Az alacsony dózisú Cistanche potenciális terápiás előnyei krónikus fáradtság szindróma esetén

Krónikus fáradtság szindróma(ME/CFS) egy legyengítő multiszisztémaIsmeretlen etiológiájú krónikus állapotfified, mint immunműködési zavarszindróma és neurológiai rendellenesség. A széles körben kifejezett tranziens felfedezéseReceptor Potential Melastatin 3 (TRPM3) mint nociceptor csatorna lényegében célzottbizonyos opioid receptorok által, és ennek hatása a kalciumban (Ca2 plusz)-függő Natural Killer(NK) sejt immunfunkciói felvetették annak lehetőségét, hogy a TRPM3 lehetfarmakológiailag az ME/CFS jellegzetes tüneteinek kezelésére szolgál. NaltrexonA hidroklorid (NTX) a mu antagonistájaként működik.m)-opioid receptor, így negatívgátló funkciója a TRPM3-on. Az előnyök alapjánarról számoltak be a betegektünetek, alacsony dózisú NTX (LDN, 3.{1}}–5.0 mg/nap) kezelés úgy tűnik, hogy kínál némi előnytami arra utal, hogy hatása az ME/ patomechanizmusára irányulhatCFS. Mivel nincs megerősítő irodaloma hatékonyságotLDN-t az ME/CFS betegeknélin vitro, ez a tanulmány az LDN lehetséges terápiás hatását vizsgálja ME/CFS betegekben. TRPM3az ioncsatorna aktivitást pregnenolon-szulfáttal (PregS) történő moduláció után mérték, és nemNK sejtek 9 ME/CFS betegen, akik LDN-t szedtek, és 9 kor és nem egyezikegészséges kontrollok a teljes sejt patch-clamp technikával. Jelentjük, hogy ME/CFS betegekAz LDN szedése visszaállította a TRPM-et{0}}, mint az ionáramokat az NK-sejtekben. Kis ionáramok atipikus TRPM{0}}mint a külső helyreigazítása PregS alkalmazása után mértük, aTRPM{0}}agonista LDN-t szedő betegek NK-sejtjeiben. Ezenkívül a PregS által kiváltott ionosA TRPM3-on áthaladó áramok szignifikánsak voltaka none in modulált, egy TRPM{0}}antagonista,LDN-t szedő ME/CFS betegek NK sejtjeiben. Ezek az adatok alátámasztják azt a hipotézistAz LDN potenciálisan kezelheti az ME/CFS-t a mögöttes okok jellemzésével az LDN-kezelés szabályozó mechanizmusai, beleértve a TRPM3-at és az NK opioid receptoraitsejteket. Végül, ez a tanulmány szolgálhat a forgalomba hozott gyógyszerek újrahasznosítására, valamint támogatásraaz NTX szerepére és dózisára vonatkozó prospektív randomizált klinikai vizsgálatok jóváhagyásaME/CFS betegek kezelésére.

Kulcsszavak:alacsony dózisú cistanche, tranziens receptor potenciál melasztatin 3, kalcium, opioid receptor, myalgiásagyvelőgyulladás/krónikus fáradtság szindróma, természetes ölősejtek, teljes sejt patch-clamp elektrofiziológia

