2. rész: Az UMOD és a MUC1 mutációi miatt kialakuló autoszomális domináns tubulointersticiális vesebetegség klinikai és genetikai spektruma
Mar 15, 2022
Kapcsolatfelvétel: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com
Az UMOD-pontszám és a vizelet UMOD-szintjei az ADTKD-ben végzett genetikai tesztelés irányításához
A pontszámot az Egyesült Államok ADTKD-regiszteréből származó UMOD-pozitív (n ¼ 124) és UMOD-negatív (n ¼ 183) betegeken validálták, ami hasonlóan magas érzékenységet és alacsony specifitást eredményezett az UMOD mutációkra, 5 dolláros határértékkel (érzékenység). : 97,6 százalék , specifitás: 16,4 százalék , NPV: 91.{11}} százalék , PPV: 44,2 százalék , az adatok nem láthatók), összességében nagyon valószínűtlenné teszi az ADTKD-UMOD eredményét a pontszámok szempontjából<5. we="" tested="" how="" the="" clinical="" score="" separated="" the="" 2="" most="" common="" etiologies="" of="" adtkd="" in="" a="" subset="" of="" patients="" with="" adtkd-umod="" (n="" ¼="" 125)="" and="" adtkd-muc1="" (n="" ¼="" 80)="" from="" the="" us="" registry="" for="" which="" at="" least="" 5="" of="" the="" 8="" clinical="" items="" and/or="" urinary="" umod="" levels="" were="" available.="" the="" clinical="" umod-score="" alone="" separated="" the="" 2="" entities="" with="" an="" auc="" of="" 0.69="" (95%="" ci:="" 0.62–0.77,="" p="" ¼="" 0.037)="" (figure="" 7a,="" left="" panel).="" however,="" the="" specificity="" for="" umod="" increased="" considerably="" with="" higher="" umod-score="" values="" (for="" instance,="" a="" score="" of="" $8="" had="" a="" sensitivity="" of="" 48.8%,="" a="" specificity="" of="" 83.7%,="" and="" npv="" of="" 50.8%="" and="" a="" ppv="" of="" 81.3%="" for="" umod="" mutation)="" (supplementary="" table="" s5).="" only="" a="" few="" patients,="" mostly="" those="" with="" adtkd-muc1,="" had="" score="" results="" of=""><5 (figure="" 7a,="" right="">
Ezt követően azt vizsgáltuk, hogy a vizelet UMOD-szintjének a klinikai pontszámhoz való hozzáadása javította-e az ADTKD-UMOD és az ADTKD-MUC1 közötti különbségtételi képességét. A referenciapopuláció normalizált vizelet UMOD-értékei alapján [(mg/g kreatinin)/eGFR] (5a. ábra, jobb oldali panel), þ1, illetve þ3 pontot rendeltünk a vizelet UMOD-értékeihez a medián és a 25. percentilis között [( 0,14–0,23 mg/g kreatinin)/eGFR] és a 25. percentilis alatt van. Hasonlóképpen 1, illetve 3 pontot rendeltünk a vizelet UMOD-értékeihez a medián és a 75. percentilis [(0.23–0.35 mg/g kreatinin)/eGFR] között, valamint a 75. feletti értékekre. százalékos. 51 ADTKD-UMOD-ban szenvedő és 35 ADTKD-MUC1-ben szenvedő betegből álló kohorszra alkalmazva, akikről rendelkezésre álltak a vizelet UMOD-adatai, ez a kombinált klinikai és biokémiai pontszám az ADTKD-UMOD-t az ADTKD-MUC1-től választotta el, és az AUC 0 javult. .89.
A Cistanche segíthet a veseműködésben
5. ábra| UMOD feldolgozás autoszomális domináns tubulointersticiálisbanvesebetegség(ADTKD)–UMOD és ADTKD-MUC1. (a) A vizelet UMOD-kiválasztása a vizelet kreatininjére (creat) (bal oldali panel) és a vizelet kreatininre normalizálva, valamint a becsült glomeruláris filtrációs ráta (eGFR) (jobb panel) ADTKD-MUC1-ben és ADTKD-UMOD-ban szenvedő betegeknél, valamint egy referenciapopulációban (kontrollok) . A referenciapopuláció medián, 25. percentilis és 75. percentilis értékei láthatók (jobb oldali panel). A vizelet UMOD (uUMOD), eGFR és mintaméret számértékei (mediánok és interkvartilis tartományok) a diagram alatt láthatók. A kiugró értéket a GraphPad segítségével eltávolítottuk (ROUT Q ¼ 1 százalék), 1-módszeres varianciaanalízis P < 0.0001="" mindkét="" grafikonra,="" és="" a="" tukey-féle="" többszörös="" összehasonlító="" tesztet="" alkalmaztuk="" anélkül,="" hogy="" szignifikáns="" (="" ns)="" és="" ***p="">< 0,0001.="" (b)="" immunfluoreszcenciás="" festés="" umod="" (zöld)="" és="" glükóz-szabályozott="" fehérje="" 78="" (grp78;="" piros)="" esetén="" adtkd-muc1-ben,="" adtkd-umod-ban="" és="" normál="">vese(NHK) biopszia. Rudak ¼ 50 mm. DAPI, 40,6-diamidino-2-fenil-indol. A kép megtekintésének optimalizálásához tekintse meg a cikk online változatát a www.kidney-international.org címen. CI: 0,82–0,96, P < 0,001).="" az="" 5="" dolláros="" küszöbérték="" továbbra="" is="" az="" adtkd-umod="" és="" az="" adtkd-muc1="" (youden-index:="" 0,684)="" közötti="" optimális="" küszöbértékként="" jelenik="" meg="" 94,1="" százalékos="" érzékenységgel,="" 74,3="" százalékos="" specifitással="" és="" 89,7="" százalékos="" npv-vel.="" és="" 84,2="" százalékos="" ppv="" az="" umod-mutációra="" (7b.="" ábra;="" s5="" kiegészítő="" táblázat).="" a="" klinikai="" és="" biokémiai="" umod-pontszám="" alapján="" egy="" diagnosztikai="" algoritmust="" javasolunk="" az="" adtkd="" genetikai="" tesztelésének="" irányítására="" (8.="">
VITA
Ez a nemzetközi kohorsz vizsgálat az ADTKD-UMOD-ban és ADTKD-MUC1-ben szenvedő betegek eddig jelentett legnagyobb adatkészletét képviseli, új betekintést nyújtva az ADTKD fő altípusainak fenotípusába és a betegség progressziójába. Az autoszomális domináns öröklődés és a regionális családi klaszterezés miatt jelentős különbségek vannak az ADTKD alcsoportok prevalenciájában a nemzeti kohorszokban.2,15,20 A Nemzetközi ADTKD kohorszban az ADTKD-UMOD képviseli a legtöbbet.
