A diffúz nagy B-sejtes limfóma osztályozásával kapcsolatos kutatási eredmények

Kapcsolatba lépni:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

A diffúz nagy B-sejtes limfóma (DLBCL) az összes non-Hodgkin limfóma 25-35 százalékát teszi ki, és heterogén és agresszív csoport, különböző klinikai, patológiai és biológiai jellemzőkkel. limfóma. Korábbi klinikai vizsgálatok a rituximabot, a ciklofoszfamidot, a doxorubicint, a vinkrisztint és a prednizont (R-CHOP) azonosították a DLBCL-betegek első vonalbeli standard kezelésének, amelyek közül a betegek 50-70 százaléka képes. refrakter vagy teljes remisszió, majd relapszus, míg a refrakter és visszaeső betegek mindössze 10 százaléka gyógyítható hagyományos mentő immunkemoterápiával autológ hematopoietikus őssejt-transzplantációval kombinálva, és a betegek fennmaradó 90 százalékánál rossz a kezelés eredménye. Ezért óriási kihívássá vált ezen betegek prognózisának javítása. Jelenleg klinikai vizsgálatok is folynak, amelyek más gyógyszerek (például lenalidomid, ibrutinib stb.) kombinációját tárgyalják az R-CHOP alapján a hatékonyság további javítása érdekében, de jelentős előrelépés nem történt. A DLBCL jelentős heterogenitást mutat, így a pontos rétegdiagnózis felállítása és az egyénre szabott kezelés iránymutatása szintén a jelenlegi kutatási hotspotok egyike. Ez a cikk összefoglalja a DLBCL osztályozás előrehaladását.

cistamcheNövelje a sejtproliferációt

1. DLBCL COO tipizálása génexpressziós profilozó chip segítségével

A DLBCL nyilvánvaló heterogenitást mutat a sejtmorfológiában és a prognózisban. 2000-ben ALIZADEH és mások génchip technológiát alkalmaztak a limfociták fejlődésében, differenciálódásában és karcinogenezisében fontos szerepet játszó 3 186 gének szűrésére és kimutatására, valamint feltérképezték a DLBCL génexpresszióját. A génexpressziós profil (GEP) azt mutatta, hogy a DLBCL különböző differenciálódási stádiumú B-limfocitákból származik. A GEP szerint a DLBCL két altípusra osztható: germinális centrum B sejtszerű (GCB) és aktivált B sejtszerű (ABC) típusra. ROSENWALD és munkatársai későbbi tanulmányai. is megerősítette ezt az eredményt. A későbbi vizsgálatok több esetet és többféle genetikai szűrést is tartalmaztak, és azt találták, hogy egyes betegek nem tudták meghatározni a sejtek forrását, amelyeket két altípus, a 3-as típus között jellemeztek, más néven nem osztályozott. A különböző eredetű DLBCL esetében a tanulmány megállapította, hogy eltérő prognózisokat mutatott, amelyek közül a GCB-ből származó DLBCL hosszabb túlélési időt érhetett el. A celluláris eredetű (COO) tipizálás feltárta a DLBCL heterogenitását, és az R-CHOP kezelés során szignifikáns különbségek voltak az altípusok túlélésében, ami elméleti alapot ad a prognózis és a kezelési rend kiválasztásához. A génchip technológián alapuló GEP teszt eredményeit jelenleg a DLBCL sejtek eredetének megítélésének aranystandardjaként ismerik el. A vizsgálati eredmények a legmegbízhatóbbak, de drágák és magas mintákat igényelnek, általában frissen fagyasztott élőszövetmintákat, így a működőképesség nem erős. A klinikai gyakorlatban nem használják széles körben.