BEVEZETÉS

Myalgiás encephalomyelitis/Krónikus fáradtság szindróma(NEKEM/CFS) egy súlyos multiszisztémás állapot, amelyre jellemzőtartós legyengítő fáradtság kíséretében számosmozgássérült tünetek, beleértve a megerőltetés utáni rossz közérzetet, alvástdiszfunkció, széles körben elterjedt fájdalom, valamint neuro-kognitív,vegetatív, kardiovaszkuláris, neuroendokrin és immunrendszermegnyilvánulások (1, 2). Az ME/CFS változó súlyosságú(enyhétől a nagyon súlyosig) (3), ahol jelentősés következetesimmunműködési zavarok és rendellenességek a Natural Killerben (NK)sejtfunkciókról számoltak be a súlyosság alapján (4). Nélkülklinikailag megalapozott diagnosztikai vizsgálat, a diagnózis összetett éspontatlan. A diagnózis jelenleg különböző tüneteken alapulesetdefiníciók, az úgynevezett kanadai konszenzuskritérium(CCC, 2003) és az International Case Criteria (2011), amelyfoglalkozik az ME/CFS klinikai jellemzőivel (2, 5, 6). Azetiológiája és specifikusaz állapot patofiziológiája, amelyvilágszerte 17-24 millió embert érint.7), ismeretlenek maradnak.Az ME/CFS potenciálisan a belső károsodás miatt alakul kiTranziens receptorpotenciál (TRP) nem szelektív kationgenetikai vagy szerzett tényezők által okozott csatornák (8–13). Korábbi tanulmányok a TRP Melastatin 3 fontosságára utaltak(TRPM3), egy széles körben kifejeződő kalcium (Ca2 plusz)-áteresztőnem szelektív kationcsatorna, az ME/CFS patofiziológiájában(8–10). Az utóbbi időben független elektrofiziológiai vizsgálatokután kimutatta a TRPM3 ioncsatorna funkcióvesztésétstimuláció két erős TRPM{0}}agonistával, a pregnenolonnalszulfát (PregS) és nifedipin, valamint szelektív gátlásés erős blokkoló, a dezoxibezoin ononetin, az NK-sejtekbenhárom különböző ME/CFS-beteg kohorsz (11–13). A TRPM3-at korábban azonosítottákmint kemo- éshőérzékeny nociceptor csatorna a szomatoszenzorosrendszer, és részt vesz a káros hő és a gyulladás kimutatásábanhő-hiperalgézia, valamint a fájdalom átadásakor(14). A legújabb szakirodalom azt sugallja, hogy a jelátviteli utakbizonyos G-protein kapcsolt aktiválásával járreceptorok (GPCR), úgynevezett opioid receptorok, gátolhatják a TRPM3-ationcsatorna aktivitást a G közvetlen kötésévelbgalegysége atrimer G-fehérjéket az ioncsatornába (15–18). Fiziológiailag,az opioid receptorokat endogén opioid peptidek aktiváljákmodulálja a fájdalom és a gyulladásos mechanizmusokatutak (19). Az opioid gyógyszerek vagy opiátok mind fájdalomcsillapító, mindnemkívánatos mellékhatások, ha ugyanazokhoz a GPCR-ekhez kapcsolódnak (19). A bizonyítékok azt mutatják, hogy az opioid receptorok nem csak expresszálódnaka központi idegrendszer (CNS) által, de széles körben elterjedteka központi idegrendszeren kívüli szöveteken és szervrendszereken, mint például aimmunsejtek (20). A leukocita opioid receptorok aktiválásaendogén opioid peptidek szekréciójához vezet, amiezt követően aktiválja a neuronális opioid receptorokat és enyhítifájdalom (21). Az opioidokról kimutatták, hogy immunszuppresszívek isa veleszületett és adaptív immunrendszerre gyakorolt ​​hatások22). NEKEM/A CFS patológiája ioncsatorna rendellenességnek tekinthető, illcsatornaopátia (8–13), valamint az immunrendszer működési zavaraszindróma és neurológiai rendellenességek23, 24). Ezért létfontosságúa mögöttes szabályozási mechanizmusok vizsgálatáraTRPM{0}}opioid receptor kölcsönhatás ME/CFS-ből származó NK-sejtekbenbetegeket, hogy jobban megértsék a patogenezist.A TRPM3, mint nociceptor csatorna felfedezésealapvetően bizonyos opioid receptorok által célzott, valamint annakimplikáció a Ca2 plusz-függő NK-sejtek immunfunkcióiarra utal, hogy a TRPM3 ioncsatorna farmakológiai eredetű lehetME/CFS kezelésére célzott. A naltrexon-hidroklorid (NTX) ahosszan tartó opioid antagonista kifejezettena mu-opioidot célozva megreceptor (MOR) és kisebb mértékben a delta-opioidreceptorok (dVAGY) (25, 26). Az NTX kötése bemVAGY tagadjaezen opioid receptorok gátló funkciója a TRPM3-on (15, 17, 18, 26). Erről korábban beszámoltunkin vitrokezelésNTX-ben szenvedő ME/CFS-betegek NK-sejtjei 24 órán át, helyreálla TRPM3 ioncsatorna aktivitása (13). A TRPM3 ion helyreállításacsatorna aktivitása viszont visszaállította a megfelelő Ca2 pluszjelzés ésönmagábanNK sejtek' aktiváló és effektor funkciók(13). Az NTX-et gyakran alkalmazzák az opioidok ésalkoholfüggőség 50-100 mg/nap dózisban (25). Magasbanadagolás mellett az NTX blokkolja a béta-endorfinek eufórikus érzésétamelyek részt vesznek a természetes jutalmazási körökben ésezért fenntarthatja a függőséget (27). Alacsony adag (3.{1}}–5.0 mg/nap,alacsony dózisú NTX, LDN) ellentétes hatást fejt ki,fokozza az endorfin hatást, csökkenti a fájdalmat és fokozzaöröm (28). Ezt úgy tartjákjelentőségük van a betegségekbenmint például az ME/CFS, ahol nem elegendőaz endogén szekréciójaAz opioid peptidek befolyásolják az immunválaszt vagy a fájdalomcsillapítást (29, 30), vagy a gyulladást elősegítő anyagok felszabadulásátcitokinek (25, 31). Egy frisstanulmány szerint az LDN biztonságos és hatékony az ME/CFS enyhítéséretüneteket a klinikai beteg retrospektív vizsgálatával218 ME/CFS-beteg LDN-t kapott nyilvántartása (27). Még akkor is, haúj bizonyítékok arra utalnak, hogy az LDN javíthatja a napi működést ésaz ME/CFS-betegek életminősége, továbbáin vitrovizsgálat azszükséges a mögöttes szabályozási mechanizmusok megértéséhezTRPM3 és opioid receptorok bevonásával az NK sejtekben, hogy segítsenmegérteni az ME/CFS patomechanizmusát és azonosítaniterápiás célpontok.Jelen tanulmány a lehetséges terápiás hatást vizsgáltaAz LDN csökkenése ME/CFS betegekben a TRPM3 ioncsatorna helyreállításávalNK sejtekben a teljes sejt patch-clamp technikák segítségével.Eredményeink azt mutatják, hogy az LDN-t szedő ME/CFS betegeknélhelyreállították a TRPM-et{0}}, mint az ionáramok az NK-sejtekben. helyreállításaA TRPM3 funkció szükséges a Ca elősegítéséhez2 pluszjelátalakításNK sejtekben ésönmagábanNK sejt aktiváció és effektor funkciók.Ez az elsőtanulmány a hatékonyságrólLDN ME/CFS-hezbetegekin vitro, tehát megerősítvefelhasználási lehetősége aa betegség kezelése.

