Vita

Az idősödő népesség továbbra is példátlan ütemben növekszik világszerte. Az öregedés a sejtfunkciók hanyatlásával, a károsodások felhalmozódásával és a krónikus betegségek növekvő valószínűségével jár, amelyek a rendszerek összeomlásához és végső halálhoz vezetnek [3–7]. Az életkorral összefüggő patológiák késői előfordulása jelentős hatással van az életminőségre és az egészségügyi költségekre. Ezért sürgősen szükség van olyan hatékony öregedésgátló hatású beavatkozásokra, amelyek geroprotektorként használhatók az öregedés késleltetésére és az egészségi állapot meghosszabbítására.

A cisztanche glikozidja növelheti az SOD aktivitását a szív- és májszövetekben, és jelentősen csökkentheti az egyes szövetek lipofuscin- és MDA-tartalmát, hatékonyan megkötve a különböző reaktív oxigéngyököket (OH-, H2O₂ stb.) és megvédheti az okozott DNS-károsodást. OH-gyökök által. A Cistanche feniletanoid glikozidok erős szabad gyökfogó képességgel rendelkeznek, nagyobb redukáló képességgel rendelkeznek, mint a C-vitamin, javítják a SOD aktivitását a spermiumszuszpenzióban, csökkentik az MDA-tartalmat, és bizonyos védő hatást fejtenek ki a spermium membrán működésére. A cistanche poliszacharidok fokozhatják a SOD és a GSH-Px aktivitását a D-galaktóz által okozott kísérletileg öregedő egerek eritrocitáiban és tüdőszöveteiben, valamint csökkenthetik a tüdő és a plazma MDA- és kollagéntartalmát, valamint növelhetik az elasztintartalmat. jó eltávolító hatás a DPPH-ra, meghosszabbítja a hipoxia idejét öregedő egerekben, javítja a SOD aktivitását a szérumban, és késlelteti a tüdő fiziológiás degenerációját kísérletileg öregedő egerekben A sejtmorfológiai degenerációval a kísérletek kimutatták, hogy a Cistanche jó antioxidáns képességgel rendelkezik és potenciálisan gyógyszer lehet a bőröregedési betegségek megelőzésére és kezelésére. Ugyanakkor a Cistanche-ban található echinakozid jelentős mértékben képes megkötni a DPPH szabad gyököket, és képes megkötni a reaktív oxigénfajtákat, és megakadályozza a szabad gyökök által kiváltott kollagén lebomlását, valamint jó helyreállító hatással van a timin szabad gyökök anionjainak károsodására.

Kattintson a Cistanche termékek kiskereskedelmi beszerzéséhez

【További információ: david.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

A sejtek öregedését egymással összefüggő összetett biológiai folyamatok hálózata szabályozza [8, 9]. A legújabb tanulmányok kimutatták, hogy az öregedési biológiai folyamatokba való beavatkozás jelentősen megnövelheti a modellszervezetek, köztük az emlősök egészséges élettartamát [10, 14]. A bimbózó élesztő kronológiai öregedése A Saccharomyces cerevisiae a jól bevált modellrendszer a humán posztmitózisos sejtöregedés beavatkozásainak meghatározására [16–19].

Kifejlesztettünk egy új, gyors és olcsó kvantitatív módszert, a PICLS-t a CLS mérésére, (1) élesztősejtekkel, amelyeket tápközeggel és tesztvegyületekkel inkubáltunk átlátszó 96-lyukú lemezeken; (2) a fluoreszcens festék propidium-jodid (PI), egy sejt impermeáns, amely csak az elhalt sejtekbe jut be [23–25]; és (3) mikrolemez-leolvasó a sejttúlélés kvantitatív leolvasásához. Megjegyezzük, hogy a sejtsűrűség (és a sejtnövekedés) mérése OD600 nm-en ugyanarról a lemezről is elvégezhető. A 96-lyukú lemezeken lévő elhalt élesztősejtek esetében magas lineáris korrelációt találtunk a PI fluoreszcencia és az OD600 nm abszorbancia között egy 0,05–12 OD-nak megfelelő optimális sejtsűrűség-tartományon belül. Ez a módszertani megközelítés felhasználható a sejtek életképességének mennyiségi meghatározására nagy áteresztőképességű vizsgálatokban.

