Absztrakt: A Salvia széles körben elismert terápiás potenciáljáról. Néhány faj biológiai jelentősége azonban ismeretlen, nevezetesen a Salvia cacaliifolia Benth. Ezért ennek a tanulmánynak az a célja, hogy feltárja illóolajának (EO) kémiai összetételét és lényeges tulajdonságait. Az EO-t GC-vel és GC-MS-sel jellemeztük, és gombaellenes hatását a CLSI dermatofitákra és élesztőkre vonatkozó irányelvei alapján értékeltük. A gyulladáscsökkentő hatást lipopoliszacharidokkal stimulált makrofágokon, a nitrogén-monoxid (NO) termelődésének, valamint a két kulcsfontosságú gyulladáskeltő enzim, az iNOS és a COX-2 fehérjeszintjére gyakorolt ​​hatásának felmérésével, Western blot analízissel értékelték. . A sebgyógyulási kapacitást a karcolásos sebgyógyulási teszttel határoztuk meg, az öregedésgátló potenciált pedig a galaktozidáz öregedési marker értékelésével. Az EO-t főként -kurkumin, -bisabolén, biciklogermakrén és kurzerenon jellemezte. Hatékonyan gátolja a dermatofiták és a C. neoformans növekedését. Az EO szignifikánsan csökkentette az iNOS és a COX-2 fehérjeszinteket, és ezzel egyidejűleg az NO felszabadulását. Ezen túlmenően öregedésgátló potenciált mutatott, és elősegítette a sebgyógyulást. Összességében ez a tanulmány rávilágít a Salvia cacaliifolia EO releváns farmakológiai tulajdonságaira, amelyeket tovább kell vizsgálni fenntartható, innovatív és környezetbarát bőrtermékek kifejlesztésével.

A cisztanche glikozidja növelheti az SOD aktivitását a szív- és májszövetekben, és jelentősen csökkentheti az egyes szövetek lipofuscin- és MDA-tartalmát, hatékonyan megkötve a különböző reaktív oxigéngyököket (OH-, H2O₂ stb.) és megvédheti a DNS-károsodást. OH-gyökök által. A Cistanche feniletanoid glikozidok erős szabad gyökfogó képességgel rendelkeznek, nagyobb redukáló képességgel rendelkeznek, mint a C-vitamin, javítják a SOD aktivitását a spermiumszuszpenzióban, csökkentik az MDA-tartalmat, és bizonyos védő hatást fejtenek ki a spermium membrán működésére. A cistanche poliszacharidok fokozhatják a SOD és a GSH-Px aktivitását a D-galaktóz által okozott kísérletileg öregedő egerek eritrocitáiban és tüdőszöveteiben, valamint csökkenthetik a tüdő és a plazma MDA- és kollagéntartalmát, valamint növelhetik az elasztintartalmat. jó eltávolító hatás a DPPH-ra, meghosszabbítja a hipoxia idejét öregedő egerekben, javítja a SOD aktivitását a szérumban, és késlelteti a tüdő fiziológiás degenerációját kísérletileg öregedő egerekben A sejtmorfológiai degenerációval a kísérletek kimutatták, hogy a Cistanche jó antioxidáns képességgel rendelkezik és potenciálisan gyógyszer lehet a bőröregedési betegségek megelőzésére és kezelésére. Ugyanakkor a Cistanche-ban található echinakozid jelentős mértékben képes megkötni a DPPH szabad gyököket, és képes megkötni a reaktív oxigénfajtákat és megakadályozza a szabad gyökök által kiváltott kollagén lebomlását, valamint jó helyreállító hatással van a timin szabad gyökök anionjainak károsodására.

Kattintson a Desert Cistanche előnyeire

【További információ: david.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

1. Bemutatkozás

A közegészségügyi hatóságok továbbra is figyelmen kívül hagyják a gombás fertőzéseket, amelyek több mint egymilliárd embert érintenek, és évente 1,5 millióan halnak meg [1]. Az immunhiányos egyének hajlamosabbak a gombás fertőzésekre [1], a Candida és a Cryptococcus az invazív fertőzések két fő etiológiai ágense [1,2]. A dermatofiták, a patogén gombák egy másik csoportja, amelyek rendkívül fontosak a felszíni mikózisokkal kapcsolatos morbiditásban játszott szerepük miatt [3], beleértve a Trichophyton, Epidermophyton és Microsporum törzseket. Ezenkívül invazív betegségeket okozhatnak az immunhiányos gazdaszervezetekben [4].