Kattintson ide, ha többet szeretne megtudni a cistanche fáradtsággátló funkciójáról

ANYAGOK ÉS METÓDUSOKRésztvevők toborzása

Kilenc ME/CFS-beteg és kilenc koruk és nemük megfelelő egészségeskontrollokat (HC) a Nemzeti Központ segítségével vettek felNeuroimmunológiai és feltörekvő betegségek (NCNED) betegadatbázis 2019 szeptembere és 2021 februárja között.A résztvevők 18 és 60 év közöttiek voltak. Mind ME/CFSa betegek korábban igazolt kaptakorvosi diagnózisés egy átfogó online kérdőív segítségével szűrtük lemegfelel a Centers for Disease Control ésMegelőzés (CDC), CCC és ICC esetdefiníciók. Mind a kilenc ÉN/CFS-betegeket határoztunk mega CCC által. Mind a kilenc ME/CFS betegaz NCNED toborozta őket, mivel korábban megkezdték az LDN-tkezelés (3.0–5.{1}} mg/nap) legalább 4 hétig a kezelés részekéntkezelési tervet a háziorvosuk felírása után.A HC nem számolt be fáradtság előfordulásáról, és jó egészségi állapotban voltbetegségre utaló jelek nélkül. A résztvevőket ebből kizártákmegvizsgálják, hogy terhesek vagy szoptattak-e, vagy arról számoltak be, hogy akorábbi dohányzás, alkoholfogyasztás vagy krónikus betegség(például autoimmun betegségek, szív- és érrendszeri betegségek,cukorbetegség, metabolikus szindróma, pajzsmirigy betegség, rosszindulatú daganatok,álmatlanság, krónikus fáradtság és elsődleges pszichés zavarok)vagy elhízottak voltak (BMINagyobb vagy egyenlő30). Egy résztvevő sem számolt be opioidok használatárólvagy bármely más fájdalomcsillapítót az előző 3 hónapban, valamintközvetlenül vagy közvetve befolyásoló farmakológiai szerek TRPM3 vagy Ca2 pluszjelzés. A résztvevőket ellátták alehetőség az ütközések megszüntetéséregyógyszerek minimum 14nappal a véradás előtt, orvosuk jóváhagyásával.Minden résztvevő kitöltött egy online kérdőívetszociodemográfiai háttér, kórtörténet, gyógyszerek éstünetelőzmény ME/CFS-betegeknél (Asztal 1). Az 36-elemrövidített egészségügyi felmérés (SF-36) és az Egészségügyi Világszervezet(WHO) fogyatékosság-felmérési ütemtervét (DAS) szokták megmeghatározza a fogyatékosság szintjét és az életminőséget (2. táblázat) (32, 33). Végül az ME/CFS betegeket arra kérték, hogy maguk jelentsék be a betegség súlyosságáttünetek az LDN bevétele előtt és után3. táblázat). Eza vizsgálatot a Griffith jóváhagytaEgyetemi EmberKutatási Etikai Bizottság (GU2019/1005) és Gold CoastEgyetemi Kórház Humánkutatási Etikai Bizottsága(HREC/2019/QGC/56469).

Perifériás vér mononukleáris sejtIzolálás és természetes ölősejtek izolálása

Összesen 85 ml teljes vért gyűjtöttek beetilén-diamin-tetraecetsav (EDTA) csövekkeresztülvénapunkcióegy képesítettphlebotomist minden résztvevőtől reggel 8:30 közöttés 10:30 gyűjtési helyeken, beleértve a Griffith-et isEgyetemi,Királyi Brisbane és a nők's Kórház, Robina Kórház, SunshineCoast University Hospital, Calvary John James Hospital,

