A trichozanthes pépből izolált összetevők fehérítő hatása

Kapcsolatba lépni:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Rongchao Zhang, 1, 2 Xiuqin Hu, 1 Bo Zhang, 1 ZhenWang, 1 Chunxiang Hao, 1 Jie Xin, 1 és Qingmei Guo 2

Absztrakt: A fehérítésA kozmetikai piac fényes jövő előtt áll, és a hagyományos kínai orvoslás tisztán természetes fehérítő termékei mindig is a kutatási gócpontok voltak. Ebben a kutatásban először izolálták és tisztították a kínai orvoslás fehérítő hatóanyagát, a Trichosanthes cellulózt, ésfehérítésmechanizmust tisztázták. Izolálásukra és tisztításukra kromatográfiás módszereket, például szilikagélt, ODS-t és HPLC-t használtak. B16 sejteket használtunk az antioxidáns aktivitás mérésére,tirozinázaktivitás és melanineltávolító aktivitás. Összesen 20 vegyületet izoláltak, köztük p-hidroxi-benzaldehidet (1), szalicilsavat (2), vanillinsavat (3), izovanillinsavat (4), protokatekuátot (5), transz-fahéjsavat (6), {{9 }}kumársav (7), transz-ferulinsav (8), drechslerol-B (9), ciklohexanol-3-palmitát (10), 5-acetoxi-metil-2-furaldehid (11), 5-hidroxi-metil-furfurol (12), dioszmetin (13), apigenin (14), krizoberil (15), luteolin (16), 4'-hidroxi-scutellarin (17), kvercetin (18), 3',{{31} }dihidroxi-7-(-D-glükopiranoziloxi)-4′-metoxi-flavon (19) és ciprofloxacin-7-O- -D-glükozid (20). Közülük a 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 és 20 vegyületek jó antioxidáns javító hatással rendelkeznek; a 3., 4., 5., 6. és 7. vegyületek erős fekete gátlást mutatnak; Az 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 és 20 vegyületek nyilvánvaló tirozin-oxidáz gátló hatással rendelkeznek. Az 1e eredmények megalapozták a Trichozanthes cellulózforrások további fejlesztését és hasznosítását, valamint alapot adnak a természetesfehérítéskozmetikumok.

Cistanche herbaegytermészetes fehérítő összetevő.

1. Bemutatkozás

Trichosanthes kirilowii Maxim. a Cucurbitaceae család évelő kúszónövénye. Gyümölcsét, magjait, héját és gyökerét hagyományos kínai orvoslásként használják. A Trichosanthes pépét hosszú időn keresztül gyakran kidobják a Semen Trichosanthis és a Pericarpium Trichosanthis előállítása és feldolgozása során, ami jelentős hulladékot eredményez. Jelenleg a trichozanthes pépről szóló jelentések főként a cukor, aminosavak, vitaminok és egyéb tápanyagok tartalmi összehasonlítására összpontosítanak [1–4]. Nincs jelentés a trichozanthes cellulóz kémiai összetételéről. Ezért szisztematikusan tanulmányozni kell a pép kémiai összetevőit.

Ugyanakkor a gazdaság rohamos fejlődésével a kozmetikumok nemcsak nagy fogyasztású életmódtermékek, hanem a nők legnépszerűbb "szükségleti cikkévé" is válnak. Sok klasszikus kínai orvoslás könyv vagy materiamedica feljegyezte, hogy a trichozanthes pépnek van funkciójafehérítésés ránctalanító hatások [5–7]. Kutatócsoportunk korábbi eredményei azt mutatják, hogy a trichozanthes pép vizes kivonata magasabb volttirozinázgátló aktivitást mutattak, és a tirozináz gátló arány körülbelül 70 százalék volt. 1közösfehérítésa C-vitamint (VC) és az arbutint használták kontrollanyagként [8]. Előzetesen bebizonyosodott, hogy a Trichosanthes cellulóz kivonata bizonyos fehérítő hatással rendelkezik, mivel gátolja a tirozináz aktivitását. Ezért nagy jelentőséggel bír a Trichozanthes cellulóz kémiai összetevőinek és fehéredési mechanizmusának tanulmányozása.