A dermatofiták aktiválhatják az immunrendszert a gomba epitópoknak, például a mannánnak [5,6], a toll-like receptorokhoz (TLR-ekhez) való kötődésének köszönhetően, ezáltal aktiválva az ezekkel a fertőzésekkel kapcsolatos pro-inflammatorikus kaszkádot. Az egyik ilyen kaszkád a nukleáris faktor kappa B (NF-κB) útvonala, amely végső soron a gyulladásos citokinek termelődésének és a kulcsfontosságú gyulladást elősegítő enzimek, például az indukálható nitrogén-monoxid-szintáz (iNOS) és a cikloxigenáz fehérjeszintjének növekedéséhez vezet. -2 (COX-2) [7]. Az iNOS enzim felelős a nitrogén-monoxid (NO) termeléséért, amely egy jól ismert gyulladáskeltő mediátor, amely számos krónikus gyulladással összefüggő betegségben túltermelődik.

Ezenkívül a dermatofiták a bőrelváltozások kialakulásához kapcsolódnak [8]. Ezért a fertőzés megszűnése után sebgyógyulási folyamatoknak kell végbemenniük a sérült szövet regenerálódásához. Ez a folyamat különböző fázisokat ölel fel, amelyeknek a megfelelő sorrendben és időben kell bekövetkezniük, ellenkező esetben a seb krónikussá válik [9].

A relapszusok, a rezisztencia és a gombaellenes mellékhatások miatt a jelenlegi gombaellenes kezelések sokszor nem hatékonyak, a gombás fertőzések továbbra is kielégítetlen klinikai igényt jelentenek [10]. Meglepő módon egyre több jelentés bizonyítja, hogy számos gombatörzsben már kialakult rezisztencia a jelenlegi gombaellenes szerekkel szemben [11,12], ami indokolja új gombaellenes megközelítések kidolgozását [13]. Ezenkívül a gyulladáscsökkentő szerek számos káros hatást is okoznak [14]. Ezt szem előtt tartva, rendkívül fontosak lennének azok a terápiás szerek, amelyek egyidejűleg kezelhetik a gombás fertőzéseket és csökkenthetik a kapcsolódó gyulladást.

Az aromás növények és metabolitjaik érdekes érzékszervi jellemzőkkel rendelkeznek, amelyek szintén hozzájárulnak a gyógyszer-, agronómiai, élelmiszer-, egészségügyi, kozmetikai és illatszeriparban elért magas értékükhöz [15], és potenciális jelöltekként jelennek meg új gyulladásgátló/gombaellenes szerekként.

Az Asteraceae, Apiaceae és Lamiaceae családból származó számos aromás növény gazdag illóolajokban, amelyek biológiai hatások széles skáláját mutatják, nevezetesen gyulladás- és gombaellenes tulajdonságokat [16–22]. A Salvia L. nemzetséget, a Lamiaceae család egyik legfontosabb nemzetségét termesztik élelmiszer-fűszerként vagy ízesítőként a kozmetikumokban és az illatszerekben [23]. A hagyományos gyógyászatban számos fajt használnak mikrobiális fertőzések, malária és gyulladások kezelésére, valamint az otthonok betegség utáni fertőtlenítésére [23]. A Salvia fajok biológiai tulajdonságaik miatt vonzották a kutatókat, erős antibakteriális, gombaellenes, rákellenes és gyulladáscsökkentő hatásuk, valamint a kognitív teljesítmény javítása miatt [24–30]. Bár ezt a nemzetséget nagymértékben tanulmányozzák, néhány faj kémiai összetétele és gyógyászati ​​​​érdeke továbbra is ismeretlen, mint például a Salvia cacaliifolia Benth. (syn Salvia atriplicifolia Fernald, Salvia hempsteadiana SFBlake és Salvia mendax Epling). A S. cacaliifolia egy 70 cm magas, felálló, lágyszárú évelő cserje, háromszögletű levelekkel és nagy, mélykék, 2-ajkos virágokkal, 2 cm hosszú [31]. Ez a faj Mexikó, Guatemala és Honduras magaslati régióiban nő.