Royal Melbourne Kórház, Ausztrália. Rutinszerű teljes vérvizsgálata vörösvértestek gyűjtését követő négy órán belül elvégeztékszám, fehérvérsejtszám és granulocita sejtszám mindegyik esetébenrésztvevő a Gold Cost Egyetemi Kórházban vagy a Royal Melbourne-benKórház, Ausztrália.A mintákat a laboratóriumba szállították, és azonosítottákhasználvafüggetlen vérgyűjtő egyedi kódja. Perifériás vérmononukleáris sejteket (PBMC) izoláltunk 80 ml egészbőlvér centrifugálásával sűrűséggradiens közegben (FicollPaque Premium; GE Healthcare, Uppsala, Svédország), mint korábbanleírt (34, 35). A PBMC-ket tripánkékkel festettük(Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) sejtszám meghatározására éssejt életképesség. A PBMC-ket afifinali koncentrációja5x107 sejt/ml NK-sejtek izolálásához.Az NK sejteket immunmágneses szelekcióval izoláltuk anEasySep Negative Human NK Cell Isolation Kit (Stem CellTechnologies, Vancouver, BC, Kanada). NK Sejttisztítás segítségével határozták megflflow citometria. Az NK sejteket inkubáltuk20 percig szobahőmérsékleten CD56 jelenlétébenFITC ({0},25 µg/5 µl) és CD3 PE Cy7 (0,25 µg/20 µl) monoklonálisantitestek (BD Bioscience, San Jose, CA, USA), mint korábbanleírt (10). 7-amino-aktinomicin (7-AAD) (2,5 µl/teszt) (BDBioscience, San Jose, CA, USA) segítségével határoztuk meg a sejteketéletképességét. A sejteket mostuk és 200 °C-ban újraszuszpendáltukml offoltpuffer (BD Bioscience, New Jersey, USA) és beszerzett10-kor,000 események az LSRFortessa X-20 (BD Biosciences,San Diego, CA, USA). Előre és oldalsó szórás segítségével aA mintavétel során a limfocita populációt kapuztuk.Ezután azonosították az NK-sejtpopulációtmint CD3− CD56pluszsejteket.

Teljes sejt elektrofiziológiai felvétel

Az elektrofiziológiai felvételeket boroszilikáttal végeztük1,5 mm külső átmérőjű üvegkapilláris elektródák és anbelső átmérője 0.86 mm (Harvard Apparatus, Holliston, MA,USA). Pipetta ellenállás megtöltéskorpipettával a következő volt: 8-12 MW. A pipettákat egy CV203BU fejasztalra szerelték fel(Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA) egy 3-úton csatlakozikdurva manipulátor és mikromanipulátor (Narishige, Tokió,Japán). Az elektromos jeleket felerősítettékés egy an segítségével rögzítettükAxopatch 200B erősítőés PClamp 10.7 szoftver (MolecularDevices, Sunnyvale, CA, USA). Az adatokat szűrtük5 kHz-en ésdigitális mintavételezés 10 kHz-enkeresztülegy Digidata 1440A analógdigitális konverter (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA). AzA feszültség-rámpa protokoll egy lépés volt a plusz 10-es tartási potenciáltólmV-ra−90 mV, majd 0,1 s-os rámpa plusz 110 mV-ra, mielőttvisszatérés plusz 10 mV-ra (10 másodpercenként ismételve). A folyékony csomópontpotenciál a pipetta és a fürdőoldat között (−10 mV) voltjavítva. A szivárgóáram-komponenst nem vonták lea rögzített áramok. Az elektróda megteltaz intracellulárissalpipetta oldat, amely 30 mM CsCl-t, 2 mM MgCl-t tartalmaz2110 mML-aszparaginsav, 1 mM EGTA, 10 mM HEPES, 4 mM ATP,0,1 mM GTP, pH-ja 7,2-re állítva CsOH-val és ozmolalitása

290 mOsm/l D-mannittal. A pipettával kapott oldatot leszűrjük egy 0.22mm membránszűrő(Sigma-Aldrich, St. Louise, MO,USA), aliquot részekre osztva és−20 fok. Fürdős megoldástartalmazott: 130 mM NaCl, 10 mM CsCl, 1 mM MgCl21,5 mMCaCl22H2O, 10 mM HEPES, a pH-t NaOH-val 7,4-re állítottuk be ésozmolalitás 300 mOsm/L D-glükózzal. Minden reagens volta Sigma-Aldrichtól vásárolt, kivéve az ATP-t és a GTP-ta Sapphire Bioscience-től vásárolták. TRPM3 ionosAz NK-sejtek áramát 100 hozzáadásával stimuláltukmM PregS(Tocris Bioscience, Bristol, Egyesült Királyság) a fürdőoldathoz, mígA PregS-indukált TRPM3 áramokat 10 hozzáadásával blokkoltukmM ononetin (Tocris Bioscience, Bristol, Egyesült Királyság). Minden résztvevő számára10 különböző felvétel készült. Ezért az N a számra utalrésztvevők mindegyik csoportban (ME/CFS betegek vagy HC) és n, aa leolvasások száma vagy a minta mérete. Minden mérés voltszobahőmérsékleten végezzük. A szerzők eltávolították aa klorid áram részvételének lehetősége a TRPM3-banértékelést L-aszparaginsav alkalmazásával intracelluláris pipettábanmegoldás. Az instabil árammal rendelkező sejteket szintén kizártukaz elemzésből.Statisztikai analízisA limfocita populációkat azonosítottáktárs általcitometria segítségévelelőre és oldalsó szórások pontrajzokat. A CD3 tisztasága- CD56pluszlimfociták meghatározása történt. A citometriai adatok innen lettek exportálvaFacsDiva v8.1 és SPSS v24 (IBM Corp, Version) segítségével elemzett24, Armonk, NY, USA) és GraphPad Prism v7 (GraphPadSoftware Inc., 7-es verzió, La Jolla, CA, USA). Elektrofiziológiaiaz adatokat pCLAMP 10.7 szoftverrel (MolecularDevices, Sunnyvale, CA, USA). Origin 2018 (OriginLabCorporation, Northampton, MA, USA) és a GraphPad Prismv7 (GraphPad Software Inc., 7-es verzió, La Jolla, CA, USA) voltakstatisztikai elemzéshez és adatszolgáltatáshoz használják. Vizuális ésnormalitásának meghatározására számítógépes módszereket alkalmaztunkfüggetlen adatok.