A PICLS-hez számos fontos újítás kapcsolódik: (i) A PICLS jelenleg az egyetlen kinövésmentes módszer a CLS számszerűsítésére. Egy kritikus idő- és erőforrásigényes lépést levágtak a protokollból, és így a PICLS az első igazi nagy teljesítményű szűrés (HTS) a kémiai anyagok és a tenyésztési feltételek tekintetében a CLS méréshez. (ii) A PICLS mögött meghúzódó módszertani ötlet általában lemezalapú módszerként fogalmazható meg, ahol (a) az elhalt/túlélő sejtek hányadát és (b) a sejtek teljes mennyiségét közvetlenül egyidejűleg határozzák meg ugyanarról a lemezről optikai intenzitással. mérőeszköz (az általánosan elérhető lemezolvasó). Ebben a munkában 96-lyuklemezeket használtunk, de a 384-lyuklemezek is alkalmazhatónak tűnnek (a tenyésztés kisebb mennyisége miatt valószínűleg némileg csökkent az érzékenység). Bármilyen színezőanyag használható, amely megkülönbözteti az elhalt és a túlélő sejteket, és amely fluoreszcenciával vagy abszorpcióval rendelkezik egy olyan csatornában, amely nem zavarja az általános sejtsűrűség mérést (pl. OD600 nm-en történő abszorpció révén). Propidium-jodidot alkalmaztunk, amely szelektíven megjelöli az elhalt sejteket, de ez nem kritikus a PICLS szempontjából.

7. ábra A 2,5-anhidro-D-mannit analógok hatásának tesztelése az élesztő kronológiai élettartamára. A prototróf élesztőtörzset (CEN.PK113-7D) 2,5-vízmentes-Dmannit (2,5-AM), D-fruktóz különböző koncentrációjú, szintetikusan meghatározott tápközegben tenyésztettük. , D-mannit, D-maltóz és D-szorbit 96-lyuklemezeken 30 fokon. A sejtnövekedés OD600 nm-ét különböző időpontokban, 24, 48 és 72 órában mértük mikrolemez-leolvasóval, és grafikont ábrázoltunk a 2,5-AM, fruktóz, mannit, maltóz és szorbit különböző koncentrációi függvényében. B A különböző koncentrációjú 2, 5-AM, fruktóz, mannit, maltóz és szorbit sejtek kronológiai élettartamát (CLS) propidium-jodid fluoreszcencia alapú módszerrel határoztuk meg. A sejtek túlélését különböző kronológiai életkorokban számszerűsítettük, és a 72 órás növekedési időpontot az 1. napnak tekintettük. C Az elöregedett sejtek CLS-jét kinövés módszerrel határoztuk meg YPD folyékony tápközegben. A 72 órás növekedési időpontot az 1. napnak tekintettük. Különböző időrendi pontoknál egy 3-μL tenyészetet átvittek egy második 96-lyukú lemezre, amely 200 μL YPD táptalajt tartalmazott. A kinövés OD600nm-ét YPD folyékony tápközegben mértük 24 órás, 30 fokos inkubálás után mikrolemez-leolvasóval. A grafikont az 1. naphoz viszonyítva ábrázoltuk. D Egy 96-üregű lemez YPD folyékony tápközegében lévő kinövést fényképeztük le 24 órás, 30 fokos inkubálás után. E Különböző kronológiai korpontokban 3-μL tenyészeteket észleltek az YPD agarlemezen. A kinövést 48 órás, 30 fokos inkubáció után fényképeztük le. Minden adat átlag±SD.; *P<0.05, **P<0.01, and  ****P<0.0001 based on two-way ANOVA followed by Dunnett's multiple comparisons tests (B and C). n.s, non-significant 

Megjegyezzük, hogy a fekete mikrolemezek általában ajánlottak a fluoreszcencia vizsgálatokhoz, mivel ez az anyag részben kioltja az autofluoreszcenciát. A módszert azonban átlátszó mikrolemezeken értékeltük, és hasonló hatékonyságot találtunk, mint a fekete mikrolemezeknél. Mivel a fekete mikrolemezek magas költségekkel járnak, ez jelentős előnyt jelent a nagyszabású, nagy áteresztőképességű szűrési projekteknél.

Kifejlesztett módszerünket ismert öregedésgátló beavatkozásokkal, például rapamicin adagolással és kalóriakorlátozással validáltuk [10–16] az élesztőgomba CLS-ére gyakorolt ​​hatásuk reprodukálásával. Ezek az eredmények arra utalnak, hogy módszerünk hatékony az új öregedésgátló beavatkozások azonosítására. Kihasználtuk az újonnan kifejlesztett protokollunkat a vegyi anyagok szűrésére új öregedésgátló vegyületek azonosítására (8. ábra). Azonosítottuk az élesztő CLS-jét kiterjesztő 2,5-anhidro-D-mannitot (2,5-AM). Eredményeink alapján a hajnali 2,5-éjszaka használatát javasoljuk egyénileg vagy más öregedésgátló beavatkozásokkal kombinálva.