AzfehérítésA mechanizmus összefoglalható, mivel gátolja a melanin szintézisét és felgyorsítja a melanin transzfert. Az inmelanociták melaninképződésének 1e folyamata a következő:tirozináza tirozint BA polimorflá (DOPA) oxidálja; majd dopakinonná oxidálódik.Egy sor metabolikus reakció után melanin termelődik.A tirozináz az egyetlen sebességkorlátozó enzim a reakciófolyamatban, és aktivitása határozza meg a szintetizálódó melanin mennyiségét. Ha a tirozináz aktivitás fokozódik, a melaninszintézis fokozódik; ha a tirozináz aktivitás gátolt, a melanin szintézis csökken [9]. A tirozináz 1e aktív centrumának kettős réz-aktív helye van, és mindegyik rézion 3, 1 vagy 2 vegyértékkel rendelkező hisztidin-maradékkal kombinálódik. Ezért az antioxidáns hatású redukció kölcsönhatásba léphet a tirozináz aktív helyén lévő rézatommal, vagy csökkentheti a melaninszintézis közbenső terméket, hogy gátolja a melanin képződését [10, 11]. Ezenkívül az érett melanociták keratinocitákba való átvitelének gátlása szintén szerepet játszhat a fehérítésben.

A hatás meghatározására sejttenyésztési technológiát alkalmaznakfehérítésaktív összetevőkettirozinázaktivitás és melanintermelés a melanocitákban in vitro. Az 1e egérmelanoma sejtvonal (B16 sejtek) egér bőrmelanóma sejtekből származik, és alapvető szerkezete, különösen a melanin szintézis tekintetében, alapvetően megegyezik a humán normál melanoma sejtekkel. Mivel nagyon nehéz humán primer melanoma sejteket tenyészteni, az egérmodell tesztsejtként használható afehérítéshatóanyagok. Ezért B16 sejteket használtunk az antioxidáns aktivitás, tirozináz aktivitás és melanineltávolító aktivitás mérésére, valamint előzetesen meghatároztuk a fehérítő aktív komponenseket és a kapcsolódó mechanizmust. Az 1ersults megalapozta a Trichosanthes cellulózforrások további fejlesztését és hasznosítását, valamint alapot ad a természetes fehérítő kozmetikumok fejlesztéséhez.

2. Kísérletek

2.1. Anyagok.

A Trichosanthes trichosanthis-t a Hebao gyógynövény-ültetőbázisról gyűjtötték össze Pinyinben, Jinan államban. Az 1e mintákat QingmeiGuo professzor, a Shandong Hagyományos Kínai Orvostudományi Egyetem professzora azonosította. A héj és a magok eltávolítása után megkaptuk a gyümölcs pép részét. A fagyasztva szárítás után a pépet összetörték, összekeverték, és végül exszikkátorba helyezték további felhasználásra.

friss ciszternaval velechinakozidhatások

2.2. Sejt életképesség.

A B-16 sejteket (egér melanómasejteket) a KeyGEN-től vásároltuk, és 10 százalék borjúmagzati szérummal (FBS) kiegészített DMEM táptalajban tartottuk 37 fokon, párásított, 5 százalékos CO2-t tartalmazó atmoszférában. 1en, a B-16 sejteket 96-lyukú lemezekre oltottuk (10 × 104 sejt/lyuk) 24 órás inkubációig.

