A Tongluo Digui főzet a podociták autofágiájának elősegítésével kezeli a cukorbeteg patkányok vesekárosodását

Kapcsolatba lépni:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

HAN Jiarui, ZHANG Yage, SHI Xiujie, PENG Zining, XING Yufeng, PANG Xinxin

Absztrakt

CÉLKITŰZÉS:

A Tongluo Digui főzet vesekárosodásra és streptozotocin által kiváltott podocita autofágiára gyakorolt ​​hatásának vizsgálata cukorbeteg patkányokban.

MÓD:

A hím Sprague-Dawley patkányokat véletlenszerűen hat csoportra osztották: normál, modell, Tongluo Digui főzet (magas, közepes és alacsony dózisú) és valzartán. Streptozotocint intraperitoneálisan fecskendeztek be, hogy megismételjék a diabéteszes állatmodellt. 8 hét elteltével a proteinuriát értékelték a diabéteszes nephropathia modelljének megállapítása érdekében. A kezeléseket naponta adták be intragasztrikus úton. A szondát követően 16 héttel meghatároztuk a 24 órás vizeletfehérje-koncentrációt, a vércukorszintet, a szérum kreatinint és a karbamid-nitrogén-koncentrációt. Ezután a patkányokat leöltük, a veséket begyűjtöttük, és periodikus sav-Schiff-festékkel megfestettük, hogy transzmissziós elektronmikroszkóppal értékeljük a glomerulusokban, beleértve a glomeruláris podocitákat, a patológiás változásokat. Western blot analízist alkalmaztunk a nephrin, podocin, p62, beclin-1, LC3Ⅱ/Ⅰ és p-mTOR/mTOR fehérje expressziójának meghatározására a veseszövetekben.

EREDMÉNYEK:

A modellcsoporttal összehasonlítva a Tongluo Digui főzet a 24 órás vizeletfehérje-koncentráció, a vércukorszint, a hemoglobin A1c, a szérum kreatinin, a karbamid-nitrogén-koncentráció, a teljes szérumfehérje és az albumin csökkenésével járt. Ezzel párhuzamosan csökkent a mesangialis mesenterialis tágulás és a lábfolyamatok összeolvadása, a glomeruláris bazális membrán nem vastagodott meg jelentősen, és a podocitákban nőtt a podociták és az autofagoszómák száma. Továbbá a nephrin, a podocin, az LC3Ⅱ és a beclin-1 fehérje expressziója a veseszövetben felfelé volt szabályozva, míg a p62 fehérje expressziója csökkent, és az mTOR foszforilációja gátolt.

KÖVETKEZTETÉS:

A Tongluo Digui főzet gátolhatja a diabéteszes nefropátia progresszióját az mTOR foszforilációjának gátlásával, ezáltal növelve az autofágiát a podociták védelme és a proteinuria csökkentése érdekében.

Kulcsszavak:Diabéteszes nephropathiák; autofágia; podocita; Tongluo Digui főzet

cistanche szár előnyeiszámáraveseműködés

BEVEZETÉS

A diabéteszes nephropathia (DN) a cukorbetegség egyik súlyos mikrovaszkuláris szövődménye, a cukorbetegek 30 százaléka -40 százaléka szenved vesebetegségben. A cukorbetegség növekvő előfordulásával a DN vált a végstádiumú vesebetegség fő okozójává világszerte.1 Ez súlyos gazdasági teher a családok és a társadalom számára egyaránt.