2,5-AM a fruktóz analógja, és mindkét cukor bejuthat a glikolitikus folyamatba. A glikolízis egy olyan anyagcsere-folyamat, amelyben a glükózt először hexokináz foszforilálja glükóz-6-foszfáttá (G6P). A foszfoglükoizomeráz a G6P-t fruktóz-6-foszfáttá (F6P) alakítja át, amely tovább metabolizálódik különböző downstream glikolitikus intermedierekké, beleértve a mitokondriális TCA-ciklusba belépő piruvátot. A glükózhoz hasonlóan a fruktózt is a hexokináz foszforilezi, és F6P-t képez. A foszfofruktokináz az F6P-t fruktózzá-1,6-biszfoszfáttá (FBP) alakítja, amely tovább metabolizálódik különböző downstream glikolitikus intermedierekké. 2,5-AM-ot hexokináz is foszforilálhat 2,5-AM- 6-foszfáttá (2,5-AM6P) [39–41]. Ezenkívül a foszfofruktokináz a 2,5-AM6P-t 2,5-AM- 1,6-biszfoszfáttá (2,5-AMBP) alakítja. A 2,5-AMBP azonban nem metabolizálható tovább downstream glikolitikus intermedierekké [39–41].

Mivel a 2,5-AM egy fruktóz analóg, megvizsgáltuk, hogy a fruktóz meghosszabbíthatja-e az élesztő élettartamát. Azonban nem figyeltük meg a fruktóz öregedésgátló hatását az élesztő CLS-jének kiterjesztésében. A mannit és a maltóz szintén glikolízisbe kerülhet, és lefelé irányuló glikolitikus intermedierekké metabolizálódhat. Megvizsgáltuk továbbá a mannit és a maltóz hatását az élesztő élettartamára. A fruktóz, a mannit és a maltóz sem képesek meghosszabbítani az élesztő CLS-jét.

Mivel a szorbit, egy másik, még nem metabolizálódott cukorról korábban beszámoltak arról, hogy nagyon magas koncentrációban (18 százalék 1 M-nek egyenértékű) befolyásolja a CLS-t [20, 45], ezért tisztázni kívántuk, hogy a 2,{{7 }}Az AM oka lehet a táptalaj megnövekedett ozmolaritása. Kísérleteink azt mutatták, hogy a szorbit nem képes növelni az élesztő CLS-ét olyan alacsonyabb koncentrációkban, amelyek hatékonyak 2,5- AM esetén. Mivel a szorbit magasabb koncentrációt igényel az élesztő CLS-jének növeléséhez, a 2,5-AM öregedésgátló mechanizmusa független az ozmolaritási hatásoktól. Ezek az eredmények felfedték, hogy a 2,5-AM öregedésgátló hatása specifikus, és nincs párhuzamban számos más, hasonló kémiai szerkezetű analóggal.

Azt azonban még vizsgálni kell, hogy a 2,5-AM hogyan hosszabbítja meg az élettartamot. Érdekes lesz megvizsgálni, hogy a 2,5-AM közvetlenül modulálja-e az öregedési bélyegeket [8]. A TORC1 és az AMPK az öregedési folyamatban részt vevő glükóz-érzékelő komplexek [32, 43]. A TORC1 gátlásával meghosszabbított időrendi élettartam azonban csökken, ha az AMPK gátolt. A glükóz és a glikolitikus intermedierek szabályozzák a TORC1 és az AMPK aktivitását [34, 46, 47]. 2,5-Az AMBP-ről kimutatták, hogy gátolja az aldoláz aktivitását, amely katalizálja az FBP glicerinaldehid-3-foszfáttá (G3P) és dihidroxiaceton-foszfáttá (DHAP) való átalakulását [39, 40]. A DHAP a trioszfoszfát izomeráz hatására G3P-vé alakul át. A legújabb bizonyítékok arra utalnak, hogy a DHAP a fontos glükóz szignálmolekula, amely aktiválja a TORC1-et [48].