az ADTKD gyakori altípusa, becsült prevalenciája 37,1 százalék, ezt követi az ADTKD-MUC1 az UMOD-negatív családok 35,1 százalékában, és a becsült általános prevalencia 21.0 százalék. Megjegyzendő, hogy a HNF1B, REN, DNAJB11 és SEC61A1 mutációinak szűrésére irányuló szisztematikus erőfeszítés folyik a 133 UMOD-negatív és MUC{15}}negatív családban, valamint a MUC1 mutációira a 141 UMOD-családban. -negatív a rendszerleíró adatbázisban.
A nagy mintanagyság alapján az ADTKD-UMOD és az ADTKD-MUC1 klinikai megjelenésében eltérő jellegzetességeket figyeltünk meg, amelyek a klinikai gyakorlat és a betegtanácsadás szempontjából relevánsak.Vesebetegségsúlyosabbnak tűnik ADTKD-MUC1-ben szenvedő betegeknél, magasabb ESKD prevalenciával (58 százalék vs. 44 százalék ADTKD-UMOD esetén, P ¼ 0.{{10}}4), az ESKD korábbi megjelenése (36 év vs. 46 év ADTKD-UMOD esetén, P < 0,001),="" és="" rövidebb="" medián="" vese-túlélés="" (46="" év="" vs.="" 54="" év="" adtkd-umod="" esetén,="" p="" ¼="" 0,013).="" korábbi="" tanulmányok="" eskd-nél="" idősebb="" korról="" (átlag:="" 44,9="" év)="" számoltak="" be="" adtkd-muc1,8-ban="" szenvedő="" betegeknél,="" ami="" a="" felvétellel="">
6. ábra| Klinikai UMOD-pontszám és teljesítmény a Belgo-Swiss ADTKD nyilvántartásban. (a) Klinikai UMOD-pontszám klinikai, biokémiai, szövettani és képalkotó adatok alapján. Az egyes jellemzők hozzárendelt pontjai a jobb oldalon láthatók. rutinmunka után, beleértve a vizelet üledék és vizeletvizsgálatot ésveseimaging. interstitial fibrosis, tubular atrophy, thickening and lamellation of tubular basement membranes, tubular dilatation (microcysts), negative immunofluorescence for the compliment, and Igs. proteinuria >300 mg/dl, persistent hematuria (both eumorphic and dysmorphic) in repeated urinalysis. hemoglobin A1c >10 százalékos vagy ismételt vérnyomásmérés > 160/100 Hgmm és/vagy hipertóniás cardiopathia és/vagy nephropathia megfelelő klinikai lelete. Bármely helyen legalább 1 cisztát diagnosztizálnak ultrahanggal, számítógépes tomográfiával vagy mágneses rezonancia képalkotással. Példa: 35-éves beteg, köszvény 32 éves korban kezdődik (þ1); szérum húgysav 550 mmol/l (þ3); becsült glomeruláris szűrési sebesség 55 ml/perc 1,73 m2-enként, híg vizelet analízis és üledék,veseciszták nélkül és normál méretű mágneses rezonancia képalkotáson, nincs cukorbetegség vagy magas vérnyomás (þ2krónikusvesebetegség ismeretlen eredetű [CKD]); és a CKD 3 generációra dokumentált családi anamnézisében (þ2) a teljes klinikai UMOD-pontszám 8 pont. (b) A belgo-svájci regiszter klinikai UMOD-pontszámának vevő-működési jellemzői görbéje (n ¼ 211 autoszomális domináns tubulointersticiális betegvesebetegség[ADTKD] elérhető adatokkal) a következők: görbe alatti terület (AUC): {{0}},72; 95 százalékos konfidencia intervallum (CI): 0,66–0,79; P < 0,001;="" az="" 5="" dolláros="" küszöbérték="" 98,1="" százalékos="" érzékenységgel="" és="" 41,4="" százalékos="" specifitással="" rendelkezik="" az="" umod="" mutációra;="" negatív="" prediktív="" érték:="" 94,3="" százalék="" ;="" pozitív="" prediktív="" érték:="" 59,1="" százalék="" .="" (c)="" a="" klinikai="" umod-pontszám="" hisztogramja="" umod-pozitív="" (n="" ¼="" 106)="" és="" umod-negatív="" (n="" ¼="" 105)="" betegeknél.="" a="" piros="" vízszintes="" vonal="" a="" kórtörténetben="" érintett="" betegek="" (a="" genetikailag="" diagnosztizált="" betegek="" klinikailag="" érintett="" hozzátartozói)="" 5.="" határértékét="" jelzi,="" míg="" csak="" a="" megállapított="" genetikai="" diagnózissal="" rendelkező="" egyéneket="" vettük="" figyelembe.="" az="" adtkd-muc1="" heterogenitása="" a="" ckd="" és/vagy="" a="" vesebetegség="" progressziója="" szempontjából="" érdekes,="" és="" jelentős="" módosító="" hatásokra="">
A köszvényt klasszikusan leírták UMOD-mutációval rendelkező betegeknél. Adataink valóban azt sugallják, hogy a köszvény feltűnően elterjedtebb és lényegesen korábban jelentkezik ADTKD-UMOD-ban, mint ADTKD-MUC1-ben. Az ADTKD-UMOD-ban szenvedő betegeknél polidipsiát és poliuriát eredményező hibás vizeletkoncentrációt írtak le, valószínűleg a TAL-alapú Naþ-Kþ-2Cl - kotranszporter károsodott aktivitása miatt.15,17 Plazmatérfogat-összehúzódás és kompenzálóan nagyobb reabszorpció A proximális tubulus aktivitása, beleértve a Naþ-kapcsolt urát transzporterek felszabályozását, nagy valószínűséggel megmagyarázza a hyperuricemia fenotípusát az ADTKD-UMOD-ban.25,26 Hasonló mechanizmust mutattak ki
idős Umod knockout egerek, amelyek a Naþ-Kþ-2Cl-kotranszporter csökkent aktivitását mutatták.26 Annak ellenére, hogy az ADTKD-MUC1 feltehetően a distalis tubulusból származik, a köszvény lényegesen kevésbé volt jelen ebben a rendellenességben.