A podocita károsodás a DN progressziójának fontos oka. Terminálisan differenciált sejtként az autofágia fontos szerepet játszik a podociták élettani funkciójának fenntartásában.2,3 Normál fiziológiás állapotban a podocitákon belül nagyfokú autofágia van, amely eltávolítja a sérült fehérjéket és organellumokat.4 A cukorbetegben azonban A podocita autofágia gátolt, ami arra utal, hogy a podocita autofágia fontos szerepet játszik a DN patogenezisében.5 A DN a "Xiao Ke", "Guan Ge" és "ödéma" kategóriái közé tartozik a hagyományos kínai orvoslásban. A Hagyományos Kínai Orvoslás elmélete szerint a vérpangás ésYin hiánya DN legfontosabb okai.6 Ezért a DN kezelésének elősegítenie kell a vérkeringést és táplálnia kell a yint, és erre a Tongluo Digui főzetet hozták létre. Korábban azt tapasztaltuk, hogy a Tongluo Digui főzet jótékony kezelési hatást fejt ki a DN-ben. Ebben a vizsgálatban arra törekedtünk, hogy a streptozotocin (STZ) által indukált 1-es típusú DN patkánymodell segítségével értékeljük a Tongluo Digui főzet vesekárosodásra, autofágiára és mTOR jelátviteli útvonalra gyakorolt ​​hatását. Feltártuk továbbá a Tongluo Digui főzet mögöttes molekuláris mechanizmusát a DN progressziójának késleltetésében, és bizonyítékot szolgáltattunk a DN klinikai megelőzésére és kezelésére.

ANYAGOK ÉS METÓDUSOK

Állatok

Specifikus patogénmentes (SPF) Sprague-Dawley patkányok [n=60, hím, (150 ± 10) g; minősítési bizonyítvány száma: SCXK (Yu) 2017-0001] a Henan Kísérleti Állatközponttól (Zhengzhou, Kína) vásároltuk. Normál fényciklus (14 óra fény, 10 óra éjszaka), belső hőmérséklet (23 ± 2) fok, páratartalom (40 százalék -50 százalék), elhelyezés (ketrecenként három állat) és etetés (sterilizált takarmány és ivóvizet) használtak. A kísérletet a Henan Hospital of Traditional Chinese Medicine (Zhengzhou, Kína) Sejtképészeti Központ Laboratóriumában fejezték be. Minden kísérletet a National Institutes of Health által kiadott, a laboratóriumi állatok gondozására és használatára vonatkozó útmutató szerint végeztek.

Kábítószer

A Valsartan (Val) kapszulákat a Novartis Pharma Schweiz AG-tól (X2307 CN-b, Peking, Kína) vásároltuk. A Tongluo Digui főzet a következőkből áll: Shuichi (Hirudo) 12 g, Guijia (Carapax et Plastrum Testudinis) 30 g, Dihuang (Radix Rehmanniae) 20 g, Huangqi (Radix Astragali Perparata) 20 g, Danggui (Radix Zeomaz) S30Rhis Alismatis) 10 g, Dahuang (Radix et Rhizoma Rhei) 15 g, Gancio (Radix Glycyrrhizae) 6 g. A kínai gyógynövényeket a Henan Hospital of Traditional Chinese Medicine-től (Zhengzhou, Kína) vásárolták.

Kísérleti terv

A patkányokat véletlenszerűen hat csoportra osztották, amelyek mindegyike 10 patkányból állt: kontrollcsoport (Ctrl), DN modellcsoport (STZ), DN modell Val kezelt csoporttal (Val), DN modell Tongluo Digui főzetű nagy dózisú kezelési csoporttal (HTL). , DN modell Tongluo Digui főzet közepes dózisú kezelési csoporttal (MTL) és DN modell Tongluo Digui főzet alacsony dózisú kezelési csoporttal (LTL). A hat patkánycsoportot 16 héttel a gyomorszonda és a vesék összegyűjtése után leöltük.

A Val (10 mg·kg–1·d–1 ) és a Tongluo Digui főzet három különböző dózisban szondán keresztül adták be naponta egyszer 16 héten keresztül. A beadott dózisok az állatok és emberek közötti gyógyszerdózisok konverziós egyenletén alapultak. Patkány dózis (mg/kg)=felnőtt ember dózisa (mg/kg) × konverziós tényező (6,25). A nagy dózisú, közepes dózisú és alacsony dózisú Tongluo Digui főzet csoportjai 5,4, 2,7 és 1,35 g · kg - 1, d - 1 gyomorszondát kaptak. A patkányokat hetente lemértük. A 24-h vizeletet metabolikus ketrecek segítségével gyűjtöttük össze a 0., 12. és 24. hét végén. A kezelés befejezése után (24. héten) a patkányokat klór-hidrát szubkután injekcióval érzéstelenítettük, majd vese- és vérszövetmintákat vettünk, és -80 °C-on tároltuk. A patkányok szabadon hozzáférhettek normál laboratóriumi állattáphoz és tiszta vízhez (kivéve az alábbiakban leírtakat).