A glikolitikus fux veszélybe kerül, ha a G3P és a DHAP szintézis befolyásolja, ami csökkenti az ATP-termelést. Érdekes módon az AMPK akkor aktiválódik, amikor a sejtek energiaállapota károsodik, és a TORC1 gátlásával gátolja a sejtnövekedést [46, 47]. Így az AMPK és a TORC1 antagonista kapcsolata hatékony metabolikus adaptációt jelent, hogy biztosítsa a sejtes homeosztázis egyensúlyát az egészséges sejtek számára. Bár nem figyeltük meg a 2,5-AM hatását a sejtnövekedésre (6. és 7. ábra). Ezek az eredmények kizártak minden olyan glükóz restrikciós hatást, amely veszélyeztette a sejtnövekedést (5. ábra), azonban lassú növekedési fenotípus esetén meghosszabbította az élettartamot [49]. Az élettartam rapamicinnel történő meghosszabbítása azonban nem igényel nagyobb dózist, mint amennyi a sejtnövekedést veszélyezteti (4. ábra). Ezért nem zárhatjuk ki a TORC1/AMPK-n keresztül vagy a TORC1/AMPK-tól függetlenül 2,{14}}AM-os öregedésgátló aktivitás lehetőségét.

A 2,5-AMBP aldolázt gátló hatásától eltérően a jelentések szerint aktiválja a piruvát-kinázt, az utolsó glikolízis enzimet [39–41]. A piruvát-kináz katalizálja a foszfoenolpiruvát piruváttá történő átalakulását, amely a NAD plus (nikotinamid-adenin-dinukleotid) előállításának egyik forrása. A NAD plus egy fontos metabolit, amely számos sejtfolyamatot és funkciót szabályoz, amelyek kritikusak az egészséges sejtek fenntartásához és az élettartam meghosszabbításához [50, 51]. A piruvát a mitokondriális reakciók fő szubsztrátja is, amelyek során különféle építőelemek metabolitjai képződnek a létfontosságú elemek, köztük aminosavak, nukleinsavak és ATP szintéziséhez, alapvetően a sejtek túléléséhez és egészséges öregedéséhez [52–55]. Valójában a mitokondriális aktivitás csökkenése az öregedéssel és az életkorral összefüggő betegségekkel jár [53–56]. A közelmúltban a 2,{12}}AM potenciális terápiás szert javasoltak az akut mieloid leukémia (AML) rák kezelésére [57].

Mellékes megjegyzésként az új módszerünket PICLS-nek (PI-alapú CLS-módszer) neveztük el, szem előtt tartva a szójátékot "pickles". Míg az új protokollunk minden elemét külön-külön már leírtuk máshol, „fermentált” kombinációjuk egyszerűvé és olcsóvá teszi a mérést, végül pedig nagy áteresztőképességűvé.

Összefoglalva, kvantitatív módszert dolgoztunk ki az élesztő kronológiai élettartamának mérésére, és a 2,5-AM-ot új öregedésgátló vegyületként azonosítottuk. Jelenleg folyamatban van egy tanulmány a 2,5-AM öregedésgátló hatásának mechanizmusainak vizsgálatára.

Anyagok és metódusok

Élesztőtörzs, táptalaj és vegyszerek

Ebben a vizsgálatban a prototróf CEN.PK113-7D törzs genetikai hátterét használtuk [35, 36]. Szabványban gazdag tápközeg YPD (1% Bacto élesztőkivonat, 2% Bacto pepton és 2% glükóz), YPD agar (2,5% Bacto agar) és 6,7 g/l élesztő nitrogénbázist tartalmazó szintetikus (SD) táptalaj ammónium-szulfáttal aminosavak (DIFCO) és 2 százalék glükóz nélkül. A rapamicin (Enzo) törzsoldatot dimetil-szulfoxidban (Sigma) készítettük. A DMSO végső koncentrációja egyetlen vizsgálatban sem haladta meg az 1 százalékot. 2,5-Anhidro-D-mannit (Santa Cruz), D-fruktóz (Sigma), D-mannit (Sigma), D-maltóz (Sigma) és D-szorbit (Sigma) munkakoncentrációk frissen elkészítve a port közvetlenül feloldja a tápközegben, és szűrővel sterilizálja.

Az élesztő növekedésének feltételei

Az élesztőtörzset fagyasztott glicerin törzsből nyertük ki YPD agar táptalajon 30 fokon. Az élesztőt SD tápközegben tenyésztettük egy éjszakán át 30 fokon 220 fordulat/perc rázatással. Az egy éjszakán át növesztett sejteket OD600nm~0,2-re hígítottuk friss SD tápközegben, hogy elindítsuk a kronológiai élettartam-kísérleteket.