2.3. Különböző kivonatok készítése.

A Trichosanthes kirilowii pép alapanyaga 4,5 kg volt. 1e pépet 10-szeres mennyiségű 95 százalékos etanolba áztattunk háromszor. Az 1e extraktumokat egyesítettük és körülbelül 3,0 literre betöményítettük. Az etil-acetátos kivonatot úgy kaptuk, hogy az etanol-extraktumot 15 liter vízben diszpergáltuk, majd etil-acetáttal extraháltuk, amíg az extraktum színtelenné vált. Az 1e kivonatokat egyesítettük és csökkentett nyomáson betöményítettük.

Az etil-acetátos kivonatot szilikagéllel (100–200 mesh) 1:2 arányban összekevertük (kivonat: szilikagél, v/ v) Az 1 oldószert elpárologtattuk, és a gélt lefoglaltuk. 1e üvegkromatográfiás oszlop (8{{30}} mm × 1200 mm) 200–300 mesh szilikagéllel és D101-gyel volt megtöltve. makropórusos gyantával, majd az oszlopot etil-acetáttal, petroléterrel (10%, 25%, 50%, 75% és 100%) és metanollal, etil-acetáttal (5%, 10%, 25%, 50%) eluáltuk. , 75 százalék és 100 százalék ), az összes áramlás összegyűjtéséhez. Végül az egyes frakciókat összegyűjtöttük, és a következő koncentrációkra állítottuk be: 0,003125 mg/ml, 0,00625 mg/ml, 0,0125 mg/ml, 0,025 mg/ml, 0,05 mg/ml, 0,1 mg/ml, 0,25 mg/ml, 0. ml, 1,0 mg/ml és 2,0 mg/ml, majd a tenyésztett sejtek feldolgozására használjuk. A kezelés végén 20 μl MTT-oldatot (5 mg/ml) adtunk minden egyes lyukhoz. Az 1e sejteket 20 percig 37 fokon inkubáltuk. 1 felülúszót eldobtunk, és 100 μl DMSO-t adtunk minden egyes lyukba. Az 1e abszorbanciát 490 nm-en mértük. 1 kísérletet háromszor megismételtünk. Az 1e túlélési arányt a következőképpen számítottuk ki:

túlélési arány százalék=(kísérleti csoport üres csoport)/(kontroll csoport - üres csoport) × 100 százalék .

Az egyes frakciók optimális koncentrációját (C1) a túlélési arány és az egyes frakciók koncentrációja közötti funkcionális összefüggés alapján számítottuk ki. A C1-et 2, 4, 6 és 8-szorosra hígítottuk, hogy megkapjuk a C2, C3, C4 és C5 koncentrációkat. A pép 1e különböző kivonatait az 1. táblázat mutatja be.

1. táblázat: Trichosanthes pép poláris kivonata és az optimális koncentráció.

2.4. Fehérítő kísérlet

2.4.1. Antioxidáns teszt.

A sejtek életképességének meghatározására MTT-tesztet alkalmaztunk (MTT Kit, Kaiji Biology). 1en, B-16 sejteket oltottunk be 96-lyukú lemezekre (10 × 104 sejt/lyuk) 24 órán keresztül, és különböző kivonatokkal vagy vegyülettel kezeltük 24 órán keresztül. A kezelés után a táptalajt eldobtuk, és kétszer mostuk PBS-sel. 1en 0,05% H2O2-t adtunk hozzá, és a sejteket 4 órán át tenyésztettük. Ezt követően a B-16 sejteket 20 µl MTT oldatban (5 mg/ml) 37 fokon 4 órán át inkubáltuk. 1en, a tenyészet felülúszóját eltávolítottuk, és a maradékot 100 µl DMSO-ban oldottuk. Az 1e abszorbanciát 490 nm-en detektáltuk mikrolemez-leolvasóval (Tecan Trading AG). 1e kísérletet végeztünk párhuzamosan 3 alkalommal.