Ennek a munkának a célja a S. cacaliifolia (cacalia zsálya) illóolajának kémiai jellemzése és gombaellenes/gyulladáscsökkentő hatásának feltárása. Továbbá az illóolaj sebgyógyító képességét is tanulmányozták. A faj iránti érdeklődés további felkeltése érdekében az öregedés elleni potenciált is megvizsgálták.

2. Eredmények

2.1. A S. cacaliifolia illóolaj kémiai összetétele

Az illóolajat nagy mennyiségű szénhidrogén-szeszkviterpének (70,10 százalék ± 0,119), majd oxigéntartalmú szeszkviterpének (11,71 százalék ± 0) jellemezték. {21}}32), amint azt az 1. táblázat mutatja. Az egyes vegyületeket tekintve az illóolaj gazdag volt -kurkuminban (27,64% ± 0.195), -biszabolénben (18,01% ± 0,033), biciklogermakrénben ( 8,54 százalék ± 0,074) és a curzerenon (7,68 százalék ± 0,055).

2.2. A Salvia cacaliifolia gombaellenes hatása 

Felmérték a S. cacaliifolia-ból származó illóolaj gombaellenes hatását, különösen a dermatofiták és élesztőgombák ellen. Amint a 2. táblázat mutatja, az illóolaj minden vizsgált dermatofita törzzsel szemben hatásos volt, a T. mentagrophytes és a T. rubrum volt a legérzékenyebb (MIC=0.16 µL/mL). Az élesztőgombák közül a C. neoformans volt a legérzékenyebb az illóolajra (MIC=0.64 µL/mL).

2.3. A S. cacaliifolia gyulladáscsökkentő hatása

A S. cacaliifolia illóolaj gyulladáscsökkentő hatását lipopoliszachariddal (LPS) stimulált makrofágok segítségével értékeltük. Ahogy az várható volt, az LPS 24 órás hozzáadása a nitrogén-monoxid (NO) táptalajhoz való szekréciójának növekedéséhez vezetett ([NO]=42,8 ± 7,4 µM). Az illóolaj különböző koncentrációinak hozzáadása a kimutatott nitritek dózisfüggő csökkenéséhez vezetett (IC50=0.49 µL/mL). Mind az 1,25, mind a 0,64 µL/mL szignifikánsan csökkentette a kimutatott nitriteket (1A. ábra). Tekintettel arra, hogy 1,25 µL/ml koncentrációnál a sejtek életképességének szignifikáns csökkenése volt megfigyelhető (1B. ábra), a 0,64 µL/mL koncentrációt használtuk a S. cacaliifolia gyulladáscsökkentő potenciálja mögött meghúzódó mechanizmus feltárására. illóolaj.

Figyelembe véve, hogy az LPS kötődése a Toll-like receptor 4-hez (TLR4) az NF-κB nukleáris transzlokációjához vezet, ami viszont indukálható nitrogén-monoxid-szintáz (Nos2) és ciklooxigenáz-2 (Cox2) expresszióját okozza. 34], ezután felmértük, hogy az illóolaj jelenléte módosíthatja-e mindkét fehérje szintjét. Amint a 2A–C. ábrán látható, az LPS jelenléte önmagában az iNOS és a COX-2 fehérjeszintjének jelentős növekedését okozta. Az illóolaj jelenlétében mindkét fehérje szintje csökkent, különösen az iNOS-é (2A, B ábra), ami arra utal, hogy az olaj károsította az NF-κB aktivációt, és ennek következtében a Nos2 mRNS expresszióját, valamint fehérjeszintjét.