Időrendi élettartam elemzés

A kronológiai élettartam (CLS) kísérleteket {{0}}lyukú lemezeken végeztük, összesen 20{{10}} µL élesztőtenyészettel a korábban leírtak szerint [58]. A sejtes oltóanyagot egy 96-lyuk lemezre vittük, amely sorozatban kétszer hígított koncentrációban (0-10 nM) rapamicint tartalmazott. A kalória restrikciós vizsgálathoz sejtes inokulumokat állítottunk elő 2 százalék, 0,5 százalék és 0,25 százalék glükózt tartalmazó SD táptalajban, és átvittük 96-lyukú lemezekre. Hasonlóképpen, a sejtes oltóanyagot átvitték a 96-lyuk lemezekre, amelyek sorozatban kétszer hígított koncentrációban (0-8 mM) tartalmaztak 2,5-anhidro-D-mannitot, D-fruktózt, D-mannitot, D-maltóz és D-szorbit. A sejteket 30 °C-on inkubáltuk, és a növekedést különböző időpontokban mértük. A 72 órás növekedési időpontot az 1. napnak tekintettük a CLS vizsgálatban. A sejtek túlélését különböző életkori időpontokban három különböző megközelítéssel határoztuk meg: (i) propidium-jodid fluoreszcencia alapú módszer, (ii) kinövés YPD folyékony tápközegben és (iii) foltosodási teszt.

i) Propidium-jodid fluoreszcencia alapú módszer:A propidium-jodid (PI) fluoreszcencia alapú megközelítés kidolgozásának részletes eljárásait az eredmények részben említjük. A CLS-teszthez {{0}}µl élesztősejteket különböző korú időpontokban helyeztünk át egy második 96-lyuk lemezre. A sejteket mostuk, és 100 µl 1×PBS-ben PI-vel (5 µg/ml) inkubáltuk 15 percig sötétben. A kvantitatív elemzéshez pozitív és negatív minták kontrolljait is bevontuk. A pozitív kontrollt (a sejteket 100 fokon 15 percig forraltuk) PI-vel festettük, és ugyanabban a 96-lyukú lemezben dolgoztuk fel. A PI-festett sejteket nem tartalmazó minták negatív kontrollként szolgáltak. Inkubálás után a sejteket mostuk, és 100 µl PBS-ben újraszuszpendáltuk. A minta fluoreszcenciáját (gerjesztés 535 nm-en, emisszió 617 nm-en) és OD600 nm-ét mikrolemez-leolvasóval (BioTek) mértük. Az egyes minták fluoreszcencia intenzitását OD600 nm-rel normalizáltuk. Az egyes minták normalizált fluoreszcencia intenzitását kivontuk a festetlen negatív minta háttérjeléből. A pozitív kontrollminta (főtt elhalt sejtek) kapott fluoreszcencia intenzitását 0 százalékos sejttúlélésnek tekintettük. Megerősítettük a sejt pusztulását, lehetővé téve a sejt növekedését a tápközegben. A sejtek túlélését o különböző korú időpontokban mintákban számítottuk, a fluoreszcencia intenzitását pozitív kontrollmintával (főtt sejtek) normalizálva.

ahol Iij(535nm∕617nm) a lyukon mért fluoreszcens intenzitás i és j lemezkoordinátákkal 535 nm-en gerjesztés és 617 nm-es emisszió mellett, ID(535nm∕617nm) a fluoreszcencia intenzitása 10 százalékos sejthalál esetén PI-vel festett sejtek, IC(535nm∕617nm) a PI nélküli sejtekre mért fluoreszcens intenzitás, a megfelelő OD értékek pedig a megfelelő sejteknél mért abszorpciót 600 nm-en, normalizálva a sejtek számát.

ii. kinövés YPD folyékony tápközegben:Különböző korú élesztőtenyészetet (3-μL) átvittünk egy második 96-lyukú lemezre, amely 200 µl YPD táptalajt tartalmazott, és 24 órán át 30 fokon inkubáltuk. Az elöregedett sejtek kinövését (OD600nm) a mikrolemez-leolvasóval mértük. A sejttúlélés számszerűsítését minden életkori pontban az 1. naphoz viszonyítva határoztuk meg (ezt 100 százalékos sejttúlélésnek tekintik), a korábban leírtak szerint [19, 20, 58].

iii. Foltosodási vizsgálat:Élesztő stacionárius tenyészetet (3 μL) különböző korú időpontokban foltoztunk az YPD agarlemezre, és 48 órán keresztül 30 fokon inkubáltuk. Az YPD agarlemezen elöregedett sejtek kinövését BioRad GelDoc képalkotó rendszerrel fényképeztük le.