2.4.2. A melanin termelés gátlása.

A melanin termelést a melanin tartalmú sejtek NaOH pirolízissel történő kimutatásával határoztuk meg [12]. A sejteket 96-lyuktenyésztő lemezekre oltottuk 24 órán keresztül 10 × 104 sejt/lyuk sejtsűrűséggel.1en, a sejteket különböző kivonatokkal vagy vegyülettel kezeltük 24 órán át. Ezt követően a sejttenyészet felülúszóját (300 µl) eltávolítottuk, és a maradékot NaOH-ban (1 ml, 1,0 mol/l) 24 órán át szobahőmérsékleten feloldottuk. Az 1eabszorbanciát 475 nm-en mértük mikroplatereader (Tecan Trading AG) segítségével. Az 1e kísérleteket párhuzamosan 3 ismétléssel végeztük. Az 1e IC50-értéket GraphPad Prism 5 szoftverrel (GraphPad Software, Inc., San Diego, California) határoztuk meg, és arbutint használtunk pozitív kontrollként (IC50 =15,6 µL).

2.4.3. A tirozináz aktivitás meghatározása.

A sejttenyészet felülúszóját eltávolítottuk, a maradékot Tritonx-100-ben (90 µl) éstirozináz(10 µL, 1,0 mg/ml, Sigma, T3824 25ku). Összekeverés után a keveréket 37 °C-on 30 percig inkubáltuk. Az 1e abszorbanciát 475 nm-en mértük mikrolemez-leolvasóval (Tecan Trading AG). 1e kísérletet végeztünk párhuzamosan 3 alkalommal. Az 1e IC50 értéket GraphPad Prism 5 szoftverrel (GraphPadSoftware, Inc., San Diego, California) határoztuk meg, és pozitív kontrollként arbutint használtunk (IC50 =15,6 µL).

2.5. Kivonás és izolálás. Az etil-acetátos kivonatot metanolban feloldottuk, és az oszlopot 200-300 mesh szilikagéllel töltöttük meg, amelyet petroléterrel ekvilibráltunk. 1en, gradiens elúció, amely petrolétert és etil-acetátot tartalmaz 2:1, 1:1 és 1:2 arányban; etil-acetát; etil-acetát és metanol 2:1, 1:1 és 1:2 arányban; és metanolt használtunk a vékonyréteg-kromatográfiával együtt, így az A (11,5 g), B (10,4 g), C (12,1 g), D (5,2 g) és E (6,1 g) vegyületet kaptunk.

Az A-t poliamid oszlopkromatográfiával választottuk el, eluáló oldószerként diklór-metánt és metanolt 2:1, 1:1 és 1:2 arányban alkalmazva. Az 1e eluátumot TLC-vel követtük. Az azonos retenciós faktorral (rf ) rendelkező foltokat egyesítettük, és A1-et és A2-t kaptunk. Az 1en A1-et vékonyrétegkromatográfiával állítottuk elő, diklór-metánt és metanolt 1:1 arányban használva előhívószerként, és többször tisztítottuk géloszlopon. Végül az 1. vegyületet (17 mg) és a 2. vegyületet (27 mg) kaptuk. Az A2-t szilikagél oszlopkromatográfiával tisztítottuk, eluálószerként diklór-metánt és metanolt használtunk 1:1 és 1:2 arányban. 3. vegyületet (11 mg), 4. vegyületet (12 mg) és 5. vegyületet (23 mg) kaptunk. A B-t fordított fázisú C18 közepes nyomású kromatográfiával (RP-C18) választottuk el, metanol és víz gradiens elúcióval a következőképpen: 0% ,10% , 15% , 20% , 25% , 30% , 35 százalék , 40 százalék , 50 százalék , 75 százalék , 90 százalék és 100 százalék . Az 1e áramlási sebesség 10 ml·perc-1 volt. Az azonos rf-vel rendelkező 1e áramlási frakciókat egyesítettük, és a B1 és B2 frakciókat kaptuk. A B1-et ismételten tisztítottuk géloszlopon, eluáló oldószerként metanolt használva. Ismételt eluálás után 24 mg 7. vegyületet (21 mg) és 8. vegyületet (18 mg) kaptunk. A B2-t géloszlopon és metanollal tisztítjuk, így 11 mg 9. vegyületet kapunk. A C-t RP-C18-cal választottuk el, és metanollal és vízzel eluáltuk 10 ml·perc-1 áramlási sebesség mellett. Az azonos rf-értékkel rendelkező 1e áramlási frakciókat egyesítjük, és C1, C2 és C3-at kapunk. A C1-et géloszlopon állítottuk elő, és metanollal eluáltuk, így a 10. vegyületet (13 mg) kaptuk. A C2-t szilikagél oszlopon választottuk el, és etil-acetáttal és metanollal eluáltuk 2:1, 1:1 és 1:2 arányú gradienselúcióval. A C2-t preparatív folyadékfázisú extrakcióval tisztítottuk, és a 11. vegyületet (15 mg) és a 12. 14 mg-ot kapunk. A C3-at poliamid oszlopon választottuk el, metanollal és vízzel eluáltuk, és HPLC-vel tisztítottuk. 13 (34 mg), 14 (42 mg) és 15 (38 mg) vegyületet kaptunk. A D-t RP-C18-cal elválasztottuk és metanollal és vízzel eluáltuk.1e áramlási sebessége 10 ml·perc-1 volt. A 16 (36 mg), 17 (19 mg) és 18 (37 mg) vegyületet HPLC-vel kaptuk. A 19. (29 mg) és a 20. vegyületet (34 mg) gradiens elúcióval kapjuk etil-acetát és metanol 1:1 és 1:2 arányú elegyével, majd 100%-os metanollal szilikagél oszlopon.

