A Fucales florotannin-összetevőinek áttekintése 3. rész

A cisztanche glikozidja növelheti az SOD aktivitását a szív- és májszövetekben, és jelentősen csökkentheti az egyes szövetek lipofuscin- és MDA-tartalmát, hatékonyan megkötve a különböző reaktív oxigéngyököket (OH-, H2O₂ stb.) és megvédheti az okozott DNS-károsodást. OH-gyökök által. A Cistanche feniletanoid glikozidok erős szabad gyökfogó képességgel rendelkeznek, nagyobb redukáló képességgel rendelkeznek, mint a C-vitamin, javítják a SOD aktivitását a spermiumszuszpenzióban, csökkentik az MDA-tartalmat, és bizonyos védő hatást fejtenek ki a spermium membrán működésére. A cistanche poliszacharidok fokozhatják a SOD és a GSH-Px aktivitását a D-galaktóz által okozott kísérletileg öregedő egerek eritrocitáiban és tüdőszöveteiben, valamint csökkenthetik a tüdő és a plazma MDA- és kollagéntartalmát, valamint növelhetik az elasztintartalmat. jó eltávolító hatás a DPPH-ra, meghosszabbítja a hipoxia idejét öregedő egerekben, javítja a SOD aktivitását a szérumban, és késlelteti a tüdő fiziológiás degenerációját kísérletileg öregedő egerekben A sejtmorfológiai degenerációval a kísérletek kimutatták, hogy a Cistanche jó antioxidáns képességgel rendelkezik és potenciálisan gyógyszer lehet a bőröregedési betegségek megelőzésére és kezelésére. Ugyanakkor a Cistanche-ban található echinakozid jelentős mértékben képes megkötni a DPPH szabad gyököket, és képes megkötni a reaktív oxigénfajtákat és megakadályozza a szabad gyökök által kiváltott kollagén lebomlását, valamint jó helyreállító hatással van a timin szabad gyökök anionjainak károsodására.

Kattintson a Hol vásárolhatok Cistanche-ra

【További információ:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

Ami az Eckolokat illeti, a dibenzodioxin szerkezetek jelenléte miatt ezek megkülönböztethetők a többi csoporttól deprotonált molekulaionjaik alapján, amelyek általában 2 Da-val alacsonyabbak, mint a többi azonos DP-vel rendelkező PT a szerkezetben jelen lévő minden egyes dibenzodioxin motívumra (ábra). 5D). Például az eckol m/z-nél [MH]− 371-nél, míg a trifokális, a trifluoretol és a fukofloretol mind [MH]− m/z 373-nál. [MH]−-t mutatnak m/z 741-nél, míg hexamer ekvivalenseik [MH]−-t m/z-nél 745-nél. Ugyanez vonatkozik a karmalolokra, amelyek lényegében dibenzodioxin szerkezeteket tartalmazó csarnokok [120]. Végül néhány furángyűrűt tartalmazó PT, mint például a fukofuroeckol és a fluorofucofuroeckol, dehidratált-deprotonált molekulaionnal, azaz 18 Da-val alacsonyabb [MH]−-val jellemezhető, összehasonlítva a furánt nem tartalmazó ekvivalenseivel azonos DP-vel. (pl. a fucofuroeckol vs. phloroeckol szerkezetek csak a furángyűrű jelenlétében/hiányában térnek el, és [MH]−-t mutatnak m/z 496, illetve 478 mellett) [120]. A 3. táblázat különböző tanulmányokból gyűjtött MS-adatokat mutat be, amelyek a PT-k azonosítására összpontosítottak Fucalesben.