Adatelemzés

Az összes eredmény statisztikai elemzése, például az átlagérték, a szórások, a korreláció (R2), a szignifikancia és a grafikon ábrázolása a GraphPad Prism v.9.3.1 szoftverrel történt. Az eredményeket statisztikailag összehasonlították a közönséges egytényezős ANOVA és a kétutas ANOVA segítségével, majd többszörös összehasonlítással Dunnett post hoc tesztjével vagy Sidak post hoc tesztjével. Az összes grafikonon a P értékek *P-ként jelennek meg<0.05,  **P<0.01, ***P<0.001, and ****P<0.0001 were considered significant. n.s, non-significant.

KöszönetnyilvánításA szerző MA ​​és FE két szabadalmi bejelentés (10202201534P és 10202201536U) feltalálói, amelyek a jelen cikkben ismertetett munka egy részét tartalmazzák.

Szerzői hozzájárulásAz MA kidolgozta a projektet, elvégezte a kísérleteket és elemezte az adatokat. Az FE közösen kitalálta a projektet, kiértékelte az adatokat, és stratégiát dolgozott ki. Az MA és az FE írta a dolgozatot, és minden szerző áttekintette a dolgozatot, és beleegyezett a végleges változatba.

FinanszírozásEzt a munkát a Bioinformatikai Intézet (BII), az A*STAR Karrierfejlesztési Alap (C210112008) és a Global Healthy Longevity Catalyst Awards pályázat (MOH-000758–00) támogatta.

Nyilatkozatok

Versengő érdekekA szerzők nem nyilatkoznak egymással versengő érdekekről.

Nyílt hozzáférésűEz a cikk a Creative Commons Nevezd meg 4.{1}} Nemzetközi Licenc, amely lehetővé teszi a felhasználást, megosztást, adaptálást, terjesztést és reprodukálást bármilyen médiában vagy formátumban, feltéve, hogy megfelelő elismerést ad az eredeti szerző(k)nek. ) és a forrás, adjon meg egy hivatkozást a Creative Commons licenchez, és jelezze, ha változtatásokat hajtottak végre. A cikkben szereplő képek vagy egyéb harmadik féltől származó anyagok a cikk Creative Commons licencébe tartoznak, hacsak az anyag hitelkeretében másként nem szerepel. Ha az anyag nem szerepel a cikk Creative Commons licencében, és az Ön tervezett felhasználását a törvényi szabályozás nem teszi lehetővé, vagy meghaladja a megengedett felhasználást, akkor közvetlenül a szerzői jog tulajdonosától kell engedélyt kérnie.

Hivatkozások

1. das nações Unidas, O. Egyesült Nemzetek Szervezete, Gazdasági és Szociális Ügyek Minisztériuma, Népesedési Osztály (2019). World Population Prospects, Highlights (ST/ESA/SER.A/423). 2019.

2. Robine J. Öregedő népesség: hosszabb életet élünk, de egészségesebbek vagyunk? Egyesült Nemzetek Szervezete, Gazdasági és Szociális Ügyek Minisztériuma, Népesedési Osztály, UN DESA/POP/2021/TP/NO. 2. (2021).

3. Niccoli T, Partridge L. Az öregedés mint betegségek kockázati tényezője. Curr Biol. 2012.

4. Hou Y és mtsai. Az öregedés, mint a neurodegeneratív betegségek kockázati tényezője. Nat Rev Neurol. 2019.

5. Harman D. Az öregedési folyamat: A betegségek és a halálozás fő kockázati tényezője. Proc Natl Acad Sci US A. 1991.

6. Partridge L, Deelen J, Slagboom PE. Szembenézni az öregedés globális kihívásaival. Természet. 2018.

7. Fontana L, Kennedy BK, Longo VD. Orvosi kutatás: az öregedés kezelése. Természet. 2014.

8. López-Otín C, Blasco MA, Partridge L, Serrano M, Kroemer G. Az öregedés jellegzetességei. Sejt. 2013.

9. Kennedy BK, et al. Geroscience: Az öregedés és a krónikus betegségek összekapcsolása. Sejt. 2014.

10. Partridge L, Fuentealba M, Kennedy BK. Az öregedés lassítása a gyógyszerkutatás révén. Nat Rev Drug Discovery. 2020.

11. Mattison JA, et al. A kalóriakorlátozás javítja a rhesusmajmok egészségét és túlélését. Nat Commun.

12. Bitto A et al. Az átmeneti rapamicin-kezelés növelheti a középkorú egerek élettartamát és egészségi állapotát. Elife. 2016.