herba epimedium sagittatum a bőrön

3. Eredmények és megbeszélés

3.1. Aktív kivonatok meghatározása (E1–E11).

Mindegyik kivonat 1e optimális koncentrációját (nevezetesen C1) kiszámítottuk és az 1. táblázatban mutatjuk be. 1e antioxidáns kísérlet azt mutatja, hogy minden kivonat rendelkezik antioxidáns javító hatással, de a VC-vel összehasonlítva mindegyik csoport antioxidáns hatása gyenge. Az E1, E3, E4, E7 és E11 1eantioxidáns aktivitása csökkent a koncentráció növekedésével, amint az 1. ábrán látható. Az 1e melanininhibíciós teszt kimutatta, hogy a Trichosanthes kirilowii pép összes poláris komponense gátolta a melanin szintézist. Közelebbről, a melanin gátlási aránya szignifikánsan magasabb volt az E2, E3 és E4 esetében, mint a pozitív kontroll arbutin esetében, amint az a 2. ábrán látható.tirozinázaktivitás azt mutatja, hogy a Trichosanthes kirilowi ​​pépében lévő összes poláris komponens gátolta a tirozináz aktivitást, és a gátlási tendencia hasonló volt a melanin gátláséhoz. A tirozináz aktivitás 1e gátlása szignifikánsan magasabb volt az E2, E3, E4 és E8 esetében, mint a pozitív kontrollé. Általában a petroléter-kivonatok alacsony gátló hatást fejtenek ki a tirozinázra. Az etil-acetátból származó 1e-kivonatok erősen gátolják a tirozinázt, különösen az etil-acetát poláris komponenseit. Az n-butanolból származó 1e kivonatok szintén erős gátló hatással rendelkeznek a tirozinázra, amint az a 3. ábrán látható.

3.2. Monomer komponensek izolálása és azonosítása.

20 vegyületet választottunk el szilikagél és ODS kromatogram oszlopokkal, valamint preparatív HPLC-vel. NMR és MS adatok elemzése alapján ezek szerkezetét tisztáztuk.1e 20 vegyületet a 2. táblázat, a monomerek specifikus analitikai adatait pedig az 1. függelék tartalmazza.