2. NanoString technológia használata a DLBCL COO-típusolásához

A NanoString (Fluorescent Barcode Labeled Single-Molecule Detection) egy új, nagy áteresztőképességű génexpresszió-profilozó technológia, amely a fluoreszcens molekuláris vonalkódok közvetlen mérésén alapul a próbákon, miután a nukleinsavmolekulák hibridizálódnak a próbákkal. Minden vonalkód-címke egy adott mRNS-szekvenciának felel meg, és akár 800 vonalkód is mérhető ugyanabban a mintában, míg a szükséges mintatérfogat akár 100 ng RNS is lehet. A NanoString digitális kvantifikációs technológiája szükségtelenné teszi az átírást, az amplifikációt vagy a könyvtárépítést, kiküszöböli a hosszadalmas kísérleti eljárásokat és az emberi erőforrásokat, és minimalizálja az enzimatikus reakciók által okozott esetleges torzítást. A ritka mintákat tartalmazó klinikai minták esetében a NanoString technológia közvetlenül használhat paraffinba ágyazott mintákat az RNS mennyiségi meghatározására RNS extrakció nélkül. Ez a technikai előny praktikusabbá teszi a klinikai gyakorlatban. SCOTT et al. 20 gént szűrtek a GEP tipizálás adatai alapján, és NanoString technológiát használtak a COO tipizálás elvégzésére 119 DLBCL mintán. A kutatási eredmények és az "arany standard" közötti összhang elérte a 95 százalékot, és a betegek GCB-típusra, ABC-típusra és besorolatlan típusra is feloszthatók, az utóbbi kettőt összefoglalóan nem-GCB-típusnak nevezzük, ami azt is mutatja, hogy a GCB típus prognózisa jobb, mint a nem GCB típusé. Más NanoString technológián alapuló tanulmányok tovább erősítették ennek a technológiának az értékét a DLBCL COO tipizálásában.

Hagyományos kínai orvoslás gyógynövénycistamche, más néven "sivatagi ginzeng"

3. A DLBCL COO tipizálása kvantitatív PCR technológiával

Mind a génchip tipizálás, mind a NanoString tipizálás költséges speciális berendezéseket igényel, amelyeket nehéz széles körben alkalmazni a klinikai gyakorlatban. A kvantitatív PCR egy általánosan használt módszer a génexpresszió ellenőrzésére. Jellemzői az egyszerű működés, nagy érzékenység és pontosság, és paraffinba ágyazott mintákból nyerhető. Li Xiaoqiu csapata kvantitatív PCR segítségével először végezte el a nagyszabású klinikai validálást kínai betegpopulációkban, és kifejlesztett egy klinikai genetikai tesztelésre alkalmas terméket, nevezetesen a DLBCL-COO Assayt. Ebben a vizsgálatban 32, a DLBCL-COO tipizálással szignifikánsan összefüggő gént szűrtünk a nyilvános adatbázisban, és 160 beteget vontunk be, majd immunhisztokémiai, kvantitatív PCR és génchip módszerekkel detektáltuk a paraffinba ágyazott mintákat és a megfelelő friss mintákat. Szövetminták, az eredmények azt mutatták, hogy a DLBCL-COO Assay tipizálási eredményei 92 százalékban megfeleltek az "arany standardnak"; túlélési elemzés kimutatta, hogy a DLBCL-COO Assay tipizálási eredményei szignifikánsan korreláltak a teljes túléléssel, és a GCB típus prognózisa szignifikánsan jobb volt, mint az ABC típusé (P =0.023), ami nagymértékben összhangban van a hazai eredményekkel. és külföldi kutatási eredmények. Viszonylagosan elmondható, hogy a kvantitatív PCR technológiát alkalmazó tipizálás módszerplatformja nyitottabb, a művelet egyszerűbb, a molekuláris patológiai laboratóriumok többségében rutinszerű fejlesztésre is alkalmas.