7. ábra| Az autoszomális domináns tubulointersticiális UMOD-score összehasonlításavesebetegség (ADTKD)–UMOD versus ADTKD-MUC1 az Egyesült Államok ADTKD-nyilvántartásában. (a, bal oldali panel) A klinikai UMOD-score vevő-működési jellemzői görbéje az Egyesült Államok regiszterében (n ¼ 205 ADTKD-UMOD és ADTKD-MUC1 beteg rendelkezésre álló adatokkal) a következő: terület: a görbe alatt (AUC): 0,69; 95 százalékos konfidencia intervallum (CI): 0,62–0,77; P < 0.037.="" a="" 8="" dolláros="" küszöbérték="" érzékenysége="" 48,8="" százalék,="" specifitása="" 83,7="" százalék="" umod-mutációk="" esetén,="" míg="" az="" 5="" dolláros="" küszöbérték="" érzékenysége="" 97,6="" százalék,="" specifitása="" pedig="" 15,5="" százalékos="" umod-mutációk="" esetén.="" .="" (a,="" jobb="" oldali="" panel)="" a="" klinikai="" umod-pontszám="" eredményeinek="" hisztogramja="" adtkd-umod-ban="" (n="" ¼="" 125)="" és="" adtkd-muc1-ben="" (n="" ¼="" 80)="" szenvedő="" betegeknél.="" (b,="" bal="" oldali="" panel)="" a="" klinikai="" umod-score="" vevő-működési="" jellemzői="" görbéje,="" beleértve="" a="" vizelet="" umod-szintjét="" az="" egyesült="" államok="" regiszterében="" (n="" ¼="" 86="" adtkd-umod-ban="" és="" adtkd-muc1-ben="" szenvedő="" beteg="" a="" rendelkezésre="" álló="" vizelet="" umod-adatokkal)="" a="" következő:="" auc:="" 0.89;="" 95="" százalékos="" ci:="" 0,82–0,96;="" p="">< 0,001.="" az="" 5="" dolláros="" cut-off="" érték="" rendelkezik="" a="" legmagasabb="" youden-indexszel="" a="" diszkrimináció="" tekintetében="" (0,684),="" az="" umod-mutációra="" 94,1="" százalékos="" érzékenységgel="" és="" 74,3="" százalékos="" specificitással="" rendelkezik;="" negatív="" prediktív="" érték:="" 89,7="" százalék="" ;="" pozitív="" prediktív="" érték:="" 84,2="" százalék="" .="" (b,="" jobb="" oldali="" panel)="" a="" klinikai="" þ="" vizelet="" umod-pontszámának="" hisztogramja="" adtkd-umod-ban="" (n="" ¼="" 51)="" és="" adtkd-muc1-ben="" (n="" ¼="" 35)="" szenvedő="" betegeknél.="" a="" piros="" vízszintes="" vonal="" az="" 5-ös="" határértéket="" jelzi.="" q,="">
Két alapvető biológiai jellemzőt vizsgáltunk az ADTKD-UMOD-ban, amelyek valószínűleg patofiziológiai jelentőséggel bírnak: az UMOD-export mechanizmusok aberrációja és az ER-stressz indukciója. Azon megfigyelés alapján, hogy a MUC1 a distalisban expresszálódikvesetubulus, beleértve a TAL-t is, ahol az UMOD6-tal kolokalizálódik, és arra a megfigyelésre, hogy a MUC1fs más MUC1-expresszáló szövetekben (bőr, mell, tüdő, vastagbél) felhalmozódik anélkül, hogy extrarenális megnyilvánulásokat okozna7, feltételezhető, hogy a MUC1fs kölcsönhatásba léphet UMOD in TAL. Ennek ellenére, ellentétben az ADTKD-UMOD-dal, nem találtunk különbséget az UMOD vizeletszintjében az ADTKD-MUC1-ben szenvedő betegek és a normál populáció között. Továbbá a MUC1-mutáns elemzésevesebiopsziák kimutatták az UMOD normális eloszlását a TAL sejtekben, az ER stressz (GRP78 expresszió) bizonyítéka nélkül, ami az ADTKD-UMOD egyik jellemzője. Ezek az új eredmények azt sugallják, hogy az UMOD feldolgozása nem változik az ADTKD-MUC1-ben, és az ER stressz nem a fő felfedezés az ADTKD-MUC1-ben. Hasonlóképpen, egy nemrégiben végzett tanulmány a MUC1fs beszorulását találta a korai szekréciós útvonal vezikuláiban az ADTKD-MUC1.19 modellekben.
A korábbi jelentések az UMOD intracelluláris felhalmozódását írták leveseADTKD-UMOD-ban szenvedő betegek biopsziái.1,2 Az ilyen festés azonban sok betegnél nem áll rendelkezésre, ami megakadályozza, hogy spekuláljunk a klinikai döntéshozatalban betöltött értékéről. Tapasztalataink szerint a
8. ábra| A gyanúsított diagnosztikai algoritmusaautoszomális domináns tubulointersticiálisvesebetegség (ADTKD) alapján klinikai
UMOD-pontszám és vizelet UMOD-szintjei. progresszív elvesztésevese-funkció, enyhe vizelet üledék, normál vagy enyhe albuminuria és/vagy proteinuria, normál méretűveseultrahangon, és nem fogyasztanak tubulointerstitialis nephritishez kapcsolódó gyógyszereket. hitelesített adatok alapján értékelik. cAz egyéb ADTKD-géneket is magában foglaló diagnosztikai algoritmusokkal kapcsolatban lásd Devuyst et al.1 Az alternatív diagnózisok közé tartozik a nephronophthisis (autoszomális recesszív),autoszomális domináns policisztásvesebetegség (nagy cisztás vesék), autoszomális domináns glomerulopathiák (proteinuria és/vagy hematuria), a tubulointerstitialis egyéb okaivesebetegség(autoimmun, tubulointerstitialis nephritis és uveitis szindróma), beleértve a gyógyszereket és a toxinokat (nem szteroid gyulladáscsökkentők, arisztolochsav, kalcineurin inhibitorok, lítium). CKD,krónikusvesebetegség.