ciszterna növény

A DN modell felállítása

STZ-t (Sigma, St. Louis, MO, USA) használtunk a cukorbetegség kiváltására a korábban leírtak szerint.7 Mind a 60 patkánynak korlátozott volt a vízhez jutása 12 órával a kísérletek előtt. Ezek közül 50 patkánynak egyetlen intraperitoneális injekciót adtunk be citrát pufferben (0,1 mol/l, pH 4,5) oldott 60 mg/kg STZ-t. A cukorbetegséget az STZ injekció beadása után 72 órával mért vércukorszint méréssel igazolták. Azokat az állatokat, amelyek glükózkoncentrációja 16,7 mmol/l vagy annál nagyobb volt három egymást követő napon, cukorbetegnek tekintették. 8 hét elteltével a patkányokat külön metabolikus ketrecekben helyeztük el, és a vizeletet 24 órán keresztül gyűjtöttük a vizelet mikroalbumin (UAE) mérésére. A DN-modellt 30 mg/24 óra vagy annál nagyobb UAE elérésekor erősítették meg.

Biokémiai mutatók

A szérum- és vizeletvizsgálatokat az állatok vesefunkciójának értékelésére használtuk. A patkány vizeletét a metabolikus ketrec segítségével értékeltük. A patkányvérmintákat farokvágásos módszerrel vettük.8 A szérum- és vizeletmintákat –80 fokon lefagyasztottuk felhasználásig. A szérum kreatinint, a vér karbamid-nitrogénjét, az albumint és a vizeletfehérje-koncentrációt radioimmunoassay-vel mértük. A hemoglobin A1c (HbA1c), a C-peptid és az inzulin szintjét a HbA1c ELISA Kit (Crystal Chem INC, Elk Grove Village, IL, USA), a C-peptid Elisa kit (Kainu Bio Ltd., Peking, Kína) és az inzulin segítségével mértük. Elisa készlet (Merck Millipore Co., Ltd., Bed ford, MA, USA) a gyártó utasításait követve. Patkányokban a húgysavat, a teljes szérumfehérjét (TP), az albumint (ALB), az alanin aminotranszferázt (ALT) és az aszpartát aminotranszferázt (AST) automata biokémiai analizátorral határoztuk meg.

Hisztopatológiai vizsgálat

A formalinnal rögzített veseszövetet paraffinba ágyaztuk, 3-4 μm vastag metszetekre vágtuk, és periodikus sav-Schiff-fel (PAS) festettük. A veseszövet morfológiai változásait, beleértve a mezangiális sejtproliferációt, a sejtinfiltrációt és a mezangiális mátrix változásait, minden egyes festett metszet esetében fénymikroszkóppal (NIKON D3100) vizsgáltuk (×400).

Transzmissziós elektronmikroszkóp

A TEM-et a podociták és a mezangiális sejtek morfológiájának megfigyelésére használtuk a veseszövetben. A friss veseszöveteket blokkokra osztották (< 1="" mm3="" ),="" were="" quickly="" fixed="" in="" 2%="" phosphate-buffered="" glutaraldehyde="" for="" at="" least="" 2="" h,="" washed="" three="" times="" with="" pbs,="" fixed="" in="" 1%="" osmium="" tetroxide="" for="" 2="" h,="" and="" then="" embedded="" in="" acetone="" wrap="" after="" dehydration.="" specimens="" were="" sliced="" in="" 50-60="" nm="" ultrathin="" sections,="" double-stained="" with="" 3%="" uranyl="" acetate="" and="" lead="" citrate,="" and="" then="" examined="" under="" a="" tem="" (jeol-jem-1400="" plus,="" japan="" electron="" optics="" laboratory,="">