Pontosabban a hisztogram diagramok és aShapiro-Wilk normalitástesztet, ferdeséget és görbületet alkalmaztunkhogy meghatározzuk az adatok eloszlását és a normalitást. Attól függőena normalitásra vonatkozóan statisztikai összehasonlítást végeztünk afüggetlen, nem paraméteres Mann-Whitney U teszt, illfüggetlen parametrikus t-próba. Fishers pontos tesztet használtakmeghatározza az NK-sejtek ononetinnel szembeni érzékenységét. Jelentőségvolt beállítvao<0.05 and="" the="" data="" are="" presented="" as="" mean="" ±="" sem="" unless="">másként kijelentve.EREDMÉNYEKA résztvevők jellemzői ésVérparaméterekTizennyolc korban és nemben megfelelő résztvevőt vontak beezt a vizsgálatot. A betegek demográfiai adatai-ben foglalta összeAsztal 1. Nem volt jelentőskülönbség benneéletkor vagy nem az ME/CFS betegek és a HC között. Az SF-36 ésA résztvevők egészségi állapotának meghatározására WHODAS felméréseket használtakkapcsolódó életminőség (2. táblázat) (36, 37). 

Ahogy az várható volt, jelentős voltközötti különbség az SF{0}} és a WHODAS pontszámokbanME/CFS betegek és HC. Ráadásul teljes vérképparamétereket mérték minden egészséges résztvevőnél ésME/CFS betegek (2. táblázat). Miközben jelentős az eozinofilek különbsége az egészséges résztvevők és a ME között/CFS betegeknél minden eredmény a megadotton belül voltreferenciaa Gold Coast University Hospital által biztosított tartományokPatológiai Osztály, NATA akkreditált laboratórium. Nem jelentős eltéréseket jelentettek más paraméterekben. Végül ME/CFSa betegek gondolkodási zavarok javulásáról számoltak be,koncentráció és kognitív túlterhelés, valamint egyéb immunrendszerzavarok tünetei (torokfájás, megnagyobbodott vagy érzékeny nyirok).csomópontok és a megfázás/influenza iránti fogékonyság) kezelés utánLDN (3. táblázat), a korábban leírtak szerint (27, 38). 

Természetes ölősejtek tisztasága

NK sejttisztaság (CD3- /CD56plusz) 92,42 százalék ± 1,849 volt a HC és82,20 százalék ± 9,409 a meghatározott LDN-t szedő ME/CFS betegeknéláltalflflow citometria (1A. ábra). Nem volt jelentős különbség az NK-sejtek tisztaságában az LDN-t szedő ME/CFS-betegeknélösszehasonlítva a HC-vel (1B. ábra).

TRPM3 ioncsatorna aktivitás utánPregnenolon-stimuláció NK-sejtekbenLDN-t szedő ME/CFS betegektőlÖsszehasonlítva a HC-ből származó NK sejtekkel

A TRPM3 ioncsatorna aktivitását izolált humán NK-ban rögzítettükLDN-t szedő ME/CFS betegek sejtjei (3.{1}}–5.{1}} mg/nap) ésösszehasonlítva az izolált emberi NK-sejtekkel, koruk és nemük szerintHC, a teljes sejt patch-clamp technikával.Az endogén TRPM3 ioncsatorna működése gyorsan és100 alkalmazásával reverzibilisen aktiválhatómM PregS, aneuronális szteroid. Stimuláció PregS engedélyezett mérésselegy kis kifelé egyenirányító áram feszültségbilincs alatta TRPM3 áram-feszültség tipikus alakjának megfigyelésekapcsolat (I–V) (2. ábra). Mi tehát,kis ionáramot mért tipikus TRPM{0}}szerű értékkelkülső helyreigazításHC-ből izolált NK sejtekben azutánPregS hozzáadása (2A, B ábra). Érdekes módon a PregSalkalmazása LDN-t szedő ME/CFS betegek NK sejtjeibenutánozta a PregS által kiváltott NK-sejtek növekedését a HC-ból(2C, D ábra). Így a PregS stimuláció növekedést indukálta külsőleg helyreigazítottáramamplitúdók az NK sejtekben tőlME/CFS betegek, akik LDN-t szednek ugyanarra a szintre, mint az NK-sejteketHC (2E ábra). Ezenkívül a PregS által kiváltott áramok atipikusI–V TRPM3 (2D ábra). Az adatok arra utalnak, hogy ME/Az LDN-t szedő CFS-betegek már nem szenvednek károsodástA TRPM3 csatorna aktivitása a korábban jelentett módon (11–13), ésezért az LDN potenciális terápiás előnyökkel járhatszámáraa patológia.