Az UMOD-festés operátorfüggő, szigorú pozitív és negatív kontrollokat igényel, és függhet a mögöttes UMOD-mutációtól is. Továbbá a rendelkezésre állásvesebiopszia korlátozott. A vizelet UMOD-szintjének felmérése a betegeknél a diagnózis idején és a betegség progressziója során noninvazív diagnosztikai eszközt és biomarkert kínálhat az ADTKD-UMOD-ban. Mivel a vizelet UMOD szintjei pozitív korrelációt mutatnak az eGFR-rel (az eGFR<90 ml/min="" per="" 1.73="" m2)="" and="" tubular="" mass,23,24="" they="" need="" to="" be="" normalized="" for="" residual="" egfr="" and="" interpreted="" against="" matched="" controls.="" based="" on="" data="" from="" a="" large="" control="" cohort,="" we="" show="" here="" that="" urinary="" umod="" (in="" mg/g="" creatinine="" to="" account="" for="" urine="" concentration)="" normalized="" for="" egfr="" can="" be="" applied="" in="" the="" clinical="" setting="" of="">
Egy közelmúltbeli, exome szekvenáláson alapuló tanulmány az UMOD mutációiról számolt be, amelyek az ebbe a kohorszba tartozó összes genetikai leletet szenvedő beteg 3 százalékát teszik ki.13 Az ADTKD altípusok diagnosztikai megközelítése előtt azonban jelentős akadályok állnak fenn. Ezek közé tartozik, de nem kizárólagosan (i) a MUC1 tesztelésének korlátozott elérhetősége technikai kihívások miatt, (ii)
validált diagnosztikai vagy genetikai algoritmus az ADTKD altípusok közötti felbecsülhetetlen klinikai különbségek miatt, és (iii) hiányzó betegség biomarkerek a kis és szétszórt betegségcsoportok miatt. A mindennapi gyakorlat és a költséghatékonyság érdekében az olyan gyakorlati eszközök, mint a pontozási rendszerek, nagyon hasznosak a genetikai tesztelés irányítására.1 A belga-svájci regiszter fontos szerepet játszott a klinikai UMOD-pontszám meghatározásában, mert feltárta a legfontosabb megkülönböztető klinikai jellemzőket, beleértve a pozitív családi anamnézist. CKD és/vagy köszvény, életkor megjelenése, prevalenciájavesebetegség és az ESKD-be való progresszió, valamint a köszvény története. Érdekesség,vese-a ciszták kevésbé gyakoriak az ADTKD-UMOD-ban szenvedő betegeknél, ami összhangban van a korábbi tanulmányokkal.8,15,20 A körvonalazott klinikai UMOD-pontszám kiváló NPV-t mutatott az UMOD-mutációkra (5 dollár határérték) Belgo-Swiss (NPV: 94,3 százalék) és US (NPV: 91.{17}} százalék) nyilvántartások. Mivel az ADTKD-UMOD és az ADTKD-MUC1 jelentős klinikai átfedést mutat, nem lepődtünk meg, hogy a klinikai UMOD-pontszám szerényen elkülönült e két entitás között (AUC: 0,69). Mégis, a magasabb UMOD-pontértékek szilárd specifitást mutattak az UMOD-mutációkra (pl. 8 dollár határérték: 83,7 százalékos specifitás és 81,3 százalék PPV egy UMOD-mutáció esetében). Vizelet hozzáadása
Az UMOD mérések, az ADTKD-UMOD patofiziológiai biomarkere, jelentősen megnövelték a pontszám megkülönböztető erejét (AUC: 0,89), 84,2 százalékos PPV-vel egy UMOD mutáció esetén (5 pont küszöbérték). Mivel a progresszióvesebetegség és úgy tűnik, hogy a köszvény prevalenciája és kialakulása a mögöttes genetikai diagnózistól függ, genetikai diagnózis javasolt, mivel az befolyásolhatja az ADTKD-s betegek kezelését (pl. nyomon követés,vese-transzplantáció és köszvénymegelőző stratégiák). Ezenkívül a célzott terápiák elérhetőek lehetnek legalább az ADTKD-MUC1 esetében.
Ennek a tanulmánynak a korlátai közé tartozik az egymás után toborzott betegek retrospektív „valós életű” kohorsz-tervezése, olyan eredendő nehézségekkel, mint a teljes klinikai információhoz való korlátozott hozzáférés, a további genetikai vizsgálatokhoz hiányzó DNS-minták, valamint a szigorú felvételi és kizárási kritériumok hiánya. Mi
magában foglalta egy adott család összes genetikailag megoldott esetét, ami potenciálisan magában hordozza a szelekciós torzítás kockázatát. Becsléseink szerint azonban ez elhanyagolható kockázatot jelent, mivel családonként általában csak 1-2 beteget vontak be, és jelentős intrafamiliáris klinikai variabilitás létezik az ADTKD-ben.8,20 MivelveseEzekben a betegségekben ritkán végeznek biopsziát, és nem specifikus leleteket adnak (pl. intersticiális fibrózis, tubularis atrófia), a hisztopatológiai információkat nem vettük figyelembe az elemzésben. A belgo-svájci regiszter kórszövettani eredményeinek felmérése kimutatta, hogy az ADTKD-UM OD-ban szenvedő betegeknél a tubularis atrófiával járó intersticiális fibrózis (a rendelkezésre álló patológiai jelentések 60 százalékában) és az interstitialis nephritis (a rendelkezésre álló patológiai jelentések 40 százalékában) voltak a domináns szövettani leletek. és akik UMOD- negatívak voltak. Az ADTKD-UMOD-ban és az ADTKD-MUC1-ben végzett biopsziák részletesebb szövettani leírása célzott elemzést tesz szükségessé.