2.4. A S. cacaliifolia Essential Oi sebgyógyító tulajdonságai

Figyelembe véve, hogy a Salvia nemzetségből számos növényről számoltak be sebgyógyító szerként [27,35,36], feltételezték, hogy a S. cacaliifolia elősegítheti a sebgyógyulást. Ehhez a karcolási tesztet alkalmaztuk, és a sebzáródást a fibroblasztokban lévő illóolaj jelenlétében és hiányában értékeltük. Jelentjük, hogy az illóolaj jelentősen elősegítette a fibroblasztok migrációját a kontrollsejtekkel összehasonlítva (3A, B ábra) 0,32 µL/mL-nél, amely koncentráció mentes a fibroblasztokra nézve toxicitástól (3C. ábra).

2.5. A S. cacaliifolia esszenciális olaj öregedésgátló hatása

Mivel ismert, hogy egyes Salvia fajok öregedésgátló tulajdonságokkal rendelkeznek [37, 38], a S. cacaliifolia illóolaj öregedésgátló potenciálját a Senescenceassociated -galactosidase ( -gal) vizsgálattal, etopoziddal mint öregedést indukáló szerrel értékeltük. .

Amint a 4. ábrán látható, az etopozid (12,5 µM) hozzáadása 24 órán át, majd 72 órás visszanyerés önmagában a -gal-pozitív sejtek számának jelentős növekedéséhez vezetett, ami azt mutatja, hogy az etopozid hatékonyan indukálja a sejtek öregedését. Érdekes módon, amikor a gyógyulási fázisban S. cacaliifolia illóolajat adtunk a táptalajhoz, a -gal-pozitív sejtek százalékos aránya szignifikánsan csökkent az önmagában alkalmazott táptalajhoz képest (4A, B ábra), ami arra utal, hogy a S. cacaliifolia is öregedésgátló hatást mutatnak.

3. Megbeszélés

A S. cacaliifolia még mindig nagyrészt ismeretlen illóolajának kémiai összetételét, valamint bármely biológiailag releváns tevékenységét illetően. Az ismeretek hiányának pótlására ez a munka először ismerteti ennek a fajnak a gyulladáscsökkentő, gombaellenes, öregedésgátló és sebgyógyító tulajdonságait.

Beszámoltunk arról, hogy a S. cacaliifolia illóolajat túlnyomórészt szeszkviterpének jellemzik, különösen -kurkumin, -bisabolén, biciklogermakrén és kurzerenon. Hasonlóképpen, a S. scabra és a S. aurea illóolajai is gazdagok voltak szeszkviterpénekben (92,4 és 75 százalék) [39], a -kariofilén, epi- -kardinális és δ-kadinén pedig a fő vegyület. A S. aurea, míg a S. sabra germakrén D, -kariofillén, germakrén B és -kopén jellemezte. A S. ceratophylla, S. verbenaca, S. stenophylla, S. runcinata és S. repens a Salvia illóolajok további példái, amelyek túlnyomórészt szeszkviterpénekben gazdagok [40–42]. A Salvia-ból származó illóolajok azonban nem tartalmaznak nagy mennyiségű -kurkumint, -bisabolént és curzerenont, mint a S. cacaliifolia illóolaját. Más Salvia fajok nagyon eltérő kémiai összetételűek, túlsúlyban a monoterpének, mint például a S. officinalis nagy mennyiségű cisz-tujont és kámfort [43,44] vagy 1,8-cineolt és kámfort [45]. és 1,8-cineolban, -pinénben, kámforban gazdag S. rosmarinus [46].