13. Fontana L, Partridge L. Az egészség és a hosszú élettartam előmozdítása étrenden keresztül: a modellszervezetektől az emberekig. Sejt. 2015.

14. Zhang Y, Zhang J, Wang S. The role of rapamycin in healthspan extension via the delay of organ aging. Aging Res. Rev. 2021.

15. Selvarani R, Mohammed S, Richardson A. A rapamicin hatása az öregedésre és az életkorral összefüggő betegségekre – múlt és jövő. GeroScience. 2021.

16. Fontana L, Partridge L, Longo VD. Az egészséges élettartam meghosszabbítása az élesztőről az emberre. Tudomány. 2010.

17. Zimmermann A, et al. Az élesztő, mint eszköz az öregedésgátló vegyületek azonosítására. FEMS Yeast Res. 2018.

18. Longo VD, Shadel GS, Kaeberlein M, Kennedy B. Replicative and chronological aging in Saccharomyces cerevisiae. Cell Metab. 2012.

19. Powers RW, Kaeberlein M, Caldwell SD, Kennedy BK, Fields S. Az élesztő kronológiai élettartamának meghosszabbítása a TOR útvonal jelátvitelének csökkentésével. Genes Dev. 2006.

20. Murakami CJ, Burtner CR, Kennedy BK, Kaeberlein M. Egy módszer az élesztő kronológiai élettartamának nagy áteresztőképességű kvantitatív elemzésére. J Gerontol. Ser. A Biol. Sci. Med. Sci. (2008).

21. Teng X, Hardwick JM. A genetikailag szabályozott sejthalál számszerűsítése bimbózó élesztőben. Módszerek Mol Biol. 2013.

22. Garay E, et al. Az állófázisú túlélés nagy felbontású profilozása feltárja az élesztő élettartamának faktorait és genetikai kölcsönhatásaikat. PLoS Genet. 2014.

23. Alfatah M, et al. A hipokulozid, az Acremoniumból származó szfingoid bázisszerű vegyület, megzavarja az élesztősejtek membrán integritását. Sci Rep. 2019.

24. Alfatah M, et al. Mono-(2-etil-hexil)-ftalát kémiai-genetikai kölcsönhatási tájképe kemogenomikus profilozással élesztőben. Kemoszféra. 2019.

25. Kwolek-Mirek M, Zadrag-Tecza R. Élesztősejtek életképességének és vitalitásának felmérésére használt módszerek összehasonlítása. FEMS Yeast Res. 2014.

26. Chadwick SR, et al. Eszköztár a Saccharomyces cerevisiae kronológiai élettartamának és túlélésének gyors kvantitatív értékeléséhez. Trafc. 2016.

27. Pereira C, Saraiva L. Az öregedő közegek interferenciája az élesztő kronológiai élettartamának propidium-jodidos festéssel történő értékelésében. Folia Microbiol. (Práha). (2013).

28. Lamming DW, Ye L, Sabatini DM, Baur JA. Rapalogok és mTOR-gátlók, mint öregedésgátló terápiák. J Clin Investig. 2013.

29. Arriola Apelo SI, Lamming DW. Rapamycin: az öregedés gátlója a Húsvét-sziget talajából bukkan elő. Journals of Gerontology - Series A Biological Sciences and Medical Sciences. 2016.

30. Wilkinson JE, et al. A rapamicin lassítja az egerek öregedését. Öregedő sejt. 2012.

31. Saxton RA, Sabatini DM. mTOR jelátvitel a növekedésben, az anyagcserében és a betegségekben. Sejt. 2017;168:960–76.

32. Johnson SC, Rabinovitch PS, Kaeberlein M. Az MTOR az öregedés és az életkorral összefüggő betegségek kulcsfontosságú modulátora. Természet. 2013.

33. González A, Hall MN. Tápanyag-érzékelés és TOR-jelzés élesztőben és emlősökben. EMBO J. 2017;36:397–408.

34. Alfatah M, et al. A TORC1 a Saccharomyces cerevisiae Tap42- Sit4-Rrd1/2 útvonalán keresztül szabályozza a glükózra adott transzkripciós választ és a fejlődési ciklust. BMC Biol. 2021.

35. Van Dijken JP, et al. Négy Saccharomyces cerevisiae törzs fiziológiai és genetikai tulajdonságainak laboratóriumok közötti összehasonlítása. Enzyme Microb Technol. 2000.

