" contrast,="" ad‑gfp="" as="" a="" control="" group="" did="" not="" affect="" mir‑214‑3p="" expression,="" compared="" with="" the="" sham="" group="" (both="" p="">0.05).
A CISTANCHE JAVÍTJA A vese-/veseelégtelenséget
A miR-214 hatása a veseműködési zavarokra szeptikus egerekben.Minden egeret feláldoztunk, hogy vért, vizeletet ésvesemintákat 24 órával a CLP műtét után. A BUN és a Cr fontos mutatói a betegség súlyosságánakvese-értékvesztés (17). Ezenkívül az NGAL-t és a KIM-1-et a specifikus biomarkerekként azonosítottákvese sérülésfokozott expressziójuk pedig koraivese-tubuláris sérülés az AKI-ban (17). A 2A-D. ábrán látható, hogy a BUN, Cr, KIM-1 és NGAL szintje szignifikánsan megemelkedett a CLP-műtétet követően az ál-csoporthoz képest. Az Ad-miR-214 azonban szignifikánsan csökkentette a BUN-, Cr-, KIM-1- és NGAL-szinteket a CLP-csoporthoz képest (minden P<0.01), whereas="" anti‑mir‑214="" exhibited="" opposite="" effects="" in="" these="">veseműködésparamétereket. A PTEN-gátlóval végzett előkezelést követően azonban az Ad-miR-214 védőhatása fokozódott. Az eredmények azt mutatják, hogy a miR-214 mérsékli a veseműködési zavarokat szeptikus egerekben.
A miR-214 hatása a vesegyulladásra és az oxidatív stresszre.Amint a 3A és B ábrán látható, a CLP szignifikánsan megemelte a TNF- és IL-6 szintjét, míg az Ad-miR-214 szignifikánsan csökkentette e markerek szintjét. Összehasonlítva a
A miR-214 hatása a vese autofágiára szeptikus egerekben.A jelen tanulmány az LC3 változásait vizsgáltaveseszövetek IHC festéssel. Amint a 6. ábrán látható, a pozitív festődés LC3 intenzitása szignifikánsan megnőtt a CLP-csoportban a hamis csoporthoz képest (P<0.01) due="" to="" the="" activated="" autophagy.="" the="" expression="" level="" of="" lc3="" was="" lower="" in="" the="" ad‑mir‑214="" group="" and="" higher="" in="" the="" anti‑mir‑214="" group="" in="" comparison="" with="" the="" clp="" group=""><0.01). however,="" the="" administration="" of="" pten="" inhibitor="" enhanced="" the="" inhibition="" of="" autophagy="" effect="" of="">
A miR‑214 aktiválja az AKT/mTOR útvonalat a gátlás érdekébenautofágia a PTEN elnémításával a veseszövetekben.A CLP hatása az autofágiára inveseszöveteket az LC3-II/I és a p62 szintjének felmérésével vizsgálták. A PTEN/AKT/mTOR jelátviteli útvonal fontos szerepet játszik az autofágiában (18). A miR-214 PTEN-AKT/mTOR útvonalra gyakorolt hatásának vizsgálatához az LC3-II/I, a p62, az AKT, a p-AKT, az mTOR, a p-mTOR és a PTEN fehérjeszintjét Western blottal és RT- elemezték. qPCR analízis. Amint a 7A-C. ábrán látható, ezekben a fehérjékben gyorsan módosulnak, az LC3-II/LC3-I sebességének növekedésével és a p62 (mindkettő P) szintjének csökkenésével.<0.01) in="" the="" clp‑induced="" sepsis="" group.="" compared="" with="" the="" clp="" group,="" the="" rate="" of="" lc3‑ii/lc3‑i="" was="" significantly="" decreased,="" while="" the="" level="" of="" p62="" (both=""><0.01) was="" significantly="" increased="" in="" the="" ad‑mir‑214="" group.="" however,="" the="" inhibition="" of="" mir‑214="" displayed="" an="" opposite="" tendency="" to="" the="" above="" indicators="" (both=""><0.01). by="" contrast,="" the="" negative="" control="" had="" no="" effect="" on="" the="" changes="" in="" the="" rate="" of="" lc3‑ii/lc3‑i="" and="" the="" levels="" of="" p62="" in="">vese tissues (both P>0.05). The two indicators of LC3‑II/LC3‑I and p62 had no significant difference among the Ad‑miR‑214 group, the PTEN inhibitor group and the Ad‑miR‑214 + PTEN inhibitor group (all P>0.05). Ezek az eredmények azt mutatták, hogy az autofágiát a CLP indukálta, és a miR-214 túlzott expressziója részben gátolja azt.