Figyelembe véve, hogy néhány Salvia fajról beszámoltak bőrfertőzések kezelésére alkalmas szerként [36,47], ezt követően arra törekedtünk, hogy felmérjük, hogy a S. cacaliifolia olaj képes-e a gombás fertőzés leküzdésére. Az illóolaj gátló hatást mutatott az összes dermatofita törzs és a Cryptococcus neoformans ellen, ami arra utal, hogy felhasználható gombás fertőzések, különösen dermatophytosis és cryptococcosis kezelésére. A más fajokból, például a S. officinalisból származó illóolaj gátló hatást fejt ki a dermatofiták ellen, amelyek MIC értéke 0,63 és 2,5 µL/ml között van [43,45], így gyengébb aktivitást mutat, mint az S. cacaliifolia. A S. multicaulisból származó két illóolaj releváns dermatofitaellenes hatást mutatott, különösen a nerolidolban gazdag kemotípus [48]. A S. cacaliifolia fő vegyületeinek aktivitását illetően nem végeztek vizsgálatokat. Néhány tanulmány azonban értékelte az ezekben a vegyületekben gazdag illóolajok gombaellenes hatását. Egy tanulmány valóban beszámolt a Helichrysum microphyllum subsp. A Tyrrhenian kimutatta, hogy a legmagasabb -kurkumin tartalmúak mutatták a legjobb gombaellenes hatást [49]. Más tanulmányok mérsékelt gombaellenes hatásról számoltak be a -bisabolénban [50,51], biciklogermakrénben [51,52] és kurzerenonban [53] gazdag illóolajok esetében. Figyelembe véve a korábban közölt illóolajok gyenge gombaellenes hatását, feltételezzük, hogy a S. cacaliifolia aktivitása a keverékben lévő összes vegyület közötti szinergikus hatásnak tulajdonítható. A S. cacaliifolia illóolaj és izolált vegyületek gombaellenes hatásának hátterében álló hatásmechanizmusok még nem ismertek. Figyelembe véve azonban lipofil természetüket, azt feltételezzük, hogy a membránszerkezetekbe integrálódva gomba növekedési gátlást válthatnak ki, ami növeli a permeabilitást, és elősegíti az intracelluláris komponensek kiszivárgását és az enzimek inaktivációját [15,54].

Tekintettel arra, hogy a gombás fertőzések az immunrendszer aktiválódásához vezetnek [55], a S. cacaliifolia gyulladáscsökkentő potenciálját is kiemelték a jelen tanulmányban, mivel a makrofágok illóolajjal történő előkezelése csökkentette a NO-felszabadulást. LPS stimuláció előtt. A S. cacaliifolia gyulladáscsökkentő potenciáljának mögöttes mechanizmusainak, az illóolajnak az iNOS és a COX-2 fehérjeszintjére gyakorolt ​​hatásának feltárására, amely két, a TLR4/NF-κB jelátvitelhez kapcsolódó gyulladást elősegítő fehérje útvonalat, értékelték. Mindkét fehérjeszint csökkenést figyeltek meg, ami arra utal, hogy a NO felszabadulás csökkenése az NF-κB útvonal gátlásának tudható be. Valójában az egyik kulcsfontosságú molekuláris mechanizmus, amely hozzájárul a krónikus gyulladás fennmaradásához, az NF-κB jelátviteli kaszkád aktiválása, amely a gyulladás és a veleszületett immunhomeosztázis fő szabályozójaként jelent meg. Az NF-kB transzkripciós faktor aktiválása a COX-2, iNOS indukcióját, valamint a gyulladásos citokinek, a tumor nekrózis faktor (TNF)-, IL-1, IL-6 aberráns expresszióját okozza. , amely károsíthatja az egészséges szomszédos sejteket, és hosszú időn keresztül krónikus betegségekhez vezethet. További vizsgálatokat kell végezni a S. cacaliifolia illóolaj gyulladáscsökkentő potenciálja mögött meghúzódó teljes mechanizmus, például a p65 nukleáris transzlokációjának további megértéséhez. Más Salvia fajok esetében kimutatták, hogy a S. officinalis illóolaj 0,64 µL/ml-nél 30-40 százalékkal csökkentette az NO-termelést [45], míg a S. cacaliifolia illóolaja ugyanaz a dózis 70 százalékkal csökkenti az NO termelést. Ezzel szemben a S. ceratohyal-ból származó illóolaj nagymértékben gátolja az NO-termelést (IC50=90 µg/mL) [40]. A Salvia fajok NF-kB útvonal moduláló képességéről már beszámoltak. Valójában a S. officinalis képes volt csökkenteni az NF-kB expresszióját [44]. A S. ceratophylla erősen gátolja az NF-κB-t 38 µg/ml IC50 értékkel [40]. Kimutatták, hogy a -kurkuminban, a S. cacaliifolia olaj fő vegyületében gazdag Helichrysum italicum illóolaj képes csökkenteni az NO-termelést, ami a vegyület tartalomától függött, amit az illóolaj frakcionálása igazolt, ahol a A kurkuminban gazdag frakció indukálta a legnagyobb gátlást [56]. Hasonló hatásokat írtak le a H. italicum -kurkumin kemotípusánál [57]. Kimutatták, hogy a jelentős mennyiségű -bisabolént [58] és biciklogermakrént [59] tartalmazó illóolajok ígéretes gyulladáscsökkentő hatást fejtettek ki. A curzerenonnal kapcsolatban nem végeztek vizsgálatokat annak gyulladáscsökkentő hatásának felmérésére. Azonban arról számoltak be, hogy két kurzerenonban gazdag illóolajnak jelentős antioxidáns tulajdonságai vannak [60,61], amelyek szintén hozzájárulhatnak a S. cacaliifolia gyulladáscsökkentő aktivitásához azáltal, hogy lehetővé teszik az NO-megkötést. Ezt szem előtt tartva lehetséges, hogy a -kurkumin, az illóolaj fő vegyülete lehet a S. cacaliifolia gyulladáscsökkentő hatásáért felelős fő szereplő, azonban a többi fő vegyület hozzájárulását nem lehet figyelmen kívül hagyni.