Hangsúlyozni kell, hogy az UMOD-mutációk szisztematikus szűrését mind a 10 kódoló exonban csak az ADTKD-s betegek egy részében végezték el. A korábbi szűrések és a teljes exóm szekvenálása alapján úgy gondoljuk, hogy nagyon kevés UMOD-mutáció hiányozhatott a 3. és 4. exonon kívül az ADTKD-UMOD-ban.13,15 Ezenkívül az UMOD-ban a nagy deléciókat vagy inszerciókat nem lehet kimutatni közvetlen szekvenálással. mód. A génpanel-tesztelés és a következő generációs szekvenálási megközelítések rendelkezésre állásával valószínűleg csökkenni fog a klinikai pontszám hasznossága a célzott génteszt irányításában. A jelenlegi szakaszban azonban a MUC1 mutációi hiányoznak a következő generációs szekvenálásból, és a speciális tesztelés elérhetősége korlátozott. Legjobb tudomásunk szerint a MUC1 klinikai szintű genetikai vizsgálatát csak a Broad Institute végzi. Ezen okok miatt úgy becsüljük, hogy az egyszerű klinikai és biokémiai eszközök az előzetes vizsgálati valószínűségek becslésére hatással vannak a diagnosztikai feldolgozásra, és potenciálisan csökkenthetik az indokolatlan genotipizálással kapcsolatos költségeket.
Összefoglalva, ez a nagy nemzetközi retrospektív kohorsz vizsgálat részletes fenotípus-elemzést nyújt az ADTKD-UMOD-ban és ADTKD-MUC1-ben szenvedő betegekről. A 2 leggyakoribb ADTKD altípus klinikai jellemzői a hiperurikémia és a korai köszvény ADTKD-UMOD-ban, valamint egy heterogén, de általában súlyosabb.vesebetegségADTKD-MUC1-ben. A klinikai UMOD-score egy érzékeny, és a vizelet UMOD-szintjéhez kapcsolódva potenciálisan specifikus eszköz a betegek genetikai UMOD-vizsgálatra történő kiválasztásához. Ezek az eredmények segíthetnek a klinikusoknak abban, hogy javítsák a diagnosztikai arányokat, a klinikai kezelést és a betegek tanácsadását az ADTKD-ben.
MÓD
Nemzetközi ADTKD kohorsz
A Nemzetközi ADTKD-kohorsz a belga-svájci ADTKD-nyilvántartásból és az Egyesült Államok ADTKD-nyilvántartásából áll. A felvételi kritériumok azok voltak, amelyeket aVese Betegség: A globális eredmények konszenzusának javítása2 és a következőket tartalmazta bármilyen kombinációban: a CKD autoszomális domináns öröklődésével kompatibilis családi anamnézis az ADTKD jellemzőivel, beleértve a progresszívvesefunkció, enyhe vizelet üledék, hiány vagy enyhe albuminuria és/vagy proteinuria, normál méretű vagy kis méretű vesék ultrahangon; és/vagy (pozitív CKD családi anamnézis hiányában) korai kezdetű hyperuricemia és/vagy köszvény és/vagy intersticiális fibrózis és/vagy tubuláris atrófia jelenlétevesebiopsy. Exclusion criteria included the following: a different genetic diagnosis (non-ADTKD), the presence of enlarged cystic kidneys, proteinuria (>1 g/24 óra) és/vagy állandó hematuria, régóta fennálló vagy nem kontrollált diabetes mellitus vagy artériás magas vérnyomás, valamint tubulointerstitialis nephritishez kapcsolódó gyógyszerek fogyasztása. Csak az UMOD és/vagy MUC1 mutációira szűrt betegek kerültek a kohorszba. Az anonimizált demográfiai adatokat, valamint a klinikai és genetikai információkat egy adatbázisban rögzítették. Ezt a tanulmányt a Wake Forest School of Medicine intézményi felülvizsgálati bizottsága, az Université Catholique de Louvain (UCL) Orvosi Iskola és az Európai Közösség hetedik keretprogramja, a „Ritka esetek nagy áteresztőképességű kutatásának európai konzorciuma” hagyta jóvá.VeseBetegségek(EURenOmics).
Belgo-Swiss ADTKD nyilvántartás. A belgo-svájci ADTKD regiszter tartalmazza azokat a betegeket, akiket a klinikai partnerek többnyire Európából utaltak be az UCLouvain-ra és a Zürichi Egyetemre (UZH) (S1 kiegészítő melléklet). 2019-ben a regiszter 275 beteget tartalmazott, akiket 2003 óta vettek fel. A klinikai adatok között szerepelt a családi származás, a betegség kezdete és fejlődése.vesefunkciócsökkenés, a hiperurikémia és/vagy köszvény kialakulása (a köszvény kialakulásának korát a beteg életkoraként határozták meg a köszvényes ízületi gyulladás első epizódjában) és a húgysav részleges kiválasztódása, képalkotó és kórszövettani adatok (ahol rendelkezésre állnak), valamint a lehetséges információ extrarenális megnyilvánulásai (pl. hasnyálmirigy enzimek, májfunkciós tesztek). Az ESKD-t eGFR-ként határozták meg<10 ml/min="" or="" the="" initiation="" of="">vese-helyettesítő terápia (dialízis vagy veseátültetés).
US ADTKD nyilvántartás. Az Egyesült Államok ADTKD-nyilvántartása tartalmazza a tubulointersticiális családokatvesebetegség1999-ben hivatkozott a Wake Forest School of Medicine-re (S1 kiegészítő melléklet). Az összegyűjtött információk közé tartozott a demográfia, a származás, az ESKD kora, a laboratóriumi értékek és az ultrahang eredményei.
Genetikai vizsgálat
Minden betegtől tájékozott írásos beleegyezést kaptak. A genomiális DNS-t a perifériás vér leukocitáiból izoláltuk standard eljárásokkal, és a DNS-t 4 °C-on tároltuk.
Az UMOD-exonok közvetlen szekvenálását kezdetben Sanger szekvenálás segítségével végezték, amint azt korábban leírtuk.27 Újabban az UMOD gént masszívan párhuzamos szekvenálással elemezték az EURenOmics European Consortium tauopathies munkacsomagja által tervezett tubulopathia génpanel segítségével.28,29 Mutational az analízist a 3. és 4. exonban végezték el az összes bevont betegnél, és mind a 10 kódoló exonban a betegek egy részében.