Noha ezek az alapok hasznosak lehetnek a kis molekulatömegű PT-k ésszerű szerkezeti azonosításában, komoly nehézségek merülnek fel a nagy molekulatömegű oligomerek és polimerek esetében, mivel izomerizációjuk exponenciálisan növekszik, és a floroglucinol elrendezések és kombinációk sokféle lehetősége aligha használható. MS vagy MS/MS tisztázza. Ennek ellenére ilyen esetekben az MS még mindig értékes információkat szolgáltathat a fluorotannin keverékben jelenlévő vegyületek DP-jéről. Ebből a szempontból a mátrix-asszisztált lézeres deszorpció/ionizációs repülési idő MS (MALDI-TOF-MS) alkalmasabb megközelítést jelent nagyobb oligomerek elemzésére, mivel képes kimutatni azokat a molekulákat, amelyek m/z az ESI- felső határa felett vannak. KISASSZONY. Ezt a technikát a Sargassum wightii phlorotannin frakciójának tanulmányozására használták, lehetővé téve a phloroglucinol dimereinek, trimereinek és hexamereinek jelenlétének megerősítését [125]. A nagyfelbontású MS (HRMS) egy alternatív megközelítés, amely nagy molekulatömegű PT-k elemzésére is használható, a többszörösen töltött ionokra támaszkodva, valamint a plusz 1 13C izotópmintázat változásaira támaszkodva. Más szavakkal, ha egy vegyület kettős vagy háromszoros töltésű, akkor plusz 1 13C izotópmintázatot mutat, 0,5 és 0,33 m/z különbséggel. . Ezen az elven Steevensz et al. [78] képesek voltak profilozni a P. canaliculata, F. spiralis, F. vesiculosus és A. nodosum PT összetételét a DP tekintetében, kimutatva azokat a 6000 Da molekulatömegig terjedő vegyületeket, amelyek egyébként meghaladnák a tömegtartományt. az ESI-MS.

Összességében, bár a tömegspektrometria leleményes technika lehet a PT-k kvalitatív analízisében, sőt elég erős ahhoz, hogy kis molekulatömegű vegyületeket ésszerűen jól jellemezzen, nem tud elegendő részletet lekérni a vegyületek izomer formáinak típusáról és kapcsolódási helyzetéről. magasabb DPS-sel. Ezért amikor a cél a PT-k szerkezeti jellemzőinek teljes tisztázása, az NMR az egyetlen hatékony módszer, amely elegendő felbontást tud nyújtani egy ilyen mélyreható elemzéshez.

5.2.3. NMR

Az NMR-spektroszkópia egy közvetlen és roncsolásmentes analízist tartalmaz, amely nemcsak a PT-k tartalmának elérésére, hanem a PT-k szerkezeti jellemzőinek teljes körű feltárására is hasznos lehet. Ha kvantitatív adatokra van szükség, az algakivonatokban található összes fenolos vegyület 1H NMR rezonancia jeleit integrálják és összehasonlítják egy megfelelő belső standard jeleivel; ezeknek a vegyületeknek stabilnak, kémiailag közömbösnek, nagy tisztaságú formában elérhetőnek kell lenniük, és teljesen oldódniuk kell ugyanabban a deuterált oldószerben, mint a minta. Összességében a szerzők különböző megközelítéseket és módszereket alkalmaztak a fenolos vegyületek és/vagy PT-k mennyiségi meghatározására ezzel a technikával, beleértve a Fucale-eredetű mintákat is.

A 2009-ben Parys et al. első ízben írta le a kvantitatív 1H NMR (NMR) alkalmazását az A. nodosum phlorotannin tartalmának év közbeni változékonyságának meghatározására. Munkájuk során belső standardként trimezinsavat használtak (2.0 mg trimezsav 0,8 ml deuterált metanolban és 0,2 ml deutérium-oxidban), és phloroglucinol felhasználásával kalibrációs görbét készítettek. Annak ellenére, hogy a qHNMR-rel magasabb PT-tartalmat mutattak ki, mint az FC kolorimetriás módszerrel, mindkét módszer ugyanazt a szezonális változási trendet követte [126]. Fontos megjegyezni, hogy a kolorimetriás assay-vel ellentétben, amely nem specifikus a PT-kre vagy még csak a fenolos vegyületekre sem, az 1H NMR spektrumok rezonanciajeleinek integrációját a qHNMR-ben összehasonlítják a belső standardéval. Ezen alapvető különbségek miatt nem lehet pontosan összehasonlítani a két módszertant [127,128].