3.3. Hatékony vegyületek validálási elemzése

3.3.1. Antioxidáns vegyületek validálási elemzése.

Az E1, E2, E3, E4 és E5 antioxidáns hatású. A fenti komponensekből izolált 1e fő vegyület a következő volt:drechslerol-B (9-es vegyület), ciklohexanol-3-palmitát (10-es vegyület), 5-acetoxi-metil-2-furaldehid (11-es vegyület), 5-hidroxi-metil-furfurál 12. vegyület), dioszmetin (13. vegyület), apigenin (14. vegyület), krizoberil (15. vegyület), luteolin (16. vegyület), 4'-hidroxi-scutellarin (17. vegyület), kvercetin (18. vegyület), 3', {{ 25}}a fő vegyületek a glikozidok voltak, ami azt jelzi, hogy a glikozidok jó antioxidáns hatással rendelkeznek. Fenolsavak, például 5-acetoxi-metil-2-furaldehid (11. vegyület), 5-hidroxi-metil-furfurol (12. vegyület), dioszmetin (13. vegyület), apigenin (14. vegyület), krizoberil (15. vegyület) ,luteolin (16-os vegyület), 4'-hidroxi-scutellarin (17-es vegyület), kvercetin (18-as vegyület) és 3'-5-dihidroxi-7-(-Dglukopiranozil-oxi)-4'-metoxi-flavon, jó antioxidáns hatással is rendelkeznek a fenolos hidroxilcsoportnak és a telítetlen kettős kötéseknek köszönhetően [26, 27]. Az 1e eredmények a 4. ábrán láthatók.

4. ábra: Trichosanthes kivonatokból származó különböző vegyületek antioxidáns kísérletének sejtek túlélési aránya ( százalék )

3.3.2. A melanin-gátló vegyületek validációs elemzése.

Az E11, E12, E13, E16, E17 és E18 jó gátló hatással bír a melaninszintézisre. A fenti komponensekből izolált 1e fő vegyületeket a 2. táblázat mutatja be. A 2.4.2. szakaszban leírt módszer szerint meghatároztuk az egyes vegyületek melanin szintézisre gyakorolt ​​hatását. Mindegyik vegyületet a következő koncentrációkban értékeltük: 1000 ug/ml, 800 ug/ml, 400 ug/ml, 200 ug/ml és 100 ug/ml. Minden mérést három párhuzamosban végeztünk, és kiszámítottuk a melaninszintézis gátlásának mértékét.

Protokatekuát (5. vegyület), 5-acetoxi-metil-2- furaldehid (11. vegyület), 5-hidroxi-metil-furfurol (12. vegyület), dioszmetin (13. vegyület), p-hidroxi-benzaldehid (1. vegyület), szalicilsav (2. vegyület), vanillinsav (3. vegyület), izovanillinsav (4. vegyület), transz-fahéjsav (6. vegyület), 4-kumársav (7. vegyület), apigenin (14. vegyület), krizoberil (15. vegyület) ), luteolin (16. vegyület), 4'-hidroxi-scutellarin (17. vegyület), kvercetin (18. vegyület), 3', 5-dihidroxi-7-( -D-glükopiranoziloxi)-4′ -metoxi-flavon (19-es vegyület), ofloxacin-7-O- -D-glükozid (20-as vegyület) gátolhatja a melanintermelést [28]. Különösen a vanillinsav (3. vegyület), az izovanillinsav (4. vegyület), a protokatekuát (5. vegyület), a transz-fahéjsav (6. vegyület) és a 4-kumársav (7. vegyület) rendelkezik erős melaningátlással. Az 1e eredményeket az 5. ábra mutatja.