A MUC1 genotipizálást a MUC1 VNTR szekvenálási módszerrel, spektrometrián alapuló szonda kiterjesztési vizsgálattal párosítva végeztük, a korábban leírtak szerint.7,30 A MUC1 vizsgálatot a Broad Institute of MIT és a Harvard 30 és a Charles University First Faculty of Medicine biztosította.7 A nukleotidok számozása a cDNS-számozást tükrözi þ1-gyel, amely megfelel az ATG transzlációs iniciációs kodon A-jának a referenciaszekvenciában (NM_003361.3). Alamut Visual szoftvert (Interactive Biosoftware, Rouen, Franciaország; www.interactivebiosoftware.com) használtunk a változatok patogenitásának meghatározásához. Az azonosított változatokat egymás után ellenőriztük a releváns adatbázisokkal, mint például a Clinvar (Nemzeti Biotechnológiai Információs Központ, Bethesda, MD; HTTPS://www.ncbi.nlm.nih.gov/clinvar/), Human Gene Mutation Database (Orvosi Genetikai Intézet) Cardiffban (Cardiff, Egyesült Királyság); http://www.hgmd.cf.ac.uk/ac/index.php), VarSome-ban (Saphetor, Lausanne, Svájc; https://varsome.com/) és helyi adatbázisok értékelje a korábbi publikációt.
A változatokat a korábbi jelentések, a családi szegregációs elemzés vagy előrejelző algoritmusok (Sorting Intolerant from Tolerant [SIFT], Align GVD, mutation taster és Polymorphism Phenotyping v2 [PolyPhen-2]) alapján betegséget okozónak tekintették a patogenitás szempontjából. .
A változatokat az American College of Medical Genetics 2015-ben közzétett irányelvei szerint osztályozták.31 Az érdeklődésre számot tartó változatokat Sanger-szekvenálás segítségével ellenőrizték.
Az UMOD vizeletszintjének mérése
Validált enzimhez kötött immunszorbens vizsgálati módszert alkalmaztak a vizelet UMOD-szintjének (második reggeli vizeletminta) mérésére 86 ADTKD-s betegeknél.21 A vizelet kreatinint Synchron DXC800 analizátorral (Beckman Coulter, Fullerton, CA) mérték. . A referenciamintákat (n ¼ 2717) a Cohort Lausannoise-tól szereztük be, egy populációalapú vizsgálatból, amely 6000, 35 és 75 év közötti embert vont be a svájci Lausanne városából.22 Az eGFR-t a Chronic segítségével számítottuk ki.VeseBetegségEpidemiológia Együttműködési egyenlet. Minden résztvevő személytől tájékozott beleegyezést kaptunk.
UMOD kifejezési konstrukciók
A humán vad típusú UMOD cDNS-ét pcDNS 3.1(þ)-be klónoztuk (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA), és a proteinszekvencia T26 és S27 közé a leader peptid után hemagglutinin címkét illesztettünk.32 A C150S és L284P mutáns Az izoformákat a QuikChange Lightning mutagenezis készlettel (Agilent, Santa Clara, CA) a gyártó utasításait követve mutagenezissel kaptuk. Az alapozókat a QuikChange Primer Design Program (Agilent) szoftverrel tervezték. A C150S mutációhoz használt primerek: előre (50 /30 ) gatggcactgtgagtcctccccgggctcctg, fordított (50 /30 ) caggagcccggggaggactcacagtgccac és L248P mutációhoz: előre (50 /30 ) előre (50 /30 )
Sejttenyésztési feltételek
A HEK293 sejteket Dulbecco módosított Eagle táptalajban növesztettük, 10% borjúmagzati szérummal, 200 U/ml penicillinnel, 200 mg/ml sztreptomicinnel és 2 mmol/l glutaminnal 37 C-on, 5% CO2 mellett.
A HEK293 sejteket Lipofectamine 2000 (Thermo Fisher Scientific) alkalmazásával transzfektáltuk a gyártó protokollja szerint, és a transzfekció után 24 órával elemeztük.
Western blot
A sejteket oktil-glükozid lízispufferben (50 mmol/l Tris-HCl, pH 7,4, 150 mmol/l NaCl, 60 mmol/l oktil-bD-glükopiranozid, 10 mmol/l NaF, 0,5 mmol/l nátrium) lizáltuk. ortovanadát, 1 mmol/l glicerofoszfát és proteáz inhibitor koktél [Sigma-Aldrich, St. Louis, MO]) 1 órán át 4 C-on, majd 10 perces centrifugálással 17,{17}}g-n. Az oldható frakciókat a Bio-Rad Protein Assay (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA) segítségével határoztuk meg. A Western blot kísérleteket Schaeffer és munkatársai leírása szerint végeztük.32 Az antitestek egérből tisztított anti-HA.11 epitóptag antitest (1:1 hígítás000; 901502; BioLegend, San Diego, CA) és egér monoklonális antitest voltak. -b-aktin (1:20 000 hígítás; A2228; Sigma-Aldrich).