Külön megközelítést alkalmazva Stiger-Pouvreau és munkatársai nagy felbontású mágikus szögpörgetést (HR-MAS) használtak a PT-k számszerűsítésére a barna algában, a Cystoseira tamariscifoliában. Ebben a vizsgálatban szilárdtest NMR-t használtunk a phloroglucinol (monomer) in vivo kimutatására, és 1H qNMR-t alkalmaztunk a monomer mennyiségi meghatározására (belső standardként trimetil-szilil-propionát –d4 (TSP) felhasználásával). A δ 6,02 ppm-nél lévő phloroglucinol szingulett három protonba integrálva megerősítette jelenlétét a mintában. Ennek a módszernek a pontosságát phloroglucinol standard oldatával értékeltük, és az eredményeket az FC vizsgálat eredményeivel való összehasonlítással validáltuk. Végül a szerzők azt állították, hogy a bemutatott módszertan egy innovatív és gyors módszerből áll a phloroglucinol mennyiségi meghatározására, amely minden algafajra alkalmazható. A qNMR módszer egyetlen korlátja abban rejlik, hogy legalább egy spektrumjelet (szingulett, dublett stb.) egyértelműen egy és csak egy vegyülethez kell rendelni [129].

Ugyanezek a szerzők 2010 elején már kimutatták a tömegspektrometriával (LC/ESI–MSn) kapcsolatos in vivo 1H HR-MAS NMR-ben rejlő potenciált a nemzetség öt, a partok mentén jelenlévő faja, a Cystoseira globális kémiai profiljának megfigyelésére. Bretagne-ból Franciaországban: C. baccata, C. foeniculacea, C. humilis, C. nodi caulis és C. tamariscifolia [130]. A

munkájuk fő célja a Cystoseira példányok azonosítása és taxonómiájuk megbeszélése volt. Az eredmények igazolták a bemutatott megközelítés hatékonyságát elsősorban a C. nodicaulis és a C. tamariscifolia megkülönböztetésére, mivel spektrumaik jellegzetes jelek jelenlétét igazolták, lehetővé téve azok egyértelmű azonosítását. A 2,91 ppm-es szingulett esetében az elsőnél, az utóbbinál pedig egy pontosan 6.00 ppm-es csúcs jellemezte a fajt, és egy egyszerű phlorotannin lehetséges előfordulását jelezte. A Foeniculaceát és a C. humilist általában két azonos intenzitású dublett megjelenése jellemezte 7,90 és 7,36 ppm-nél. A két jel közötti abszolút megkülönböztetés azonban lehetetlen maradt. Az in vivo NMR jelek hasonlósága, valamint mindkét faj csekély fajlagos kémiai diverzitása igazolta ezeket az eredményeket. Végül a C. baccata esetében, annak ellenére, hogy a legfontosabb kémiai diverzitást mutatta, számos jel lehetővé tette a folyamatos megkülönböztetést a többi fajtól.

2020-ban Walsh és munkatársai [131] kimutatták az A. nodosumból és a F. serratusból származó két tisztított phlorotannin kivonat antimikrobiális potenciálját, két dagályközeli barna moszat. Ebben a munkában az 1H- és 13C-NMR-analízis nemcsak az összes fenolos vegyület mennyiségi és minőségi becslését tette lehetővé, hanem a két faj tisztított-fenolos kivonatai közötti kapcsolódási profilbeli különbségek elérését is. Ami az FC assay-t illeti, az A. nodosumban szignifikánsan magasabb össz-fenolos vegyületeket találtunk, mint az F. serratusban, és az eredményeket az FC assay validálta. Ezenkívül a qNMR és az FC vizsgálattal elért eredmények azt mutatták, hogy eltérések vannak az egyes hónapokban gyűjtött minták és a két módszer között.

A PT-k szerkezetének tisztázására először Glombitza és csoportja alkalmazta az 1H és 13C NMR analízist a '70-es években, amikor különböző barna algafajokban phloroglucinolt azonosítottak. Az ezekhez a származékokhoz kapcsolódó spektrumok összetettsége csak kisebb polifenol szerkezetek azonosítását tette lehetővé. Így 1974-ben ez volt az első alkalom, hogy a C. tamariscifolia 80 százalékos etanolos kivonatából derítették ki a bifuhalol és a diphlorethol kémiai szerkezetét [132].