Western blot analízis

A teljes fehérjét a veseszövetből protein lízis pufferrel (Solarbio Biotech, Peking, Kína) vontuk ki. A felülúszó fehérjekoncentrációját BCA vizsgálati készlettel (Solarbio Biotech, Peking, Kína, PC0020) tesztelték. A 40 ug fehérjét tartalmazó mintákat 12 százalékos SDS-poliakrilamid gélelektroforézissel (SDS PAGE) választottuk el (Applygen, Peking, Kína, B1004), majd nitrocellulóz szűrőmembránra vittük át (Solar bio Biotech, Peking, Kína). Szobahőmérsékleten 5 százalékos sovány tejjel 2 órás blokkolást követően -aktin (Proteintech, cikkszám: 60008-1-lg), LC3II/I (Ab cam, cikkszám: ab48394), P62 (Proteintech, cikkszám: 18420-1-AP), beclin-1 (protein tech, cikkszám: 11306-1-AP), p-mTOR (CST, cikkszám: #5536), mTOR (CST, cikkszám: # 2983), nephrint (Abcam, cikkszám: ab58968) és podocint (mindegyik fehérjét, cikkszám: 20384 -1-AP) adtunk hozzá, és 4 fokon egy éjszakán át inkubáltuk. Ezt a keveréket ötször mostuk TBS plusz 0,05 százalékos Tween -20 (Solar bio Biotech, Peking, Kína) (TBS-T) 5 percig 5 percig, majd hozzáadtuk a másodlagos antitestet (1∶2000), mielőtt szobai inkubációt végeztünk volna. 1 óra hőmérsékleten, 5 percig TBST-vel ötször mossuk, fokozott kemilumineszcenciával színfejlődésnek tesszük ki (ECL, Millipore, Billerica, MA, USA), és az ImageJ szoftverrel exponáljuk a csíkos szürkeárnyalatos elemzéshez.

Statisztikai analízis

Az adatokat SPSS szoftverrel elemeztük (IBM SPSS Statistics for Windows, 23.0. 2014, Armonk, NY, USA). A csoportok közötti különbségeket egyirányú varianciaanalízissel, majd Tukey-teszttel teszteltük. Az adatokat átlag ± standard deviációban fejeztük ki. P < 0,05="" szignifikánsnak="">

luteolin

EREDMÉNYEK

A Tongluo Digui főzet védő hatása a DN patkány vesére

A biokémiai mutatókat, például a vércukorszintet, a glikált hemoglobint, a szérum kreatinint, a vér karbamid-nitrogénkoncentrációját és az {{0}}órás vizeletfehérje-koncentrációt 16 héttel a tápszondát követően mérték. (Asztal 1). Az eredmények azt mutatták, hogy a normál csoporttal összehasonlítva a vércukorszint, a glikált hemoglobin, a szérum kreatinin, a vér karbamid nitrogén koncentrációja, az 24-óra vizelet fehérje koncentrációja, a TP és az ALB szignifikánsan magasabb volt a modellcsoportban (P < {{="" 7}}.01),="" jelezve="" ezzel,="" hogy="" a="" modellcsoport="" károsodott="" vesefunkcióval="" rendelkezett.="" a="" val="" csoportban="" mind="" a="" szérum="" kreatinin-koncentrációja,="" mind="" a="" 24="" órás="" vizeletfehérje="" koncentrációja="" csökkent="" (p="">< 0,05).="" ezenkívül="" a="" tongluo="" digui="" főzet="" nagy="" dózisú="" csoportjában="" a="" vércukor,="" a="" hba1c,="" a="" szérum="" kreatinin="" és="" a="" karbamid="" nitrogén="" koncentrációjának="" jelentős="" csökkenése,="" valamint="" a="" 24="" órás="" vizeletkiválasztás="" (p="">< 0,01)="" volt="" megfigyelhető.="" ezek="" a="" hatások="" dózisfüggőek="" voltak.="" nem="" volt="" szignifikáns="" különbség="" a="" húgysav-,="" inzulin-,="" alt-="" és="" ast-szintekben="" az="" egyes="" patkánycsoportokban.="" összességében="" eredményeink="" azt="" mutatták,="" hogy="" a="" tongluo="" digui="" főzet="" dózisfüggő="" módon="" enyhítette="" a="" vesekárosodást="" és="" javította="" a="" veseműködést="" dn="">

A DN patkány vesepatológiájában bekövetkezett változásokat PAS festéssel értékeltük Tongluo Digui főzetes kezelés után (1. ábra). A normál csoporthoz képest szignifikáns növekedést figyeltek meg a glomeruláris mesangiális sejtek és a mesangialis stroma számában, valamint a mesangiális terület kiszélesedését a modellcsoportban. A glomeruláris mesangiális terület mindhárom Tongluo Digui főzet dózisszintjében és a Val csoportban nőtt. Ezenkívül ez a négy kezelési csoport csökkentette a mesangiális mátrix szélességét a modellcsoporthoz képest, és a glomeruláris mezangiális terület a nagy dózisú Tongluo Digui főzetes csoportban kisebb volt, mint a Val csoportban. Ezek az eredmények azt mutatták, hogy a Tongluo Digui főzet késleltette a DN glomeruláris léziók progresszióját.