Immunfluoreszcencia
Vesebiopsziák. Az UMOD és a GRP78 immundetektálását 5-mm vastagon végeztükveseADTKD-UMOD (nő, 41 éves, ESKD; férfi, 42 éves, ESKD) és ADTKD-MUC1 (nő, 60 éves, ESKD; férfi, 47 éves) betegek nefrektómiás mintáiból nyert metszetek régi, ESKD). A tárgylemezeket xilolban paraffinmentesítettük, és osztályozott etanolos sorozatban rehidratáltuk. Az antigén kinyerését 10 percig citrát pufferrel (pH 6,0) 98 °C-on végeztük. 20 perc blokkolóoldat után a lemezeket egy éjszakán át GRP78 primer antitesttel (1:300; ab21685; Abcam, Cambridge, Egyesült Királyság), majd inkubáció következett Alexa-Fluor{17}}konjugált kecske anti-nyúl antitesttel 45 percig (1:200; Invitrogen, Thermo Fisher Scientific). A tárgylemezeket birka anti-UMOD primer antitesttel (1:800; K90071C; Meridian Life Science Inc., Memphis, TN), majd AlexaFluor{26}} konjugált szamár antibirka ellenanyaggal (1:200; Invitrogen) vizsgáltuk. A fedőlemezeket Prolong gold antifade reagenssel 40, 6-diamidino-2- fenilindollal (Invitrogen) szerelték fel, és Zeiss LSM 510 Meta Confokális mikroszkóp alatt (Carl Zeiss, Jena, Németország) elemezték nagy numerikus rekesznyílású lencsékkel ( Plan-Neofluar 20/0,5). E minták használatát az Université Catholique de Louvain Ethical Review Board jóváhagyta.33
HEK293 sejtek. A fedőlemezen növesztett sejteket 4 százalékos paraformaldehidben fixáltuk 15 percig, 1 0 percig permeabilizáltuk 0,5 százalékos Tritonnal, és 30 percig blokkoltuk 10 százalékos szamárszérummal. A sejteket 1 órán át 30 percig szobahőmérsékleten egérből tisztított anti-HA.11 Epitope Tag antitesttel (1:500 hígítás; 901502; BioLegend) és nyúl poliklonális anti-kalretikulinnal (1:500 hígítás; C4606; Sigma) jelöltük. -Aldrich), majd 1 órán át inkubáltuk a megfelelő AlexaFluor konjugált másodlagos antitestekkel (1:500 hígítás; Thermo Fisher Scientific). A sejteket 40,6-diamidino-2-fenil-indollal festettük, és fluoreszcens rögzítőközeggel (Dako; Agilent) rögzítettük. Minden kép UltraVIEW ERS forgótárcsás konfokális mikroszkóppal (UltraVIEW ERS-Imaging Suite Software; Zeiss 63X/1.4; PerkinElmer Life and Analytical Sciences, Boston, MA) készült. Az összes képet a Photoshop CS (Adobe Systems, Mountain View, CA) alkalmazásba importáltuk, és beállítottuk a fényerőt és a kontrasztot.
Az ADTKD UMOD-pontszám generálása és érvényesítése
A súlyozott UMOD-pontszám ADTKD-kritériumokon, az ADTKD-UMOD specifikus klinikai jellemzőin (azaz a köszvény korai kialakulása és a hyperurikémia) és az ADTKD-vel negatívan összefüggő paramétereken alapult (vagyis alternatív magyarázatot ad a CKD-re: proteinuria és/vagy hematuria, cukorbetegség és/vagy nem kontrollált magas vérnyomás, vese ciszták és/vagy megnagyobbodásvese).2,15,20 A pontszám tételeinek súlyozására 1 és þ3 közötti egész értékeket használtunk. Az általános ADTKD-kritériumok esetében þ2-t, az UMOD-specifikus klinikai és laboratóriumi leleteket 2-1-et vagy þ3-at, és minden negatívan asszociált elemre 1-et adtak. A pontszámot először a Belgo-Swiss ADTKD-nyilvántartásban tesztelték, majd az Egyesült Államok ADTKD-nyilvántartásában érvényesítették. Az ADTKD-UMOD és az ADTKD-MUC1 közötti megkülönböztetés érdekében meghatároztuk a vizelet UMOD normál tartományát [(mg/g kreatinin)/eGFR] az általános populációból származó 2717 vizeletminta felhasználásával. Az ADTKD-UMOD patofiziológiája, a korábbi jelentések34, valamint az eredményeink (5a. ábra) alapján a vizelet UMOD-értékeihez rendre þ1, illetve þ3 pontot rendeltünk a medián és a 25. percentilis között, illetve a 25. percentilis alatt. normál vizelet UMOD szint. Hasonlóképpen 1, illetve 3 pontot rendeltünk a vizelet UMOD-értékeihez a normál vizelet UMOD-szintjének medián és 75. percentilis között, valamint 75. percentilis felett. A pontszám konceptualizálása a korábban publikált hepatocita nukleáris faktor 1b pontszám alapján történt.35
Statisztikai analízis
A kvantitatív paraméterek medián és IQR (25., 75. percentilis) (skálaváltozók esetén) vagy átlagos SD (folytonos változók esetén), a kvalitatív paraméterek pedig százalékos törtek formájában jelennek meg. A kategorikus változókat c2 teszttel hasonlítottuk össze. A folyamatos változókat Mann–Whitney U-próbával vagy páratlan t-próbával hasonlítottuk össze. A vizelet UMOD-szintjének összehasonlítására a Tukey-féle többszörös összehasonlító teszttel végzett varianciateszt elemzését használtuk. Az ESKD-mentes és köszvénymentes túlélés kimutatására Kaplan-Meier-görbéket állítottunk elő. Azokat a betegeket, akiknél nem érték el az ESKD-t, vagy akiknél nem alakult ki köszvény a vizsgálat végén (az érdeklődés eredménye nem jelentkezett a követési idő alatt), cenzúrázott személyeknek számítottak. A cenzúra idejének meghatározása az életkor volt az utolsó utánkövetéskor. A túlélési görbék összehasonlítására log-rank tesztet használtunk. Az UMOD-score teljesítményét a vevő működési jelleggörbe AUC-értékének kiszámításával értékeltük. A Youden indexet használtuk az UMOD-pontszám optimális diszkriminatív határértékének meghatározására. A statisztikai elemzést az SPSS Statistics (IBM Corp., Armonk, NY) segítségével végeztük. P < 0,05-öt="" tekintettük="" statisztikailag="" szignifikánsnak,="" 2-oldalas="" teszteket="">
KÖZZÉTÉTEL
Egyik szerző sem nyilatkozott egymással versengő érdekekről.