Amint a 7A és D-F ábrán látható, a PTEN expressziós szintje (P<0.01) was="" increased,="" and="" the="" expression="" levels="" of="" p‑akt="" (ser473)="" and="" p‑mtor="" (ser2448)=""><0.01) were="" decreased="" by="" clp.="" compared="" with="" the="" clp="" group,="" the="" expression="" level="" of="" pten="" was="" reduced,="" while="" those="" of="" p‑akt="" and="" p‑mtor="" (all=""><0.01) were="" subsequently="" increased="" in="" the="" ad‑mir‑214="" group.="" by="" contrast,="" the="" negative="" control="" had="" no="" effect="" on="" the="" changes="" in="" the="" expression="" levels="" of="" pten,="" p‑akt="" and="" p‑mtor="">vese tissues (all P>0.05). There was no signifi‑ cant difference in the above indicators among the Ad‑miR‑214 group, the PTEN inhibitor group and the Ad‑miR‑214 + PTEN inhibitor group (all P>0.05). Ezek az eredmények arra utalnak, hogy a CLP indukáljaveseszöveti autofágiát az AKT/mTOR útvonal gátlásával. Az Ad-miR-214 aktiválta az AKT/mTOR útvonalat a PTEN bemenet elnémításávalveseszövetek. A CLP-csoporttal összehasonlítva azonban az anti-miR-214 nem gátolta szignifikánsan az mTOR expresszióját. Ezért az RT-qPCR-t tovább használták a PTEN/AKT/mTOR jelátviteli útvonalhoz kapcsolódó gének mRNS expressziójának meghatározására. Az RT-qPCR eredményei szerint (8. ábra) a Sham csoporthoz képest a p62, LC3 és PTEN mRNS expressziós szintje jelentősen megnőtt, míg az AKT és mTOR mRNS expressziója csökkent a CLP csoportban. A CLP-csoporthoz képest az Ad-miR-214, PTEN
inhibitor és Ad-miR-214 plusz PTEN inhibitor csoportok csökkent mRNS-expressziót mutattak az LC3 és PTEN, de növelték a p62, AKT és mTOR mRNS expresszióját (mind P<0.05); in="" the="" anti‑mir‑214="" group,="" an="" opposite="" changing="" tendency="" was="" observed="" (all=""><0.05). there="" was="" no="" significant="" difference="" in="" the="" above="" indicators="" among="" the="" ad‑mir‑214="" group,="" the="" pten="" inhibitor="" group="" and="" the="" ad‑mir‑214="" +="" pten="" inhibitor="" group="" (all="" p="">0.05). Így a p62 hatása az autofágiára inkább transzkripciós szinten jelentkezhet, mint poszttranszkripciós szinten. A jelenlegi eredmények azt mutatták, hogy a miR-214 csökkentette a PTEN expresszióját, és aktiválta az AKT/mTOR jelátviteli útvonalat.
Vita
A jelen tanulmány megállapította, hogy a túlzott autofágia káros voltveseműködésszeptikus egerekben. Korábbi tanulmányok kimutatták, hogy a miR-214 fokozott proliferációval, metasztázisokkal, invázióval jár, és a sejtek és szövetek onkogénjeként működik (19-22). Tanulmányok szerint a miR-214 protektív szerepet tölt be az AKI ellen az apoptózis, az oxidatív stressz és a gyulladásos faktorok leszabályozása révén (21, 23). A jelen tanulmány tovább vizsgálta a miR-214 szepszis által kiváltott AKI-re gyakorolt védőhatásának hátterében álló mechanizmusokat, összpontosítva a miR-214 lehetséges szerepére az autofágia modulációjában. Az eredmények azt mutatták, hogy az oxidatív stressz aveseCLP műtét beadását követően. Eközben az autofágia aktiválódása megtörténik avese.Emelkedett LC3 II/I és a p62 csökkenése aveseCLP-műtéttel végzett kezelést követően figyelték meg. Ahogy az várható volt, a miR-214 túlzott expressziója jelentősen gyengültvesekóros sérülések ésveseszepszis okozta diszfunkció. A miR-214 gátlása azonban ellentétes tendenciát mutatott a renoprotekció felé. Ezenkívül az Ad-miR-214 védőhatását a PTEN inhibitor fokozta.
Szeptikusbanvese, a túlzott gyulladást a ROS termelés jelentős növekedése kíséri, és nagyszámú ROS változást vált ki a mitokondriális szerkezetben és rontja a mitokondriális funkciókat, ami miatt a szervezet ördögi körbe kerül, ami súlyosbítja avesekár (24,25). Ezért az oxidatív stressz lehet a szepszis által kiváltott AKI egyik fő kóros mechanizmusa. A jelen tanulmány további bizonyítékokkal szolgált a túlzott oxidatív stressz bizonyítására, amelyet a fokozott MDA-termelés és a csökkent SOD-aktivitás jelez.veseszövetek CLP műtét után. Ezenkívül azt találták, hogy a miR-214 túlzott expressziója megvédheti avesea CLP által kiváltott oxidatív károsodás ellen, amely részt vesz az autofágiás gátlásban. Ez összhangban van azokkal a korábbi tanulmányokkal, amelyek szerint a miR-214 megvédi a különböző sejteket és szöveteket az oxidatív stressz ellen (26, 27).