Tekintettel arra, hogy a dermatofita fertőzés bőrelváltozások kialakulásához vezethet [8], megvizsgáltuk, hogy a S. cacaliifolia elősegítheti-e a sebgyógyulást. Eredményeink azt mutatták, hogy ez az illóolaj elősegíti a fibroblasztok migrációját, így arra utal, hogy szerepet játszhat a sebgyógyulási folyamatban. A -kurkuminban gazdag H. italicumból származó illóolaj elősegítette a cukorbeteg patkányok sebgyógyulását [62], ezért feltételezzük, hogy a S. cacaliifolia sebgyógyító képessége ennek a vegyületnek a nagy mennyiségének tulajdonítható.

Tekintettel arra, hogy számos Salvia faj képes öregedésgátló szerként működni [37], célunk volt annak feltárása, hogy a S. cacaliifolia is képes-e visszaállítani az öregedést. Valójában az öregedés által kiváltott pH-függő -galaktozidáz aktivitásának csökkenését figyelték meg. Ez az aktivitás elsősorban a -bisabolén jelenlétének tulajdonítható, mivel az ebben a vegyületben gazdag illóolaj erős öregedésgátló hatást is mutatott a fibroblasztokon [63].

4. Konklúziók

Ez a munka rávilágít egy Salvia faj kémiai összetételére, amely nagyrészt ismeretlen, és bemutatja, hogy ez a növény számos biológiailag releváns tevékenységgel rendelkezik. A S. cacaliifolia illóolaja jellegzetes kémiai összetételű, túlnyomórészt -kurkuminban, -bisabolénben, biciklogermakrénben és kurzerenonban gazdag. Ezen túlmenően ez az első jelentés, amely bemutatja a S. cacaliifolia illóolaj gombaellenes, gyulladásgátló, öregedésgátló és gyógyító tulajdonságait, utalva arra, hogy potenciálisan felhasználható összetevőként a bőrgyulladás megelőzésére szolgáló kozmetikai termékek fejlesztésében. mint a dermatophytosis és a kapcsolódó gyulladások kezelésére.

5. Anyagok és módszerek

5.1. Növényi anyag

A Salvia cacaliifolia palántákat a Cagliari Egyetem (UNICA) Növénybiológiai és Gyógyszerbotanikai Laboratóriumában, a "Planta Medica" üvegházban termesztették. A mexikói eredetű cacalia zsálya magokat egy olasz szaküzletből vásárolták. 5 hét elteltével a palántákat a "Planta Medica" üvegházba ültettük át a faj öko-fiziológiai igényeinek megfelelően. 2 éves növekedés után a növényeket begyűjtöttük (virágzási periódus), és két napig laboratóriumban szárítottuk. Az utalványmintát (6/23.9/V1) a Herbarium Karalitanumban (CAG), Cagliari Egyetem, Viale S. Ignazio, 13 Cagliari, Olaszország letétbe helyezték.

【További információ: david.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】