A Tongluo Digui főzet hatása a glomeruláris podocita sérülésekre DN patkányokban

Western blot analízist alkalmaztunk a podocita marker fehérjék, a nephrin és podocin expressziójának meghatározására (2. ábra). A normál csoporthoz képest mindkét fehérje expressziója szignifikánsan csökkent a modellcsoportban (P < 0.01),="" ami="" podocita="" károsodásra="" utal.="" ezenkívül="" a="" nephrin="" és="" a="" podocin="" expressziója="" a="" tongluo="" digui="" főzetes="" csoportokban="" felfelé="" szabályozott="" volt="" a="" modellcsoporthoz="" képest="" (p=""><>

A Tongluo Digui főzet hatása a glomeruláris podocita autofágiára DN patkányokban

A glomeruláris podociták autofagoszómáiban bekövetkező változásokat figyelték meg TEM alatt (3. ábra). Az eredmények autofagoszómákat mutattak a normál csoport glomeruláris podocitáiban. A modellcsoportban hiányoztak a podocita autofagoszómák, és a podocita lábfolyamatok is eltűntek. A három Tongluo Digui főzet dóziscsoportban és a valzartán csoportban glomeruláris podocita autofagoszómákat figyeltünk meg, ami arra utalt, hogy a Tongluo Digui főzet fokozta a podocita autofágiát DN patkányokban. Western blot-ot használtunk az autofágiával kapcsolatos P62, beclin-1 és LC3Ⅱ fehérjék expressziójának kimutatására (4. ábra). A normál csoporthoz képest a beclin-1 és az LC3Ⅱ expressziója szignifikánsan csökkent a modellcsoportban (P < 0.01),="" míg="" a="" p62="" expressziója="" szignifikánsan="" nőtt="" (p="">< 0.01).="" ezek="" az="" eredmények="" azt="" mutatták,="" hogy="" az="" autofágia="" gyengült="" dn="" patkányokban.="" a="" modellcsoporttal="" összehasonlítva="" a="" tongluo="" digui="" főzet="" nagy="" dózisú="" csoportjában="" a="" beclin-1="" és="" az="" lc3ⅱ="" expressziója="" felfelé="" szabályozott="" (p="">< 0,05),="" valamint="" a="" p62="" csökkent="" expressziója.="" ezek="" az="" eredmények="" együttesen="" azt="" mutatták,="" hogy="" a="" tongluo="" digui="" főzet="" vesevédő="" hatása="" dn-ben="" szenvedő="" patkányokban="" összefüggésbe="" hozható="" a="" vesesejtek="" fokozott="">

A Tongluo Digui főzet fokozza a glomeruláris podocita autofágiát DN patkányokban az mTOR foszforiláció gátlásával

Az mTOR foszforiláció gátlása fokozza az autofágiát (5. ábra). A normál csoporthoz képest a modellcsoportban az mTOR foszforilációja fokozódott (P < 0.01),="" míg="" a="" tongluo="" digui="" főzetes="" csoportokban="" gátolt="" (p="">< 0,05).="" ez="" arra="" utalt,="" hogy="" a="" tongluo="" digui="" főzet="" fokozta="" a="" podocita="" autofágiát="" az="" mtor="" jelátviteli="" útvonal="" aktiválásának="" gátlásával.="" korábbi="" vizsgálatok="" kimutatták,="" hogy="" az="" autofágia="" védi="" a="" podocitákat="" és="" javítja="" a="">