Ennek ellenére azóta több mint száz PTs szerkezetet sikerült tisztázni NMR segítségével [133]. Ehhez a kivonatokat általában hexánnal vagy petroléterrel végzett előkezelési lépésnek vetik alá a nagy PT-k kicsapása érdekében. Ezen túlmenően a PT-k instabilitásának megelőzése, az NMR-analízis megkönnyítése és ezen vegyületek polaritásának megváltoztatása érdekében gyakran acetilezik őket ecetsavanhidriddel és piridinnel, ezáltal lehetővé téve a normál fázisú szilícium-dioxid kromatográfiás tisztítását [119]. Az ilyen típusú vegyületek 1H NMR spektrumában két szempontot kell megjegyezni: az aromás protonok rezonanciája δ 6.0 és 7,5 ppm között, az acetilcsoportok pedig szingulett csúcsokként jelennek meg δ 2 és 3 ppm között. . Ez egy hasznos eszköz a szabad hidroxicsoportok számának meghatározására az eredeti, nem védett fenolokban. Az esetlegesen előforduló aromás gyűrűrendszerek két típusát a 6. ábra mutatja be. A két protontípus (Ha és Hb) jellegzetes kémiai környezete megváltoztatja az 1H NMR-ben megfigyelt jelek sokaságát, valamint integrációjukat.

Az 1H NMR spektroszkópiával együtt a 13C és HSQC, valamint a HMBC NMR spektrumokat használták a tisztított PT-k szerkezetének tisztázására, beleértve a Fucales-t is. A heteronukleáris korrelációs-NMR-spektroszkópiai megközelítés hasznos a PT-k osztályának azonosítására egy mintamátrixból (monomer, üzemanyag, klór-etil, full, fukofluor-etil stb.) [134]. A PT-k jellegzetes 13C-NMR jeleit a 4. táblázat foglalja össze. A karakterisztikus-kémiai eltolódásoknál megjelenő szén-rezonanciák, valamint azok intenzitása lehetővé teszik bizonyos jelek hozzárendelését a PT-k meghatározott osztályaihoz, különösen a fluoretolokhoz. .

1997-ben Glombitza et al. [135] 33 PT izolálását és jellemzését írták le a barna algából, a Cystophora torulosából. Különböző PT-osztályokat azonosítottunk, beleértve a fluoretolokat és a hallokat, valamint a fukofluoretolt és a hidroxi-fukofluoretolt (példák a 7. ábrán). Ezen túlmenően az utóbbi vonatkozásában hét új hidroxi-fukofluoretolt azonosítottak és jellemeztek (NMR és MS), amelyek további hidroxilcsoportokat tartalmaznak. Amint azt korábban említettük, az oxidáció megelőzése és az izolált PT-származékok lipofilitása növelése érdekében a szerzők acetátként írták le izolálásukat [82].

Koch és mtsai. bemutatták az 1H és 13C NMR alkalmazását a nagyobb fuhalol-acetátok jellemzésére B. bifurcate-ben [136]. A HSQC és HMBC (2D) NMR spektroszkópiai technikákat Cérantola és munkatársai alkalmazták. a fucol és fucophlorethol szerkezetek jelenlétének kimutatására a Fucus spiralis kivonataiban [137]. Ugyanezt a megközelítést alkalmazták a Bretagne-ban bővelkedő Halidrys siliquosa esetében is. Az 1D és 2D NMR, valamint az MS analízis négy fenolszármazék azonosítását tette lehetővé: trifuhalolok és tetrafuhalolok, valamint első ízben a difluoretolok és trifluoretholok [125]. Az 5. táblázat összefoglalja azokat a fent említett vizsgálatokat, amelyekben az 1H és 13C NMR hozzájárult a Fucaleshez tartozó algákból kivont PT-k szerkezetének tisztázásához.

【További információ:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】