Tanulmány a Cistanche Tubulosa-ból származó poliszacharid vízkivonatának elválasztásáról és immunkompetenciájáról

további information:ali.ma@wecistanche.com

Ailadan· Maimaitiaili1,LI Yang1,YAO Jun1,YUAN Jie2

（1. Gyógyszerészeti Iskola,Hszincsiang Orvostudományi Egyetem, Urumqi 830011,Kína;2. Houbo kollázsa, Hszincsiang Orvostudományi Egyetem,Hszincsiang Klamayi 834000,Kína)

ABSZTRAKT CÉLKITŰZÉS:A vízkivonat izolálásaCistanche tubulosa poliszacharidjai,és immunkompetenciájuk in vitro vizsgálata. MÓDSZEREK: AB-8 makroporózus adszorpciós gyantát használtunk a C. tubulosa poliszacharid deszínizálására. A decolorizációs folyamatot egy ortogonális teszttel optimalizáltuk, amelynek retenciós sebessége és a poliszacharid dekonizációs sebessége átfogó pontszámként, és az adszorpciós sebességet, a decolorizációs időt, a mintakoncentrációt tényezőként használva. Az ellenőrző teszteket elvégezték. A DEAE-650M ioncserélő oszlopot használtuk a deszínezett C. tubulosa poliszacharid vízkivonatának elválasztására. A CCK-8 vizsgálatot a poliszacharid különböző koncentrációinak (6,25-100 μg/ml) izolálás előtti és utáni hatásának kimutatására használtuk az egerek makrofág RAW264.7 proliferációs sebességére. Griess módszert és ELISA-vizsgálatot alkalmaztak a poliszacharid alacsony, közepes és magas koncentrációjának (12,5,25,50 μg/ml) az NO, IL-6 és TNF-α LPS által indukált RAW264.7 sejtekben való felszabadulására gyakorolt hatásának kimutatására. EREDMÉNYEK: Az AB-8 makroporózus adszorpciós gyanta optimális színtelenítési folyamatában az adszorpciós áramlási sebesség 1,2 BV/h volt, a decolorizációs idő 9 óra volt, a mintakoncentráció pedig 25 mg/ml volt. Az ellenőrző tesztek 3-szorosának átfogó pontszáma 63,43% volt, 63,29% és 63,34%, átlagosan 63,35% (RSD = 0,11% , n = 3). Egy semleges poliszacharidot (CTZ) és 5 savat poliszacharidot (CT1,CT2,CT3,CT4,CT5)izoláltunk a C. cistanche poliszacharidjából, a tartalom 299,2 168,0,123,2,121,6,54,4,11,2 mg/g volt. A kontrollcsoporttal összehasonlítva,6,25-100 μg/ml CTZ (kivéve 6,25 μ g/ml), a CT2,CT4,CT5 és a 6,25 μ g/ml CTC (a szétválasztás előtti poliszacharid) jelentősen növelheti a RAW264,7 sejtek proliferációs sebességét (P<0,05), míg="" a="" 6,25-100="" μg/ml="" ct1,ct3="" és="" 50="" μg/ml="" ctc="" csökkentheti="" a="" raw264,7="" sejtek="" proliferációs="" sebességét=""><0,05). az="" lps-csoporthoz="" képest="" a="" no="" felszabadulása="" jelentősen="" csökkent="" a="" ctc,ct2,ct3="" és="" ct5,ctz="" alacsony="" koncentrációjú="" csoport=""><0,05) alacsony,="" közepes="" és="" magas="" koncentrációs="" csoportjaiban,="" míg="" a="" ct1="" és="" a="" ct4=""><0,05) magas="" koncentrációs="" csoportjaiban="" jelentősen="" megnövekedt="" a="" no="" felszabadulása.="" az="" il-6="" (a="" ct1="" nagy="" koncentrációs="" csoport="" és="" a="" ct5="" alacsony="" koncentrációjú="" csoport="" kivételével)="" és="" a="" tnf-α="" (a="" ct1="" közepes="" koncentrációs="" csoport="" kivételével)="" kibocsátása="" jelentősen="" csökkent="" az="" alacsony,="" közepes="" és="" magas="" koncentrációs="" csoportokban=""><0,05). következtetések:="" a="" makroporózus="" adszorpciós="" gyanta="" optimalizált="" színtelenítési="" technológiája="" stabil="" és="" megvalósítható="" a="" vizsgálatban.="" egy="" semleges="" poliszacharid="" és="" 5="" savas="" poliszacharid="" izolálható="" a="" c.="" tubulosa="" poliszacharidok="" vízkivonatából,="" amelyek="" közül="" a="" ct2="" poliszacharid="" erősebb="" gyulladáscsökkentő="" képességgel="">

KULCSSZAVAK:Cistanche tubulosa poliszacharid; deszínezés;elválasztás;immunkompetencia

Cistanche tubulosaegy száraz, húsos szár, pikkelyes levelekkelCistanche tubulosa (Schenk) Wighta Lidanaceae családból. A modern tanulmányok kimutatták, hogy a Cistanche Tubula fenetil-alkohol-glikozidokat, iridoid-glikozidokat, lignánokat, poliszacharidokat, alkaloidokat és más biológiailag aktív anyagokat tartalmaz, amelyek afrodiziákum, hashajtó, májvédő és öregedésgátló tulajdonságokkal rendelkeznek. , A fáradtság elleni fokozott immunitás és a nootróp hatások [1-4] alkalmazhatók a vese yang hiányának, az esszencia és a vér hiányának, az impotencia és a meddőség, a derék és a térd gyengesége, az izmok és csontok gyengesége, a száraz belek és a székrekedés klinikai kezelésére [5].