36. Mülleder M, et al. Egy prototróf deléciós mutáns gyűjtemény az élesztő metabolomikához és rendszerbiológiához. Nat Biotechnol. 2012.

37. Alvers AL, et al. Autofágia szükséges az élesztő kronológiai élettartamának rapamicin általi meghosszabbításához. Autofágia. 2009.

38. Zhang JH, Chung TDY, Oldenburg KR. Egy egyszerű statisztikai paraméter nagy teljesítményű szűrővizsgálatok kiértékeléséhez és validálásához. J Biomol képernyő. 1999.

39. Riquelme PT, Wernette Hammond ME, Kneer NM, Lardy HA. A szénhidrát-anyagcsere szabályozása 2,5-anhidro-D-mannittal. Proc Natl Acad Sci US A. 1983.

40. Riquelme PT, Wernette-Hammond ME, Kneer NM, Lardy HA. A 2,5-anhidro-D-mannit hatásmechanizmusa májsejtekben. A foszforilált metabolitok hatása a szénhidrát-anyagcsere enzimekre. J. Biol. Chem. (1984).

41. Riquelme PT, Kneer NM, Wernette-Hammond ME, Lardy HA. A glikolízis gátlása 2,5-anhidromannitollal izolált patkány hepatocitákban és Ehrlich ascites sejtekben. Proc Natl Acad Sci US A.

42. Hardie DG. AMP-aktivált/SNF1 protein kinázok: a sejtenergia konzervált őrzői. Nat Rev Mol Cell Biol. 2007.

43. Burkewitz K, Zhang Y, Mair WB. AMPK az energetika és az öregedés kapcsolatában. Cell Metab. 2014.

44. McCartney RR, Chandrashekarappa DG, Zhang BB, Schmidt MC. A Saccharomyces cerevisiae 2-dezoxiglükózzal szembeni rezisztenciájának és érzékenységének genetikai elemzése. Genetika. 2014.

45. Burtner CR, Murakami CJ, Kennedy BK, Kaeberlein M. A molekuláris mechanizmus a kronológiai öregedés élesztőben. Sejtciklus. 2009.

46. ​​Lin SC, Hardie DG. AMPK: érzékeli a glükózt, valamint a sejtenergia állapotát. Cell Metab. 2018.

47. González A, Hall MN, Lin SC, Hardie DG. AMPK és TOR: a sejttápanyag-érzékelés és a növekedés szabályozásának jin és jangja. Cell Metab. 2020.

48. Orozco JM, et al. A dihidroxi-aceton-foszfát jelzi a glükóz elérhetőségét az mTORC1 számára. Nat Metab. 2020.

49. Aguiar-Oliveira MH, Bartke A. Növekedési hormon hiány: egészség és hosszú élet. Endocr Rev. 2019.

50. Orlandi I, Alberghina L, Vai M. Nikotinamid, nikotinamid-ribozid és nikotinsav – feltörekvő szerepek az élesztő replikatív és kronológiai öregedésében. Biomolekulák. 2020.

51. Covarrubias AJ, Perrone R, Grozio A, Verdin E. NAD plus metabolizmus és szerepe a celluláris folyamatokban az öregedés során. Nat Rev Mol Cell Biol. 2021.

52. Spinelli JB, Haigis MC. A mitokondriumok sokrétű hozzájárulása a sejtanyagcseréhez. Nat Cell Biol. 2018.

53. Berry BJ, Kaeberlein M. A geroscience energetikai perspektívája: mitokondriális protonmotoros erő és öregedés. Gero-Science. 2021.

54. Sun N, Youle RJ, Finkel T. Az öregedés mitokondriális alapjai. Mol Cell. 2016.

55. Kauppila TES, Kauppila JHK, Larsson NG. Az emlősök mitokondriumai és öregedése: frissítés. Cell Metab. 2017.

56. Bratic A, Larsson NG. A mitokondriumok szerepe az öregedésben. J Clin Investig. 2013.

57. Chen WL, et al. Az SLC2A5 által közvetített fokozott fruktózfelhasználás az akut mieloid leukémia egyedülálló metabolikus jellemzője, terápiás potenciállal. Rákos sejt. 2016.

58. Jing JL, Ning TCY, Natali F, Eisenhaber F, Alfatah M. A vaspótlás késlelteti az öregedést és meghosszabbítja a sejtélettartamot a mitokondriális funkció fokozása révén. Cells 11, (2022).

Kiadói megjegyzésA Springer Nature semleges marad a közzétett térképeken szereplő joghatósági igényeket és az intézményi kapcsolatokat illetően.

【További információ: david.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】