KÖSZÖNETNYILVÁNÍTÁS
Az EO-t a Fonds National de la Recherche Luxembourg (6903109-es támogatás), a Zürichi Egyetem "Integratív Humán Fiziológia, ZIHP" Egyetemi Kutatási Prioritási Programja, valamint a Svájci Nemzeti Tudományos Alapítvány korai posztdoktori mobilitási ösztöndíja (P2ZHP) támogatja {3}}). Az LR-t az Olasz Nephrológiai Társaság (SIN) az "Adotta un Progetto di Ricerca" program keretében, a Telethon-Italy (GGP14263 támogatás) és az Olasz Egészségügyi Minisztérium (RF-2010-2319394 támogatás) támogatja. A KK-t és az AJB-t az Országos Egészségügyi Intézet – Országos Diabétesz és Emésztőrendszeri Intézet, ill.VeseBetegségek(R21 DK106584 támogatás). Az M, KH és SK támogatását a Cseh Köztársaság Egészségügyi Minisztériuma (NV17-29786A támogatás), a Cseh Köztársaság Oktatási Minisztériuma (LTAUSA19068 támogatás) és a prágai Károly Egyetem (intézményi programok) támogatta. UNCE/MED/007 és PROGRES-Q26/LF1). Köszönetet mondanak a Nemzeti Orvosi Genomikai Központnak (LM2015091 támogatás) az UMOD és a MUC1 szekvenálásában nyújtott segítségért. Az OD-t az Európai Közösség hetedik keretprogramja (305608-as támogatás), a ritka vesebetegségek európai referenciahálózata (739532. projekt), a Svájci Nemzeti Tudományos Alapítvány Nemzeti Kompetencia Központja a Homeosztázis Veseszabályozás Kutatásában Programja és a Svájci Nemzeti Tudomány támogatja. Alapítvány (támogatás 310030-189044). Az OD-t és az OB-t a Gebert-Rüf Alapítvány támogatta az ADTKD-UMOD kutatására. A JAS-t a Kidney Research UK és a Northern County támogatjaVeseKutatási Alap. Az RT-t az Instituto de Salud Carlos III finanszírozza: Redes Temáticas de Investigación Cooperativa Red de Investigación Renal (RD16/0009 támogatás) és Fondo de Investigación Sanitarias Fondo Europeo de Desarollo Regional (PI15/01824, PI16203 támogatás). A JM-et a Fonds de la Recherche Scientifique–Communauté Française de Belgique támogatja. A DGF-et a Svájci Nemzeti Kutatási Kompetencia Központ, a TransCure, a Svájci Nemzeti Kompetencia Központ a Homeosztázis Vesekontroll Kutatásában Program, valamint a Svájci Nemzeti Tudományos Alapítvány támogatta (31003A_152829 és 33IC30_166785/). 1). A MUC1 genetikai tesztelését a Slim Initiative for Genomic Medicine in the Americas támogatja, amely a Broad Institute és a Carlos Slim Foundation együttműködése.
Köszönjük minden résztvevő betegnek és családjának. A Cohort Lausannoise elismerten referencia vizeletmintákat és eGFR-információkat biztosít. Hálásak vagyunk Maegan Hardennek és csapatának a Broad Genomics Platformon a MUC1 genetikai vizsgálatához nyújtott szakértői segítségért.
Ezen adatok egy részét poszterként mutatták be a 2017-es American Society of Nephrology rendezvényenVesehét (2017. október 31. – november 5., New Orleans, Louisiana).
KIEGÉSZÍTŐ ANYAG
Kiegészítő fájl (PDF)
S1 függelék. Beutaló orvosok.
S1 ábra. Az L284P uromodulin forgalmi hibát mutat.
S2 ábra. Az ESKD-től és a köszvénytől való megszabadulás ADTKD-UMOD-ban a noncisztein versus cisztein mutációk szerint.
S3 ábra. A vizelet uromodulin és a glomeruláris szűrés közötti kapcsolat az általános populációban.
S4 ábra. Uromodulin feldolgozás ADTKD-UMOD-ban és ADTKD-MUC1-ben.
S5 ábra. A Belgo-Swiss ADTKD nyilvántartás tervezése és folyamatábrája. S6 ábra. UMOD-pozitív és UMOD-negatív betegek klinikai jellemzői a Belgo-Swiss ADTKD regiszterben.
S1 táblázat. A 106 UMOD mutáció listája a belga-svájci és az amerikai ADTKD regiszterekben.
S2 táblázat. Az új UMOD-változatok allélgyakorisági és patogenitási pontszámai.
S3 táblázat. ADTKD betegek klinikai jellemzői az USA ADTKD regiszterében genetikai diagnózis szerint.
S4 táblázat. A belgo-svájci ADTKD regiszter klinikai UMOD-pontszámának vevő-működési jellemzői (ROC) görbéjének koordinátái (UMOD-pozitív és UMOD-negatív betegek) (n ¼ 211 beteg rendelkezésre álló adatokkal).
S5 táblázat. Az US ADTKD-regiszter UMOD-pontszámának vevő-működési jellemzői (ROC) görbéjének koordinátái (ADTKD-UMOD-ban és ADTKD-MUC1-ben szenvedő betegek) vizelet-uromodulin nélkül vagy azzal együtt (n ¼ 205 és n ¼ 86 vizelet uromodulin).
IRODALOM
1. Devuyst O, Olinger E, Weber S et al. Autosomal dominant tubulointerstitialvesebetegség, Nat Rey Dis Primers.2019:5:60.
2. Eckardt KU, Alper SL, Antignac C és munkatársai Autoszomális domináns tubulointersticiális vesebetegség: diagnózis, osztályozás és kezelés – a KDIGO konszenzusos jelentése. Vese Int.2015;88:676-683.
3. Hart TC, Gorry MC, Hart PS és társai. Az UMOD gén mutációi felelősek a medulláris cisztás vesebetegségért 2 és a familiáris juvenilis hyperurikémiás nephropathiáért. J Med Genet.2002;39:882-892.
4. Devuyst O. Olinger E, Rampoldi L Uromodulin: a fiziológiától a ritka és összetett vesebetegségekig. Nat Rev Nephrol.2017;13:525-544.
5. Kirby A, Gnirke A, Jaffe DB és mtsai. Az 1-es típusú medulláris cisztás vesebetegséget okozó mutációk a MUC1-ben található nagy VNTR-ben rejlenek, amelyet a masszívan párhuzamos szekvenálás nem hagyott ki. Nat Genet.2013;45:299-303.
6. Knaup KX, HackenbeckT, Popp B és mtsai. A mucin biallélikus expressziója-1 in 21. Youhanna S, Weber J, Beaujean V, et al. Determination of uromodulin in autosomal dominant tubulointerstitialis vesebetegség: impplications for nongenetic betegség felismerése.J Am Soc Nephrol.2018292298-2309.