VITA

A DN-t főként olyan jelek és tünetek jellemzik, mint a vizeletfehérje jelenléte, magas vércukorszint, polidipsia, polyphagia és polyuria. A tünetek hasonlóak a hagyományos kínai orvoslás tüneteihez, mint például a "Xiao Ke", "Guan Ge" és "ödéma". A DN előfordulása és kialakulása elválaszthatatlan a yin-hiány és a vérpangás kóros alapjától.6 A Yin-hiány és a vérpangás kialakulásával a vese fokozatosan károsodik, ezáltal a vizelet fehérje csökkenése mutatkozik, ami tovább vezet a mikrotrombusok képződéséhez, ill. a vese fibrózisa. A DN betegek elkerülhetetlenül végstádiumú vesebetegségben szenvednek.11

A Tongluo Digui főzetet Zhang Binghou, a hagyományos kínai hagyományos orvoslás híres orvosa hozta létre, és a DN.12 kezelésében szerzett több éves tapasztalata alapján a 13 Tougluo Digui főzet Shuichi (Hirudo), Guijia (Carapax et Plastrum Testudinis), Dihuang (Radix Rehmanniae), Huangqi (Radix Astragali Perparata), Danggui (Radix Angelicae Sinensis), Ze Xie (Rhizoma Alismatis), Dahuang (Radix et Rhizoma Rhei), Gancio (Radix Glycyrrhizae). Közülük a Shuizhi (Hirudo) és a Guijia (Carapax et Plastrum Testudinis) uralkodói drogok, amelyekről úgy gondoljuk, hogy szerepet játszanak a Yin táplálásában és a DN vérkeringésének elősegítésében. A Guijia (Carapax et Plastrum Testudinis) javítja a szervezet immunitását és szekréciós állapotát, és késlelteti az öregedést.14 A Shuizhi (Hirudo) egyéb farmakológiai hatások mellett véralvadásgátló, daganatellenes, gyulladásgátló és antifibrotikus hatással is rendelkezik, és javíthatja a vese működését. a DN kóros változásai a szérum kreatinin és a vér karbamid nitrogén koncentrációjának jelentős csökkentése, valamint a vizelet fehérjekiválasztás csökkentése érdekében.15,16 A DN-ben a podocita sérülés fontos szerepet játszik a glomeruláris bazális membrán filtrációs gátjában és a proteinuria kialakulásában.17 Nephrin, ill. A podocin mindkét pórusmembrán fehérje a podociták felszínén. A két fehérje kölcsönhatásban komplexet képez, amely kulcsszerepet játszik a glomeruláris filtrációs gát működésében.18 A fehérjeexpresszió rendellenes eloszlása ​​különböző fokú proteinuriához vezet.19 Ebben a vizsgálatban STZ-indukált 1-es típusú DN patkányok növekedést mutattak. a vizelet fehérjekiválasztásában és a vesefunkció károsodásában 24 órán keresztül. Ezenkívül a PAS festés azt mutatta, hogy a mezangiális sejtek száma és a mezangiális mátrix nőtt a modellcsoportban, ami azt jelzi, hogy a modell sikeresen létrejött. A Tongluo Digui főzet különböző dózisai csökkentették a 24 órás vizelet fehérje- és szérum kreatinin-koncentrációját, és javították a DN-patkányok vesepatológiáját, csökkent mezangiális sejtekkel és mátrixszal. A Western blot analízis azt mutatta, hogy a Tongluo Digui főzetcsoportban a nephrin és a podocin expressziója magasabb volt, mint a modellcsoportban, ami azt jelzi, hogy ez a képlet késlelteti a DN progresszióját patkányokban a podociták védelmével.