4. DLBCL COO tipizálása immunhisztokémiai módszerrel

Egyes területeken, ahol szűkösek a források és a technológiák, a GEP-alapú tipizálási technológia nehezen alkalmazható széles körben, ezért a klinikailag legszélesebb körben alkalmazott módszer továbbra is az immunhisztokémián (IHC) alapuló tipizálási módszer. 2005-ben a HANS és mások szöveti microarray technológiát alkalmaztak a tipizáláshoz, és létrehoztak egy IHC tipizálási modellt a CD10, BCL6 és MUM kimutatásával-1. A DLBCL GCB típusú és nem GCB típusra osztható. Az előbbi prognózisa lényegesen kedvezőbb, mint az utóbbié. (P<0.001), the="" agreement="" of="" this="" typing="" method="" with="" the="" gold="" standard="" was="" 84%.="" in="" order="" to="" further="" improve="" the="" accuracy="" of="" prognostic="" judgment,="" new="" typing="" systems,="" such="" as="" choi="" and="" tally,="" have="" been="" proposed="">

A Choi tipizálás öt biomarkeren alapul, köztük CD10, BCL6, MUM-1, FOXP1 és GCET1, és két markert, a FOXP1-et és a GCET1-et adják a Hans tipizálási módszerhez, amely 93 százalékban megfelel az "arany"-nak. alapértelmezett". Korábbi tanulmányok kimutatták, hogy a FOXP1 erősen expresszálódik az ABC típusban, és a magas expresszió rossz prognózishoz kapcsolódik. Ha a FOXP1 kritikus értéke 80 százalék, akkor az ABC típusú DLBCL kifejezetten megkülönböztethető. A GCET1 azonban nagymértékben expresszálódik a csíracentrumból származó B-sejtekben, így a GCET1 hozzáadása a Hans-tipizáláshoz hasznos a GCB-típusú és az ABC-típusú DLBCL megkülönböztetésében. A prognózis előrejelzése szempontjából a Choi-besorolást használták a betegek 3-éves túlélési arányának előrejelzésére, amelyeknek a GCB-típus 88 százaléka, az ABC-típus 44 százaléka, valamint az "arany standard" GEP-besorolás előrejelzési eredményei. (GCB típus 92 százalék volt , ABC típus 44 százalék ) 44 százalék ) meglehetősen közel áll. Li Min és mtsai. összehasonlította a Choi-osztályozás és a Hans-osztályozás előrejelző képességét, és azt is kimutatta, hogy az előbbi pontosabb. A GCB-csoport és a nem-GCB-csoport általános túlélése a Hans-osztályozás szerint nem mutatott szignifikáns különbséget (P=0.102), míg a Choi-osztályozás nem mutatott szignifikáns különbséget a teljes túlélésben (P=0) .102). A GCB csoport prognózisa szignifikánsan jobb volt, mint a nem GCB csoporté (3-az éves túlélési arány 61,8%, illetve 42,5% volt, P<0.05). however,="" it="" is="" worth="" noting="" that="" in="" recent="" years,="" with="" the="" high="" inconsistency="" of="" bcl6="" found="" by="" different="" research="" centers,="" the="" inclusion="" of="" bcl6="" in="" the="" improved="" classification="" of="" choi="" and="" hans="" has="" been="" canceled.="" operation="" and="" result="">

Mint fentebb említettük, az IHC-alapú Hans-tipizálás és a Choi-tipizálás hasonló funkciókkal bír, és több antitest eredményeit egy bizonyos sorrendben ítélik meg, ami azt eredményezi, hogy egyes antitestek magasabb prioritásúak, mint mások. A típusmódszer lehetővé teszi a későbbi antitesteredmények kizárását, ha az előző feltételek teljesülnek. A GEP-gépelés azonban nem követ egy bizonyos sorrendet, és nem zár ki bizonyos eredményeket. Az ilyen különbségek csökkentése érdekében MEYER et al. kifejlesztett egy tipizálási módszert, amely nem ítéli meg az antitesteredményeket meghatározott sorrendben, nevezetesen a Tally tipizálási módszert. A legmagasabb egyezés az "arany standarddal" 93 százalék volt, míg mind a Hans, mind a Choi gépelés 87 százalékos volt. A tally típusú módszer azonos mennyiségű GCB (GCET1 és CD10) és ABC (FOXP1 és MUM-1) antitestet tartalmaz, a besorolást pedig az antigén-pozitívabb immunfenotípusos pár határozza meg. Típusonként két antitestet használnak, így minden típus esetében azonos pozitív eredmény esetén LMO2 szükséges az immunfenotípus meghatározásához (30 százaléknál nagyobb vagy egyenlő LMO2 a küszöbérték). A vizsgálatok megerősítették, hogy az LMO2 specifikusan expresszálódik GCB-eredetű B-limfocitákban vagy limfómákban, és magas expressziója szignifikánsan összefügg a jó prognózissal DLBCL-ben.

