A keringő exoszomális PD-L1 kimutatási módszerei

Kapcsolatba lépni:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Még mindig hiányoznak az elfogadott és általános módszerek a keringő exoszomális PD-L1 kimutatására. A hagyományos exoszóma kimutatási módszerek, mint például az enzim-linked immunosorbent assay (ELISA) és az áramlásanalízis használhatók a PD-L1 kimutatására a keringő exoszómákban, és jelenleg az ELISA a leggyakrabban használt módszer. Az ELISA módszer kvantitatívan képes kimutatni a PD-L1 tartalmát a keringő exoszómákban, és könnyen kezelhető. Az áramlási citometria felhasználható a keringő exoszomális PD-L1 kvantitatív kimutatására nagy mintákban, de ehhez magas szintű detektáló berendezésre van szükség. Az exoszómák mélyreható kutatásával az exoszómális fehérjék és nukleinsavak kimutatási módszerei is gazdagodnak, fejlődnek, illetve néhány új módszer került be a keringő exoszómák PD-L1 kimutatásának területére (ábra).

észlelésekeringőexoszomálisPD-L1

1. Digitális PCR

Az exoszómákban található nukleinsav kis mennyisége miatt a hagyományos kimutatási módszerekkel nehéz pontosan kimutatni a génkópiaszámukat. A digitális PCR technológia egy rendkívül nagy érzékenységű és abszolút mennyiségi meghatározással rendelkező nukleinsav kimutatási módszer. Érzékenysége elérheti egyetlen nukleinsav molekula szintjét, így előnyei vannak az exoszómák nukleinsavtartalmának kimutatásában. A kutatók digitális PCR technológiát alkalmaztak a PD-L1 mRNS kópiaszámának pontos kvantitatív elemzésére melanómás és nem-kissejtes tüdőrákos betegek plazma exoszómáiban, és feltárták a kapcsolatot a plazma exoszomális PD-L1 mRNS kópiaszáma és az anti-PD1 korreláció között. kezelési hatások között. A digitális PCR technológia bevezetése jelentősen javította az exoszomális PD-L1 mRNS detektálási képességét, ami nagy jelentőséggel bír az exoszomális PD-L1 kutatása szempontjából. Előfordulhat azonban következetlenség az exoszomális PD-L1 mRNS tartalma és a PD-L1 fehérje expressziója között. Ezért az exoszomális PD-L1 mRNS kimutatása önmagában is tartalmazhat bizonyos hibákat, amelyek további kutatást és tisztázást igényelnek.

A rákellenes sivatagi cisztanche jótékony hatású a cistanche kivonattal

2. ELISA

Az ELISA egy hagyományos immunológiai elemzési módszer, amelyet gyakran alkalmaznak kis molekuláris fehérjék kimutatására plazmában vagy tápközegben. Nagy érzékenységű és mennyiségileg elemezhető. Az ELISA az exoszomális PD-L1 fehérje kimutatására is használható, és nagy mennyiségű minta kvantitatív kimutatását is lehetővé teszi. A plazma exoszomális PD-L1 fehérje kvantitatív kimutatására is alkalmazták az ELISA módszer elvén alapuló PD-L1 fehérje detektáló készletet. Chen et al. Az ELISA elvén alapuló exoszomális PD-L1 fehérje detektáló rendszert építettek fel, amelyet sejttenyésztő tápközegből vagy plazmából származó exoszomális PD-L1 fehérje kimutatására használtak. A lineáris érzékelési tartomány {{10}}.2-12,0 ng/ml volt. Az ELISA jó módszer az exoszomális PD-L1 fehérje kimutatására, amely könnyen kvantitatívan kimutatható és jó ismételhetőségű. A szabad PD-L1 fehérje plazmában való jelenléte miatt azonban megzavarja a pontosságát. Ezért ez a módszer érzékeli a keringést. Az exoszomális PD-L1 fehérje érzékenységét és specificitását még tovább kell vizsgálni.

Herba cistanche gyökér: rákellenes

3. Áramláselemzési módszer

Az áramlási citometriát gyakran alkalmazzák folyadékban szuszpendált sejtek vagy más biológiai részecskék tipizálására és számlálására, ezért ezt a módszert az exoszóma kimutatásban és számlálásban is bevezették. THEODORAKIS et al. először kromatográfiát használtak az exoszómák kezdetben elkülönítésére a fej-nyaki rákos betegek plazmájában, majd áramlásanalízist használtak a PD-L1-pozitív exoszómák kimutatására és megszámlálására. A PD-L1 fehérje expresszióját fluoreszcencia intenzitásként fejeztük ki. Az eredmények azt mutatják, hogy a módszer jó reprodukálhatósággal rendelkezik az exoszomális PD-L1 fehérje kimutatásában, és egyénen belüli variációja 7 százalék, ha több párhuzamos vizsgálatot végeznek egyetlen betegmintán. Ugyanakkor a módszer pontosságának ellenőrzése érdekében a kutatók a konfokális fluoreszcencia analízist alkalmazták referenciamódszerként az exoszomális PD-L1 fehérje kimutatására. Három mintát párhuzamosan teszteltek, az eredményeket összehasonlították, és azt találták, hogy az áramlási citometria és a konfokális fluoreszcencia analízis eredményei nagyon konzisztensek voltak, ami azt jelzi, hogy az áramlási citometria pontos módszer az exoszomális PD-L1 kvantitatív elemzésére. Ezen kívül LUX et al. áramlási citometriával is sikeresen detektálta az exoszomális PD-L1 és c-Met fehérjék expresszióját hasnyálmirigyrákos betegek szérumában, de a kimutatási módszer teljesítménye további tanulmányozást igényel. Jelenleg kifejezetten exoszóma-detektálásra használt áramlásanalizátorok is piacra kerültek, ilyen például az Apogee ultra-szenzitív nano-áramlás-analizátor, amely a hagyományos áramlásanalizátoroknál jobban alkalmas exoszómafehérjék kimutatására.