Az autofágia a sejtekben a lizoszómális fehérjék lebomlásának útja, és döntő szerepet játszik a sérült vagy túlzottan expresszált fehérjék kiürülésében, amelyek fenntartják a sejt homeosztázist és integritását.20 Az autofágia a podocita lizoszómális homeosztázisának szerves része cukorbetegségben, és a fokozott autofágia csökkentheti a podocita sérülését. .5 Miután specifikusan kiütötték az autofágiával kapcsolatos Atg5 gént a podocitákból, az egerek fokozatosan mindenütt jelen lévő fehérje-aggregációt, mitokondriális károsodást és autofágia aktivitást mutattak podocitákban; a podociták károsodtak, a lábnyúlványok eltűntek és összeolvadtak, ami az autofágia fennmaradását jelzi. Fontos a normál podocita funkció fenntartása.21,22 Ebben a vizsgálatban a Tongluo Digui főzet autofágiára gyakorolt ​​hatását vizsgáltuk glomeruláris podocitákban TEM és Western blot analízis segítségével. A TEM kimutatta, hogy a podocita autofagoszómák száma minden Tongluo Digui főzet dóziscsoportban nőtt a modellcsoporthoz képest. Ezenkívül a Western blot az autofágiával kapcsolatos fehérjék, az LC3, a beclin-1 és a p62 expresszióját mutatta ki. A modellcsoporttal összehasonlítva az LC3Ⅱ és a beclin{11}} expressziója szignifikánsan megnőtt a Tongluo Digui főzetes csoportban, míg a p62 fehérje expressziója szignifikánsan csökkent. Ezek az eredmények azt mutatták, hogy a Tongluo Digui főzet növelte az autofágia szintjét a glomeruláris podocitákban.

A rapamicin célfehérje (mTOR) az autofágia egyik fő szabályozója.23 Széles körben elterjedt a vesekéregben és a velőben, és szerepet játszik a DN podocita sérülések kialakulásában.24,25 Magas glükóz- és stresszhelyzetekben, Az mTOR aktiválódik és foszforilálódik, ami a downstream célpontjainak foszforilációjához és az autofágia gátlásához vezet. Liu és munkatársai 26 kimutatták, hogy az mTOR-inhibitor, a rapamicin specifikusan kötődik az mTOR-kinázhoz, és gátolja az mTOR-aktivitást, fokozta a podocita autofágiát, és védte a veseműködést. Azt találtuk, hogy az mTOR foszforilációja fokozódott a modellcsoportban, és hogy a Tongluo Digui főzet gátolta ezt a folyamatot, ami arra utal, hogy a Tongluo Digui főzet fokozta a podociták autofágiáját, és gátolja az mTOR jelátviteli útvonal aktiválását.

Összefoglalva, a Tongluo Digui főzet gátolja az autofágiát a podocitákban, védi a glomeruláris podocitákat, fenntartja a glomeruláris filtrációs membrán integritását, csökkenti a 24 órás vizeletfehérje kiválasztását, és késlelteti a DN progresszióját az mTOR aktiváció gátlásával. Ezek az eredmények betekintést nyújtanak a Tongluo Digui főzet DN-ben betöltött védő hatásának további megértéséhez, azonban a mögöttes mechanizmust még tisztázni kell.