Összefoglalva, bár a DLBCL IHC-n alapuló COO-tipizálási módszere nem olyan jó, mint a NanoString tipizálás és a kvantitatív PCR-tipizálás, az "aranyszabvánnyal" való konzisztencia is 74 százalék -93 százalék. Előnyei az alacsony követelmények és egyéb előnyök, amelyek kényelmesek a különböző kórházak rutinszerű fejlesztéséhez. Közülük Choi és Tally tipizálási módszerei jobban megfelelnek az "arany standardnak", de a GCET1, FOXP1 és LMO2 nem állandó antitestek, ami bizonyos mértékig korlátozza széleskörű alkalmazásukat.

cistamche szelet napi fogyasztásra a sejtproliferáció javítása és a sejt apoptózis csökkentése érdekében

5. Génmutáción alapuló DLBCL tipizálás feltárása

Szinte minden DLBCL-betegnek van génmutációja, és bizonyos mutációkkal rendelkező betegek befolyásolhatják a specifikus célzott gyógyszerek hatékonyságát, és így a prognózist. Ezért a mutációs szignatúrákon alapuló DLBCL altípusok klinikai haszna van. SCHMITZ et al. 574 DLBCL-beteg friss fagyasztott mintáját választották ki, és exome és transzkriptom szekvenálást használtak a génchip DNS-másolatszámának elemzéséhez. Közülük 372 gént választottak ki célzott amplifikációra és újraszekvenálásra, hogy azonosítsák azokat, amelyek reprodukálható génekkel rendelkeznek. Szexuálisan mutált gének. A vizsgálati eredmények a DLBCL-t 4 genotípusra osztották: MCD típusú (főleg MYD88L265P és CD79B komutáció), BN2 típusú (főleg BCL6 fúzió és NOTCH2 mutáció), N1 típusú (főleg NOTCH1 mutáció) és EZB típusú (főleg EZH2 mutáció) Mutáció és BCL2 transzlokáció), amelyek közül az MCD és az N1 típusok főként ABC-ből származnak, az EZB típus főként a GCB-ből származik, és a BN2 típus az ABC, GCB és a nem besorolt ​​betegek egy részét teszi ki ( A GCB típus 19 százalékot tett ki, az ABC típus 41 százalékot, a besorolatlan típus pedig 40 százalékot tett ki). A tanulmány azt is megállapította, hogy az új genotípusok jobban meghatározhatják a prognózist, amelyek közül a BN2 és EZB típusok jobb prognózisúak, mint az MCD és az N1 típusok. Az MCD, N1, BN2 és EZB típusok 5-26 százalékos, 36 százalékos, 65 százalékos, 68 százalékos éves túlélési arányt jósolnak, a többváltozós elemzés azt is kimutatta, hogy az új genotípus független, a prognózist befolyásoló tényező, és nem befolyásolta. az IPI pontszám alapján. A kutatócsoport megalkotta a LymphGen algoritmust, hogy a DLBCL-t 7 genotípusba sorolja a korábbi kutatások alapján, hozzáadva az A53-at (TP53 inaktivációval), az ST2-t (SGK1 és TET2 mutációkkal), és más nem besorolható. Ezzel a genotipizálási módszerrel a DLBCL genotípusok 63,1 százalékát sikerült azonosítani. . Közülük a BN2 altípus prognózisa a legjobb az ABC típusban, az ST2 altípus pedig a GCB típusban jobb prognózisú, mint az EZB altípus. Ezért úgy gondolják, hogy az új genotipizálás tovább tárja fel a DLBCL patogenezisét, az altípusok között eltérő patogenezissel, és a különböző genotípusok eltérően reagálnak az immunkemoterápiára, ami befolyásolhatja a célzott terápia megválasztását, de ennek az osztályozási módszernek az a legnagyobb korlátja, hogy néhány a betegek nem sorolhatók semmilyen altípusba, ami további vizsgálatot érdemel.