PregS-kiváltott áramok modulálásaOnonetinnel a ME/CFS NK-sejtekbenAz LDN-t szedő betegek az NK-hoz képestHC-ből származó sejtek

PregS-indukált Ca2 plusz-beáramlásés ionáramok a TRPM3-on keresztülaz ioncsatornák hatékonyan gátolhatók egy természetes vegyülettel,dezoxibezoin ononetin (39). Ezért a megerősítéshezhogy a TRPM3aktivitás részt vesz a PregS által kiváltott ionáramokban az NK sejtekben, mikövetkező használt 10mM ononetin a TRPM3 ioncsatorna modulálásáhoztevékenység (3. ábra). Amint korábban bemutattuk (11–13), az ionosA PregS alkalmazása által kiváltott áramok hatékonyak voltakgátolja a none egyidejű alkalmazása izoláltbanNK-sejtek a HC-ból (3A. ábra–C). Sőt, aI–V nak,-nekaz ononetin érzékeny áramokat kifelé egyenirányítottákés tipikusTRPM3 esetén (3B. ábra). Érdekes módon az ionáramok váltottak kiA PregS alkalmazásával szintén hatékonyan gátolták10 egyidejű alkalmazásamM ononetin izolált NK-banLDN-t szedő ME/CFS betegek sejtjei3D ábrák–G). Valójában a TRPM{0}}függő ionáram korábban is voltszármazó izolált NK-sejtekben rezisztensnek bizonyult az ononetinnel szembenME/CFS betegek (11–13). Az ME/CFS-ből származó NK-sejtek azonbanAz LDN-t szedő betegek ugyanabban a tartományban érzékenyek az ononetinremint NK-sejtek a HC-ból (3G ábra). Sőt, aI–V az ononetinAz érzékeny áramokat kifelé egyenirányítottákés jellemző a TRPM3-ra

(3E. ábra). Végül,3H. ábrajelenti a TRPM3 áramotamplitúdók PregS stimuláció és ononetin moduláció utána HC és ME/CFS vevő LDN csoportokon belül és csak aaz ononetinre érzékeny rekordok kerültek bele. Egy jelentős után a TRPM3 áram amplitúdójának csökkenését jelentettékmoduláció ononetinnel mind a ME/CFS betegeknélLDN (p=0.0336) és HC (p=0.0205) csoport. Ez a grafikon megerősítiA TRPM3 ioncsatorna hasonlóan működik ME/CFS-benLDN-t szedő betegek HC-vel összehasonlítva ugyanazt az áramotamplitúdó tartományok vannak jelentve (3H. ábra). Ezek együttesenaz eredmények megerősítikhogy az LDN-t szedő ME/CFS betegeknek nincs olyankárosodott TRPM3 ioncsatorna aktivitás, ami a jelentések szerinta betegségre jellemző (11–13). Végezetül a kezelésLDN-nel lehetővé teszi a TRPM3 ioncsatorna funkció visszaállítását ME/CFS-betegek, ezért potenciális terápiás hatása van.

VITA

Jelen tanulmányban a teljes sejtes patch-clamp-ot használtukAz endogén TRPM3 ioncsatorna mérésére szolgáló technikaLDN-t szedő ME/CFS betegek NK sejtjeiben. Mijelentést az elsőnekaz LDN-t szedő ME/CFS betegeknél fennálló időhelyreállították a TRPM-et{0}}, mint az ionáramok az NK-sejtekben. Valóban, aA PregS alkalmazása lehetővé tette a kis ionok méréséttipikus TRPM{0}}áramok, mint a külső egyenirányításNK-banLDN-t szedő betegek sejtjei. Ezenkívül a PregS által kiváltott ionosA TRPM3-on áthaladó áramok szignifikánsak voltakáltal moduláltononetin az LDN-t szedő ME/CFS betegek NK sejtjeibenhasonlóan leírva a HC. Ezek az eredmények tükrözikkorábbi eredményeinketa TRPM3 ioncsatorna funkciójának helyreállításáról számol beME/CFS betegek NK sejtjeiben azutánin vitrokezelésselNTX (13). Ezek az eredmények is összhangban vannak az előzőekkelaz ME/CFS-re utaló vizsgálatok aTRPM3 funkcióvesztés által kiváltott csatornapathia ésa PregS által kiváltott ionáramok csökkenése jellemezvalamint az ononetinnel szembeni rezisztencia az ME/CFS-ből származó NK-sejtekbenbetegek (8–13). A TRPM3 funkcióvesztése lehet a felelőskárosodott Ca2 pluszjelző és Ca2 plusz- közvetített sejtfunkciók,beleértve az NK-sejtek immunfunkcióit (11–13). Jelen újszerű tanulmányunk az első in vitrotanulmány megerősíti a hatékonyságotés terápiás előnyLDN-t az ME/CFS betegeknélaz LDN mögöttes szabályozó mechanizmusok jellemzésévela TRPM3-at és az opioid receptor kölcsönhatást magában foglaló kezeléstNK sejtekben. Az LDN jótékony hatásáról korábban beszámoltakakülönféle betegségek, például sclerosis multiplex kezelésére,Crohn's betegség, fibromyalgia, rák, gyulladásosbélbetegség és ME/CFS (40–44). Pontosabban, ban,-benPolo és munkatársai által végzett előzetes tanulmány. a biztonságról ésaz LDN kezelés hatékonysága, az ME/CFS betegek 73,9 százalékapozitív kezelési választ jeleztek (27). A legtöbb betegjavult az éberség/éberség és javult a fizikai állapotés a kognitív teljesítmény. Néhány beteg kevesebb fájdalomról is beszámoltés láz, ami azt mutatja, hogy az LDN mutathat némi potenciáltaz ME/CFS tünetek széles spektrumának enyhítése (27). Hasonlóképpen,Bolton és társai. három esetjelentést írt le, amelyeket az ME/CFS állított összeLDN-t szedő betegek, és beszámoltak a válaszok széles skálájáról,az élet megváltoztatásától csak bizonyos tünetek csökkenéséig (38).