A cistanche tubulosa kivonat kiegészítő előnyei: daganat- és rákellenes

4. Felület-növelt Raman-szórási technológia

A Surface-Enhanced Raman-szórás (SERS) egy rendkívül érzékeny ujjlenyomat-spektroszkópiai technika, amelyet széles körben alkalmaznak az orvosbiológiai területeken. Jelenleg a tudósok SERS technológiát használnak az exoszomális PD-L1 fehérje kimutatására. A kutatók először TiO2-módosított mágneses gyöngyöket használtak az exoszómák nem specifikus adszorbeálására a plazmában, majd PD-L1 antitestekhez kapcsolt SERS próbákat használtak az arany nanorészecskék módosítására, majd az exoszóma mintákat arany nanorészecskékkel inkubálták. Mágneses gyöngy-exoszóma-arany nanorészecske komplex szerkezetet képez, végül mágneses mező segítségével dúsítja és választja el a komplexet, majd lézeres konfokális Raman spektrométerre helyezi kimutatásra, hogy megvalósítsa a PD-L1 pozitív exoszómák kimutatását. . Testtartalom észlelése. Ez a módszer nagy detektálási érzékenységgel rendelkezik, és legalacsonyabb kimutatási határa elérheti az 1 PD-L1 plusz exoszóma/μL plazmát. Ezenkívül a kutatók ezt a módszert használták különböző koncentrációjú minták egy csoportjának kimutatására. Az eredmények azt mutatták, hogy a SERS intenzitása lineárisan összefügg az exoszóma minták koncentrációjának logaritmusával, ami azt jelzi, hogy a kimutatási módszer jó stabilitású és közvetlenül alkalmazható a plazmában. Exoszómák kimutatása további exoszóma-izolálási lépés nélkül. Jelenleg kevés tanulmány készült a SERS technológia közvetlen alkalmazásáról exoszomális PD-L1 fehérje kimutatására, de a SERS technológia más exoszómák kimutatására való alkalmazásának kutatása már megtörtént, ami szintén fontos referencia. exoszomális PD-L1 fehérje érték kimutatására.

Sivatagi élő ciszternák növekedési helyzete

5. HOLMES-ExoPD-L1 módszer

A HOLMES-ExoPD-L1 módszer az exoszomális PD-L1 fehérje új kimutatási módszere. Ebben a módszerben egy új, PD-L1 fehérjét célzó MJ5C aptamert terveztek, amely hatékonyan képes megkötni a PD-L1 fehérjét az exoszóma membránján, és nem zavarja a PD-L1 fehérje glikozilációja. Ennél a módszernél a fluoreszcensen jelölt MJ5C aptamert és az exoszómákat először egy vékony kapillárisban együtt inkubálták, hogy egymáshoz kötődjenek, majd az infravörös lézert a vékony kapillárisba fókuszálva mikron léptékű hőmérsékleti gradienst alakítottak ki. A szabad MJ5C aptamer és az exoszomális MJ5C aptamer komplexek termoforézisének sebessége szignifikánsan különbözött, és a szabad aptamer termoforetikus kiürülése gyorsabb volt, mint az exoszóma-aptamer komplexé. elválasztva. Ezért gerjesztő fény hatására az exoszomális PD-L1 fehérje tartalma meghatározható a fluoreszcensen jelölt aptamerek fluoreszcencia intenzitásának detektálásával. A módszer nagy érzékenységgel és 17,6 pg/ml kimutatási határral rendelkezik. Emellett előnye a kisebb mintatérfogat és a rövid észlelési idő. Ez egy rendkívül eredeti módszer az exoszomális PD-L1 fehérje kimutatására, ami nagyon fontos az új kifejlesztéséhez. Az exoszomális PD-L1 fehérje kimutatási módszer felvilágosító értékű.

Daganatellenes: citanche-kiegészítő

Az exoszomális PD-L1 széles körű alkalmazási kilátásokkal rendelkezik a rosszindulatú daganatok immunterápiája területén, és az exoszómakutatások egyik hotspotjává vált. A szöveti PD-L1 expresszió detektálásához képest a keringő exoszomális PD-L1 detektálásával könnyebb a mintavétel és a valós idejű detektálás, elkerülve a patológiás mintavétel okozta szöveti heterogenitás problémáját; Az exoszomális PD-L1 tumorimmunitáshoz is vezet. Ez a szökés fontos oka, és összefügg a rosszindulatú daganatok progressziójával, és fontos indikátor lehet a betegségértékelés és a prognózis előrejelzése szempontjából. Emellett várhatóan a plazma exoszomális PD-L1 szintjeit is felhasználják az anti-PD-L1 immunterápiára alkalmas betegek szűrésére és a kezelésre adott válaszuk előrejelzésére. Azonban még mindig hiányoznak az elismert és hatékony módszerek a keringő PD-L1 exoszómák kimutatására. Ideális keringő exoszómát kell létrehozni egyszerű vagy elválasztás nélküli, kisebb mintaigénnyel, nagy érzékenységgel, jó ismételhetőséggel és kevésbé érzékeny detektálási jelekkel. Módszer a PD-L1 kimutatására in vivo. A keringő exoszomális PD-L1 kimutatási módszere még további mélyreható kutatást igényel, de úgy gondolják, hogy a jövőben új kimutatási módszerek kifejlesztésével és alkalmazásával a keringő exoszomális PD-L1 jobban tudja majd irányítani az anti-PD1 immunterápiát. és rosszindulatú daganatok diagnosztizálására és kezelésére használható. fontosabb szerepet játszanak.