3{{30}}4 DLBCL-beteg teljes exome szekvenálásával CHAPUY et al. adatokat nyert az alacsony frekvenciájú mutációkról, a visszatérő mutációkról, a szomatikus kópiaszám-változásokról és a szerkezeti változatokról, és a betegeket öt genotípusként határozta meg: C1 típus (főleg BCL10, TNFAIP3, UBE2A, CD70 mutáció és BCL6 transzlokáció, többnyire ABC eredetű), C2 típusú (a TP53 biallélikus inaktivációja van, ami befolyásolja a kromoszóma stabilitását és a sejtciklust, és semmi köze az ABC/GCB eredethez), C3 típusú (főleg BCL2, CREBBP2, EZH2, KMT2D, TNFRSF14 mutációk, főleg GCB eredetű), C4 típusú (főleg SGK1, HIST1H1E, NFKBIE, BRAF és CD83 mutációk, többnyire GCB eredetű), C5 típusú (főleg CD79B, MYD88L265P, ETV6), PIM1 és TBL1XR1 mutációk, többnyire ABC eredetűek, gyakoriak az elsődleges központi idegrendszerben ill. here DLBCL) és C0 típusú (világos genetikai meghajtók hiánya). A tanulmány tovább elemezte az új genotípusok és a prognózis közötti kapcsolatot is. Az eredmények azt mutatták, hogy a C0, C1 és C4 prognózisa jobb, míg a C3 és C5 rossz prognózisú. Az ABC-eredetű betegek körében a C1 típus prognózisa szignifikánsan jobb volt, mint a C5 típusé. , míg a C4 típus szignifikánsan jobb volt, mint a C3 típus a GCB-eredetű betegekben. Az új genotipizálás meghatározza az alacsony kockázatú ABC-típusú DLBCL-t is (C1 típus), amelyek sejtjei az extrafollicularis marginális zónából származhatnak; és nagy kockázatú GCB-típusú DLBCL BCL2 szerkezeti variánsokkal és PETN-nel és epigenetikai enzimekkel. Elváltozások (C3-as típus), míg az alacsony kockázatú GCB-típusú DLBCL-hez a kinázok és többféle rekombináns fehérje (BCR/PI3K, JAK/STAT, BRAF) változásai társulnak (C4-típus); ABC/GCB eredettől független tipizálás A TP53 biallélikus inaktiválásával, a 9p21.3/CDKN2A és a rokon gének instabilitásával (C2 típus). E DLBCL-ek kulcsfontosságú genetikai jellemzői közé tartoznak a mutációk, a szomatikus kópiaszám-változások és a szerkezeti eltérések, valamint a genetikai információ e három osztályában bekövetkező változások, amelyek a betegségek és a kezelési eredmények közötti különbségek magyarázatára használhatók.

293 gén célzott szekvenálása alapján LACY et al. 928 DLBCL-beteg génmutációs jellemzőit elemezte, és 5 altípusba osztotta a betegeket: MYD88 típus (főleg MYD88L265P, PIM1, CD79B mutációk, főként ABC eredetű, a legtöbb eredeti DLBCL-beteg központi idegrendszerrel, herével és emlővel ebbe az altípusba tartozik ); BCL2 típus (EZH2, BCL2, CREBBP, T