Kattintson a Cistanche herba termékekre

A vízkivonat aCistanche tubulosa poliszacharidbarnás-sárga. Kutatócsoportunk korábbi kísérlete megállapította, hogy aCistanche tubulosa poliszacharid, a vízkivonat nem célkomponenseket, például vízben oldódó pigmenteket és fehérjéket is tartalmaz. Ez hozzájárul a poliszacharidok elválasztásához és tisztításához. A biológiai aktivitás kutatása nagy nehézségeket okozott. A hagyományos szerves oldószeres decolorizációs kezelés elpusztítja a nyers kivonat célkomponensének kémiai szerkezetét, csökkenti a személy farmakológiai aktivitását, valamint a káros összetevőknek az emberi szervezetbe történő bevezetését [6]. A makroporózus adszorpciós gyanta gyakori anyag a poliszacharidok deszínizálására a kínai gyógyszerkivonatokban. Ez egy költséghatékony polimer adszorpciós anyag, stabil fizikai és kémiai tulajdonságokkal. A pigmentkomponensek szelektív adszorpciós és szitálási teljesítményével célozható meg. A hagyományos kínai orvoslás kivonataiban lévő pigmentek eltávolítására továbbá pácolással és alkálimosással regenerálható, ezért széles körben használják [7]. Ez a tanulmány makroporózus adszorpciós gyantát kíván használni a Cistanche Tubula poliszacharid vízkivonatának dekonterizálására, és ortogonális kísérletet kíván használni a decolorizációs körülmények optimalizálására; a kivonat deszíneződése után, a poliszacharid által hordozott csoport eltérő jellegének megfelelően, felhasználásra kerül sor Az ioncserélő oszlopkromatográfia módszere tovább választja el a semleges és savas poliszacharid komponenseket aCistanche tubulosa.

Tanulmányok kimutatták, hogycistanche növénya poliszacharidok immunmoduláló hatásúak, és természetes immunmodulátorok, amelyek aktiválhatják a komplementrendszert és az immunsejteket, például a T/B limfociták, makrofágok, természetes gyilkos (NK) sejteket, és elősegíthetik a citokinek különböző felszabadulását, és elősegíthetik az antitestek termelését stb. [8-11]. A lipopoliszacharid (LPS) aktiválhatja a makrofágok gyulladásos jelútját, nitrogén-oxidot (NO) és gyulladáscsökkentő citokineket, például interleukin 6-ot (IL-6) és tumor nekrózis faktor-alfa -t (TNF-α) indukálhat. Szintézis és felszabadulás, ezáltal gyulladásos reakciók sorozatát váltja ki a szervezetben [12]. Ez a tanulmány egy LPS által kiváltott egér RAW264.7 makrofág gyulladási modellt kíván létrehozni, kezdve a Cistanche Tubula poliszacharid makrofág proliferációra, gyulladásos faktor szekrécióra és NO termelésre gyakorolt hatásaiból, valamint a szervezet immunaktivitására gyakorolt hatásának előzetes értékeléséből Célja, hogy elméleti alapot biztosítson a gyulladáscsökkentő hatóanyag alapjainak mélyreható tanulmányozásáhozCistanche tubulosapoliszacharid és poliszacharid erőforrásainak fejlesztése.

Az előzetes vizsgálatok azt találták, hogy amikor a Cistanche cistanche-ban lévő poliszacharidokat vízzel extraháljuk, több vízben oldódó anyag oldódik fel együtt, ami befolyásolja acistanche cistanche poliszacharidok. Ezért ezek további szétválasztása és tisztítása megalapozhatja a poliszacharid anyagalap és a biológiai aktivitás tanulmányozását. A makroporózus adszorpciós gyanta módszer egy általánosan használt decolorizációs módszer [17-19]. Mivel még mindig nem világos a pigmentösszetétel aCistanche tubulosa, így a kutatócsoport statikus adszorpciós kísérleteket használt a legmegfelelőbb makroporózus AB-8 adszorpciós gyanta szűrésére különböző polaritású makroporózus adszorpciós gyantákból. A Cistanche deserticola poliszacharidja jó megtartási képességgel rendelkezik. A jobb decolorizációs hatás elérése érdekében ez a kutatás a korábbi kutatásokon alapul, és ortogonális kísérleteket használt a decolorizációs folyamat meghatározására (mosás A deszorpciós áramlási sebesség, a decolorizációs idő és a minta tömegkoncentrációja) optimalizálására került sor. Ennek eredményeként a Cistanche tubulosa poliszacharidjának optimális decolorizációs módszere 1,2 BV/h elúciós áramlási sebesség, 9 órás decolorizációs idő és 25 mg/ml mintatömeg-koncentráció volt. Az ellenőrzési kísérlet eredményei azt mutatják, hogy a színtelenítési módszer megvalósítható.