mi az a cistanchevesebetegségre

IRODALOM
1 Tesch GH. Diabéteszes nefropátia – ez immunrendszeri rendellenesség? Clin Sci 2017; 131. (16): 2183-2199.
2 Li JJ, Kwak SJ, Jung DS és társai. Podocita biológia diabéteszes nephropathiában. Kidney Int Suppl 2007; (106): S36-S42.
3 Liu N, Xu L, Shi Y, Zhuang S. Podocita autofágia: potenciális terápiás célpont a diabéteszes nephropathia progressziójának megelőzésére. J Diabetes Res 2017; 2017. (4): 1-6.
4 Mizushima N, Komatsu M. Autofágia: sejtek és szövetek felújítása. Cell 2011; 147. (4): 728-741.
5 Tagawa A, Yasuda M, Kume S et al. A károsodott podocita autofágia súlyosbítja a proteinuriát diabéteszes nephropathiában. Cukorbetegség 2016; 65. (3): 755-767.
6 Sun C, Xie QY, Meng QG. A diabéteszes nephropathia TCM-szindróma eloszlási törvényének tanulmányozása. Peking Zhong Yi Yao Da Xue Xue Bao 2015; 38. (4): 266-270.
7 Szkudelski T. Az alloxán és a streptozotocin hatásmechanizmusa patkány hasnyálmirigy B-sejtjeiben. Physiol Res 2001; 50. (6):537-546.
8 Dang WY, Hou LY, Wu HM, Yan XM, Zheng XF, Hao J. A Qingre Lishi Yishen főzet hatékonysága az immunglobulin A glomeruláris fibrózisán A nephropathia patkánymodellben. J Tradit Chin Med 2019; 39. cikk (4): 516-523.
9 Lu MK, Gong XG, Guan KL. mTOR a podocita funkcióban: jó-e a rapamicin a diabéteszes nephropathiára? Cell Cycle 2011; 10. cikk (20): 3415-3416.
10 Hartleben B, Godel M, Meyer-Schlesinger C, et al. Az autofágia befolyásolja a glomeruláris betegségek érzékenységét, és fenntartja a podocita homeosztázist az öregedő egerekben. J Clin Invest 2010; 120. cikk (4): 1084-1096.
11 Sun GD, Li CY, Cui WP, et al. A diabetikus nephropathia kezelésére szolgáló hagyományos kínai orvoslás áttekintése. J Diabetes Res 2016; 2016: 5749857.
12 Zhao WJ, Cai Z, Meng Y et al. Zhang Binghou tápláló vese Yin módszerének alkalmazása krónikus vesebetegség kezelésében. Peking Zhong Yi Yao 2016; 35. (4): 341-343.
13 Duan YF, Zhang HB. Zhang Binghou professzor alkalmazási tapasztalatainak bemutatása. Xin Zhong Yi 2012; 44 (4): 147-149.
14 Yu XJ, Chen SH, Lu GY. A "Ziyin Bushen" teknősbékahéj farmakodinámiájára vonatkozó kutatás felmérése. Dang Dai Yi Xue 2009; 15. cikk (10): 15-17.
15 Pang XX, Tong Y, Li HP, Han JR. A piócával és kivonataival kapcsolatos kutatási eredmények a diabéteszes nefropátia kezelésében. Guang Ming Zhong Yi 2019; 34. cikk (1): 168-171.
16 Zhang ZL, Dong H. A piócával és hatóanyagaival kapcsolatos kutatási eredmények a diabetikus nephropathia kezelésébenZhong Xi Yi Jie He Yan Jiu 2018; 10(02): 106- 110.
17 Dai H, Liu Q, Liu B. A diabéteszes nefropátia podocita-kiürülésének mechanizmusával kapcsolatos kutatási eredmények. J Diabetes Res 2017; 2017: 2615286.
18 Martin CE, Jones N. Nephrin jelátvitel a podocitában: a jelszabályozás frissített képe a hasított membránon és azon túl. Front Endocrinol (Lausanne) 2018; 9:302.
19 Jaakko P, Karl T. A glomeruláris filtrációs gát molekuláris felépítése. Biochem Bioph Res Co 2010; 396. (1): 164-169.
20 Noboru M, Beth L, Ana Maria C, Klionsky DJ. Az autofágia a sejtes önemésztés révén küzd a betegségekkel. Természet 2008; 451(7182): 1069.
21 Lenoir O, Jasiek M, Henrique C és mtsai. Endothel sejt
és a podocita autofágia szinergikusan véd a cukorbetegség által kiváltott glomerulosclerosis ellen. Autofágia 2015; 11. cikk (7): 1130-1145.
22 Ilatovskaya DV, Levchenko V, Lowing A, Shuyskiy LS, Palygin O, Staruschenko A. Podocyte-sérülés diabetikus nephropathiában: a TRPC csatornák angiotenzin Ⅱ-függő aktivációjának következményei. Sci Rep 2015; 5: 17637.
23 Rabanal-Ruiz Y, Otten EG, Korolchuk VI. Az mTORC1 az autofágia fő kapuja. Esszék Biochem 2017; 61 (6): 565-584.
24 Kim YC, Guan KL. mTOR: az autofágia szabályozásának farmakológiai célpontja. J Clin Invest 2015; 125. cikk (1): 25-32.
25 Li XY, Wang SS, Han Z és társai. A triptolid helyreállítja az autofágiát, hogy enyhítse a diabéteszes vesefibrózist a miR-141-3p/PTEN/Akt/mTOR útvonalon keresztül. Mol Ther Nucleic Acids 2017; 9: 48-56.
26 Liu L, Yang L, Chang B, Zhang J, Guo Y, Yang X. A rapamicin protektív hatásai a sejt autofágiára diabéteszes nephropathiában szenvedő patkányok veseszövetében az mTORS6K1-LC3 Ⅱ jelátviteli útvonalon keresztül. Ren Fail 2018; 40. cikk (1): 492-497.