Az előnyök alapjána betegek a tüneteikről számoltak be,Az LDN kezelés potenciális kezelésként használható, és lehetaz ME/CFS patomechanizmusát célozzák meg.Az ME/CFS patogenezise ismeretlen, de abnormális ioncsatornák és pontosabbankárosodott a TRPM3 funkciójaa közelmúltban a betegség jellegzetes vonásaként jelent meg (8–13). Korábban beszámoltunk a TRPM3 funkcióvesztésrőlmoduláció erős TRPM{0}}agonistákkal és antagonistákkal NK-bansejtek három különböző ME/CFS-beteg kohorszból (11–13). A TRPM3-ról azt írták le, hogy a Ca központi szereplője2 plusz- függő jelátviteli útvonalak, mind gerjeszthető, mind nem gerjeszthetőcellák, ahol Ca2 pluszjelek hajtják a különböző cellákatfolyamatok (45). Papanikolaou és munkatársai azonosítottákTRPM3 mint anfontos összetevője a'kb2 pluszeszköztár' amely alátámasztja a bolti működtetéstkb2 pluszbevezetése és a Ca fenntarthatósága2 pluszjelzés beCNS fehérállomány glia (46). Hasonlóképpen kimutatták, hogy a TRPM3 vezetCa növekedéséhez2 plusz beáramlása hasnyálmirigy béta sejtjeiben, ami azt eredményeziezt követő inzulin felszabadulás (47). Minden sejttípus egyediSzigorúan szabályozott jelzési fenotípus, amely képes szállítanispatiotemporális Ca2 pluszjeleket, hogy modulálják sajátos funkcióját(48). Következésképpen a Ca bármilyen finom szabályozási zavara2 pluszjelek lehetnekerősen befolyásolja a sejtek működését, és betegségekhez vezet (48, 49). Az NK-sejtek Ca-t is igényelnek2 plusza hatékonystimuláció ésfunkciók, beleértve az NK-sejtek citotoxicitását (50–53). VeszélyeztetettAz NK-sejtek citotoxikus funkciója jól dokumentált és következetesME/CFS funkciója (54). Ezért a TRPM3 funkcióvesztése előfordulhatbefolyásolásával hozzájárulnak az ME/CFS tünetek kialakulásáhozkb2 pluszjelző és Ca2 plusz-közvetített sejtfunkciók, beleértve az NK-t issejt immunfunkciói.A TRPM3 szakirodalomban jól jellemzett funkciója azszerepe az ártalmas hő (akut fájdalom), valamint a gyulladások kimutatásábanhiperalgézia (akut és krónikus fájdalom)14). Endogén opioidokat szintetizálnakin vivomodulálni afiziológiás fájdalomcsillapító reakciók gyulladásbanésneuropátiás fájdalom. Az endogén és exogén opioidok kötődneka legkülső régiók, amelyek a periférián találhatók, preszinaptikusan és posztszinaptikusanhelyek a gerincvelő hátsó szarvában és az agytörzsben,thalamus és cortex, ami a felszálló fájdalomátviteli rendszer (55). A legújabb tanulmányok arról számoltak beopioid receptorokat is expresszálnak az immunsejtek, hogy végreimmunsejtek által közvetített opioid fájdalomcsillapítás endogén termelésévelopioid peptidek, amelyekben a Gai/o–Gbg–foszfolipáz C(PLC)–inozitol 1,4,5-trifoszfát receptor (IP3R)– intracelluláriskb2 pluszútvonalat. A felszabaduló opioid peptidek ezt követően aktiválódnakperifériás neuronális opioid receptorok és fájdalomcsillapítás (21). Azt is kimutatták, hogy az opioidok közvetlenül modulálják a funkciókatlimfociták és más sejtek, amelyek részt vesznek a gazdaszervezet védelmében ésimmunszuppresszív hatásokat eredményező immunitás (56, 57). Pontosabban, az OR aktiválása opioid alkaloidokkal éspeptidek, mint például a morfin és az endogén peptidek,beleértve a béta-endorfint és a dinorfin peptideket, ami acsökkent makrofágok száma, csökkent leukocitaproliferáció és migráció gyulladásossáoldalak, csökkenta makrofágok fagocitotikus aktivitása, a kemotaxis csökkenése ésneutrofilek és makrofágok szuperoxid termelése,a makrofágok felgyorsult apoptózisa, legyengült mikrobiológiaivédelmet, valamint a leukociták és az endothel csökkent adhéziójátsejtek (58). Más negatív hatásokat is leírtak ahízósejtekhez, dendritikus sejtekhez és NK-sejtekhez való viszony acsökkent NK-sejtek citotoxicitása és citokintermelése22, 56, 59, 60). Az immunsejtek, a glia és a neuronok ezért egyintegrált hálózat, amely koordinálja az immunválaszokat ésmodulálja a fájdalomutak ingerlékenységét (61). Célzás aAz immunsejtek opioid receptorai változásokat okozhatnakimmunválaszok az in feloldódás elősegítéséreflflammáció mintvalamint a fájdalom modulálása ME/CFS betegekben.Érdekes módon az opioidhoz kötődő és aktiváló molekulákreceptorokat jelentősencsökkenti a TRPM{0}}függő fájdalmat. Ban benválasz az agonisták, opioid receptorok akut aktiválásárapár a G-hezi/o fehérjék, amelyek G-vé disszociálnakai/o és Gbgalegységek, amelyek kölcsönhatásba lépnek az intracelluláris effektorokkal (62). TRPM3aktivitását erősen gátolja a µOR aktivációja keresztülközvetlen interakció G-velbgmint TRPM{0}}függő Ca2 pluszbejegyzések erősen és reverzibilisen gátolva vannak, amikor a sejtmembrán azflflmegtisztított Gbg(15–18). Az NTX hosszú élettartamúkifejezetten opioid antagonistagátlómVAGY, teháttagadja ennek az opioid receptornak a gátló funkciójátTRPM3 (22, 26). Korábbi tanulmányunkban arról számoltunk bein vitroAz NTX-kezelés visszaállítja a TRPM3 ioncsatornátaktivitás ME/CFS-ből izolált NK-sejtekben (13). Hasonlóképpen, inA jelenlegi vizsgálatban az LDN-t szedő betegekből izolált NK-sejtek tettéknem mutatnak károsodott TRPM3 ioncsatorna aktivitást. LDNÚgy tűnik, hogy a ME/CFS betegek kezelése helyreállítja a TRPM3 iontcsatorna funkciója az NK sejtekben, ami Ca2 pluszjeleketátalakítás, hogy hozzájáruljon az integritás helyreállításáhozés az NK-sejt-specifikus stabilitásajelzőrendszerek (10–13). Érdekes módon arról számoltak be, hogy az antagonizmus hatása aNTX bekapcsolvamVAGY megzavarja a negatív visszacsatolás szabályozását isdVAGY, ezáltal növelvedVAGY funkciót.