Az NFRSF14, KMT2D és MEF2B mutációi főként, főként GCB-ből származnak, ebbe a típusba tartoznak néhány magas fokú limfómás és follikuláris limfómából transzformált DLBCL-beteg); SOCS1/SGK1 típus (főleg a SOCS1, CD83, SGK1, NFKBIA, HIST1H1E és STAT3 mutációk főként GCB-ből származnak, és a legtöbb elsődleges mediastinalis DLBCL ebbe a típusba tartozik); TET2/SGK1 típus (főleg TET2, SGK1, KLHL6, ZFP36L1, BRAF, MAP2K1 és KRAS mutációk, főleg GCB eredetű); NOTCH2 típus (főleg a NOTCH2, BCL10, TNFAIP3, CCND3, SPEN, TMEM30A FAS és CD70 mutációkat tartalmazza, amelyek ABC-ből, GCB-ből és nem osztályozott eredetből állnak, hasonló tulajdonságokkal, mint a marginális zóna limfómája); besorolatlan altípus (máshol nem osztályozott, NEC). A tanulmány elemezte a különböző genotípusok és a prognózis közötti kapcsolatot, és az eredmények azt mutatták, hogy a MYD88 prognózisa volt a legrosszabb, az 5-éves túlélési arány 42 százalék; A BCL2, SOCS1/SGK1 és TET2/SGK1 prognózisa jó volt, az 5-éves túlélési arány 64,9 százalék volt, 62,5 százalék és 60,1 százalék; míg a NOTCH2 és NEC típusok prognózisa a kettő között volt, és az 5-éves túlélési arány 48,1 százalék, illetve 53,6 százalék volt.

Összegezve megállapítható, hogy a három osztályozási rendszer nemcsak különbözik, hanem átfedő tartalma is van. Közülük a MYD88, C5 és MCD típusok mind az ABC forrásához kapcsolódnak. Elsődleges központi idegrendszeri és here limfómák többnyire ebben a három típusban fordulnak elő, és a prognózis rossz. A C2 típust a TP53 mutáció/deléció jellemzi, és a legtöbb rossz prognózisú, az A53 pedig a C2-nek felel meg. A BCL2, C3 és EZB típusok a GCB forrásához kapcsolódnak, ugyanazzal a mutációs aláírással rendelkeznek, mint a follikuláris limfóma, és bár a kettős ütéses és magas fokú limfómák gyakoribbak ebben a típusban, az általános prognózis jó. A SOCS1/SGK1 és C4 típusok főként GCB-eredetű DLBCL-ek, amelyek genetikai jellemzői hasonlóak az elsődleges mediastinalis nagy B-sejtes limfómához, és a legjobb prognózisúak. A jelenlegi mutációtipizálás azonban összetett, a különböző vizsgálatok módszerei és eredményei eltérőek. Ezért az elemzési folyamatot a jövőben még egyszerűsíteni kell, hogy tovább tisztázzuk a magmutációs gének prognózisra és kezelésre gyakorolt ​​hatását.

cistamchegazdag echinakozidot és akteozidot tartalmaz, amelyek táplálják és megóvják a szervezetet a vírusoktól és betegségektől

Összegzés

A GEP-alapú COO tipizálás az "arany standard", de magas mintákat igényel, drága, és nem könnyű rutinszerűen elvégezni a klinikai gyakorlatban. Alternatív megoldásként a NanoStringen, a kvantitatív PCR-en és az immunhisztokémiai technikákon alapuló COO-tipizálást tovább optimalizálták a mintaszükséglet, a technikai nehézségek és a kísérleti költségek szempontjából, de a prognosztikai megítélés pontossága és a kezelés irányító szerepe még mindig magasabb, mint a aranystandard. Van egy bizonyos szakadék. A jelenlegi tanulmányok azt is kimutatták, hogy szinte minden DLBCL-beteg tartalmaz genetikai mutációt, és a kedvezőtlen genetikai mutációk jelentősen befolyásolhatják a prognózist. Egyes specifikus mutációk célzott terápiája is javíthatja a prognózist, így a génmutációkon alapuló új osztályozásnak fontos klinikai jelentősége van. A génmutációs tipizálás kiegészíti a COO tipizálást, ami megmagyarázza, hogy ugyanazon COO altípuson belül is jelentős heterogenitás van. A génmutáció tipizálása azonban nem terjedhet ki minden betegre, és további kutatásokra van szükség annak igazolására, hogy a klinikai prognózis meghatározó jelentőségű, és hogy a jelenleg használt hagyományos és új célzott gyógyszerek irányíthatják-e a kezelést ezen a tipizáláson keresztül.