Az autofágia „kétélű kardként” szolgál a szepszis kialakulásában: A bazális autofágia védő hatást fejthet ki a toxikus oxidatív fehérjék eltávolításával, de a túlzott autofágia autofágiás sejthalálhoz vezethet súlyos stressz esetén, például ROS kitörés esetén (28, 29). . Kimutatták, hogy az autofágia kezdetben szepszisben aktiválódik, majd ezt követi az autofágiás sejthalál miatti diszfunkció (30), ami súlyosbítja a szepszis által kiváltott oxidatív sérülést. A jelen vizsgálatban a PTEN-gátló vagy a miR-214 túlzott expressziója antioxidatív renoprotektív hatást mutatott CLP-vel kezelt egerekben. A miR-214 gátlása azonban ellentétes tendenciát mutatott az antioxidatív renoprotekcióval szemben. Tehát a túlzott vagy nem megfelelő autofágia okozhatvesekárosodás; mindkettő rosszul alkalmazkodik, és végül sejthalált vált ki. Ezért az autofágia mérsékelt szintjének megőrzése a kulcsa az oxidatív sérülések mérséklésének szeptikus állapotban.
A CISTANCHE JAVÍTJA A VESE-/VESEFÁJDALÁST
A felhalmozódó bizonyítékok azt mutatják, hogy a miR-214 gátolja az autofágiát különböző sejtekben és szövetekben (31-33). Jelen tanulmányban a miR-214 túlzott expressziója gátolja a CLP-indukált autofágiátvese szövetei,amint azt a fehérjemarkerek, például az LC3-II/I és a p62 változásai jelzik. Ezenkívül az eredmények azt mutatták, hogy a miR-214 túlzott expressziója a túlzott autofágia gátlásával gyengítette a CLP által kiváltott oxidatív károsodást. A jelen tanulmány azokat a molekuláris mechanizmusokat is vizsgálta, amelyek révén a miR-214 modulálveseautofágia szepszis által kiváltott AKI-ban. A PTEN/AKT/mTOR fontos jelátviteli útvonal, amely szabályozzaveseautofágia (34, 35), amely kulcsszerepet játszik a szepszis által kiváltott AKI-ban, a PTEN pedig a PI3K/AKT/mTOR jelátviteli útvonal negatív inhibitora. Korábbi tanulmányok arról számoltak be, hogy a miR-214 képes szabályozni az autofágiát a PI3K/AKT/mTOR jelátviteli útvonalon keresztül különböző modellekben (36-38). Ma és munkatársai (39) azt találták, hogy a miR-214 csökkentheti az autofágiát a cukorbeteg vesékben. Ezért azt feltételezték, hogy a miR-214 hatása a CLP-indukált AKI-re szerepet játszhat a PTEN/AKT/mTOR útvonal szabályozásában. A jelen tanulmány eredményei azt mutatták, hogy a CLP műtét szignifikánsan megemelte a PTEN szintjét, de csökkentette a p-AKT és p-mTOR szintjét, ami azt jelzi, hogy a CLP műtét inaktiválta az AKT/mTOR útvonalat. Ezenkívül a miR-214 túlzott expressziója aktiválta az AKT/mTOR útvonalat a PTEN elnémításával a CLP-indukált autofágiábanveseszövetek. Az anti-miR-214 azonban nem gátolta szignifikánsan az mTOR expresszióját a Western blot elemzésekben. Így az RT-qPCR-t tovább használták a PTEN/AKT/mTOR jelátviteli útvonalhoz kapcsolódó gének mRNS expressziójának meghatározására. A jelen tanulmány kimutatta, hogy a miR-214 csökkentette a PTEN expresszióját, és aktiválta az AKT/mTOR jelátviteli útvonalat az autofágia gátlására. Mindazonáltal további kimerítő vizsgálatokat kell végezni a mechanizmussal kapcsolatos további részletek megszerzéséhezveseautofágia szeptikus állapotban.
Összefoglalva, a jelen tanulmány eredményei azt sugallják, hogy a miR-214 védő szerepet játszott a szepszis által kiváltott ellen.vese sérülésaz oxidatív stressz csökkentésével és az autofágia gátlásával a PTEN/AKT/mTOR útvonal szabályozásán keresztül. A jelenlegi eredmények arra utalnak, hogy a miR-214 potenciális terápiás célpont lehet a szepszis által kiváltott AKI számára. A jelen vizsgálatban azonban 6-8 hetes egereket használtak, így a miR-214 mechanizmusának további kutatására van szükség felnőtt egereken.