JavításadVAGYaktivitása elősegíti az NK-sejtek citotoxicitását a béta-endorfinokra adott válaszként in vitropatkány lépsejteken, ami arra utal, hogy lehetségesNTX alkalmazása immunhiány kezelésében (63). Az LDN mögött meghúzódó mechanizmus's hatékonyságátfáradtságra,Crohn's betegség, fibromyalgiaés sclerosis multiplex, ezértmagában foglalja az opioid receptorok időszakos blokkolását, majd ezt követikb2 plusz függő gyártásés az endogén felszabályozásaopioidok. Ludwig et al. beszámolt arról, hogy a szérum [Met5 ]-enkefalinszintje alacsonyabb volt a szklerózis multiplexben szenvedő emberekbennem sclerosis multiplexben szenvedő betegeknél, és az LDN helyreállította szintjüket.Hasonlóképpen kísérleti autoimmun encephalomyelitisben szenvedő egerekben,[Találkozott5 A ]-enkefalin szintje a megjelenés előtt lecsökkent voltklinikai betegségben szenvedtek, és LDN-kezeléssel helyreálltak(28). Ezért úgy tűnik, hogy az LDN kezelés eredményeként aa fájdalomcsillapító hatás fokozása, és releváns lehetME/CFS, ahol nem elegendőopioid peptidek szekréciója befolyásoljaimmunválasz vagy fájdalomcsillapítás (29, 30), vagy gyulladásgátló anyagok felszabadulásátcitokinek (25, 31). Valójában csökkent a béta-endorfinkoncentrációt jelentettek az ME/CFS-benhőszabályozási zavarban szenvedő betegekválaszreakciók és általános súlyos vagy hosszan tartó fájdalom (64). Összefoglalva, ez a tanulmány az elsőértékelt és azonosított időaz LDN hatása a TRPM3 ioncsatorna működéséreNK sejtek ME/CFS betegekben. Ez az új tanulmány beszámol aa mögöttes TRPM{0}}opioid receptor csatorna helyreállításakölcsönhatás az LDN-t szedő ME/CFS betegek NK sejtjeiben.Ezenkívül a TRPM3 ioncsatornák széles eloszlása ​​aszervezet arra utal, hogy károsodott funkciójuk hozzájárulhataz ME/CFS jelei és tünetei, és ezért a kezelésAz LDN-nek terápiás szerepe lehet. Végül ez a tanulmány arra szolgáltámogassa a leendő randomizált tervezését és jóváhagyásátklinikai vizsgálatok az NTX szerepéről és dózisáról a ME kezelésében/CFS-betegek.