A természetes poliszacharidok tisztasága és típusa fontos tényezők, amelyek befolyásolják annak aktivitását. Ezért a poliszacharidok izolálási és tisztítási módszereivel kapcsolatos releváns kutatások továbbra is a természetes aktív poliszacharidok kutatási munkájának középpontjában állnak. A poliszacharidok elválasztására általánosan használt módszerek közé tartozik a kicsapódás, a gélkromatográfia, az anioncserélő kromatográfia, a makroporózus gyantaoszlop-kromatográfia és az ultraszűrés [20]. A monoszacharidok különböző összetétele miatt a poliszacharidok különböző töltési tulajdonságokkal rendelkeznek. Ezek semleges poliszacharidokra és savas poliszacharidokra oszthatók. A semleges poliszacharidok olyan polimerek, amelyek két vagy több különböző cukoralapú monomerből állnak, amelyek nem tartalmaznak szerves savakat. A savas poliszacharidok összetételüket és szerkezetüket tekintve összetettebbek, mint a semleges poliszacharidok, kivéve, ha kettőnél több cukoralapú monomert tartalmaznak. , Uronsav mono testet is tartalmaz [21]. Az anioncserélő oszlopkromatográfia a poliszacharidok töltésének különbségét használja a semleges poliszacharidok savas poliszacharidoktól való elválasztására [22]. Ezért ez a tanulmány egy DEAE-650M ioncserélő oszlopkromatográfiás oszlopkromatográfiás oszlopot használt a Cistanche Tubula poliszacharidok elválasztására, és összesen 1 semleges poliszacharidot és 5 savas poliszacharidot választottunk szét. A makrofágok immunkompetens sejtek, amelyek a patogén mikroorganizmusok elnyelésével és elpusztításával szabályozhatják az immunitást. Tanulmányok kimutatták, hogy amikor az emberi testet patológiás vagy mechanikai károsodások stimulálják, a gyógyszeres beavatkozás aktiválhatja a makrofágokat az LPS által kiváltott makrofágok fagocita kapacitásának növelése érdekében, ezáltal gátolva a NO és egy sor gyulladásos sejt, például az IL-6 és a TNF-α Faktor szekréció termelését, ezáltal védve a gazdaszervezetet a kórokozóktól [23]. Ebből a célból ez a tanulmány tesztelte a különböző Cistanche tubulosa poliszacharidok hatását a RAW264.7 sejtek proliferációs sebességére, valamint az LPS által kiváltott makrofágokra gyakorolt hatásokat, hogy NO, IL-6 és TNF-α szabaduljanak fel. Ennek eredményeként a 12,5, 25 és 50 μg/ml tömegkoncentrációs tartományon belül nemcsak a RAW264,7 sejtek proliferációját segítette elő, hanem jelentősen gátolta a RAW264,7 sejtek proliferációját is.

ACistanche tubulosa poliszacharidjaaz LPS által a NO felszabadítására indukált RAW264.7 sejtekben az IL-6 és a TNF-α CT2. A vonatkozó tanulmányok kimutatták, hogy a poliszacharidok monoszacharid összetétele és molekulatömege befolyásolja aimmunmodulálótevékenység. A monoszacharidok, például a galaktóz, az arabinóz, a mannóz és a glükóz pozitívan korrelálnak a poliszacharidok immunaktivitásával [24]. A nagyobb molekulatömegű poliszacharidok nagyobb többszörösen ismétlődő csomókat tartalmazhatnak Szerkezet, képes többirányúan és konkrétan átkötni a plazmamembrán felületi receptoraitfokozza az immunmodulálóthatás [25]. Ezért a CT2 savas poliszacharid monoszacharid összetétele ebben a vizsgálatban tartalmazhat speciális monoszacharidokat vagy több monoszacharidot, amelyek pozitívan kapcsolódnak az immunaktivitáshoz, és a molekulatömeg nagyobb lehet, mint a semleges poliszacharidok és más savas poliszacharidok, de további kutatásokra van szükség a megerősítéshez. Összefoglalva, az optimalizált makroporózus adszorpciós gyanta decolorizációs folyamat ebben a kutatásban stabil és megvalósítható; 1 semleges poliszacharid és 5 savas poliszacharid elválasztható a Cistanche cistanche cistanche vízkivonatától, amelyek közül a CT2 Stronger sav-poliszacharid immunológiai aktivitása. Ez a tanulmány megalapozhatja a Cistanche Tubula poliszacharidok kifejlesztését és felhasználását.