3.3.3. A tirozináz aktivitást gátló vegyületek ellenőrzése és elemzése.

Az E2, E3, E4, E7, E8 és E9 jó gátló hatással bírtirozináztevékenység. A fenti komponensekből izolált 1e fő vegyületek a 2. táblázatban láthatók. A 2.4.3. szakaszban bemutatott módszer szerint az arbutint használtuk kontrollként, és a vegyület koncentrációja 1000 µg/mL, 800 µg/mL, 400 µg/mL volt. 200 µg/ml és 100 µg/ml. Mindegyik mérést 5 alkalommal végeztük el, és kiszámítottuk a tirozináz gátlási arányát. Az 1e eredmények a 6. ábrán láthatók.

Az 1e eredmények azt mutatják, hogy dioszmetin (13. vegyület), apigenin (14. vegyület), krizoberil (15. vegyület), luteolin (16. vegyület), 4'-hidroxi-cutellarin (17. vegyület), kvercetin (18. vegyület), 3',{{10} }dihidroxi-7-(-D-glükopiranoziloxi)-4′-metoxi-flavon (19. vegyület), ciprofloxacin-7-O- -D-glükozid (20. vegyület), p-hidroxi-benzaldehid (1. vegyület), szalicilsav (2. vegyület), vanillinsav (3. vegyület), izovanilinsav (4. vegyület), protokatekuát (5. vegyület), transz-fahéjsav (6. vegyület), 4-kumársav (7. vegyület) ), és a transz-ferulinsav (8. vegyület) mind nyilvánvalóaktirozinázgátló aktivitások.

A Cistanche növény gátolja a tirozináz aktivitást.

Kattintson a képre és tudjon meg további részleteket.

A benzolgyűrűn lévő hidroxil-szubsztituált vegyületek, például p-hidroxi-benzaldehid (1. vegyület), szalicilsav (2. vegyület), vanillinsav (3. vegyület), izovanilsav (4. vegyület), protokatekuát (5. vegyület), transz-fahéjsav ( 6. vegyület), 4-kumársav (7. vegyület), transz-ferulinsav (8. vegyület) és flavonoidok erős tirozinázgátlást mutattak, és a para-szubsztituált vegyületek gátlási aránya szignifikánsan magasabb volt, mint az orto-szubsztituált vegyületeké . Például a p-hidroxi-benzaldehid gátló aktivitása szignifikánsan nagyobb volt, mint a szalicilsavé, és a vanillinsav gátló aktivitása szignifikánsan nagyobb, mint az izovanillisavé. Ezenkívül a p-hidroxi-benzaldehid gátló aktivitása szignifikánsan magasabb volt, mint a szalicilsav, a vanillinsav, az izovanilinsav és a protokatekuát. Ennek oka az lehet, hogy a nukleofil csoportok az aktív központ körültirozináz, mint például az -SH, -NH2 és -OH, elfoglalják az aktív centrum körüli teret, és így megakadályozzák, hogy a tirozin megtámadja az aktív centrumot. Végül a melanin szintézise gátolt [28]. Az o-dihidroxi-tartalmú vegyületek 1e gátló hatása erősebb volt, mint a para-hidroxi-vegyületeké, a protokatehuáté pedig szignifikánsan nagyobb volt, mint a vaníliássavé. 1e fenti jelenségek a flavonoidokban is léteznek. A 7 és 4′ hidroxilcsoportot tartalmazó flavonoidok 1 gátlási aránya szignifikánsan magasabb volt, mintha a 7 és 4′ hidroxilcsoportot kicserélnénk. Például a krizoberil gátló aktivitása szignifikánsan magasabb volt, mint a dioszmetiné, míg a dioszmetin gátló aktivitása magasabb volt, mint a 3′,5-dihidroxi-7-(-D-glükopiranoziloxi)-4 ′- metoxi-flavon és ciprofloxacin-7-O- -D-glükozid. A 3-hidroxit tartalmazó flavonoidok 1 gátlási aránya szignifikánsan magasabb volt, mint a 3-hidroxi nélküli vegyületeké, vagy ha a 3-hidroxit helyettesítették. Például a kvercetin gátló aktivitása szignifikánsan magasabb volt, mint a 4'-hidroxi-scutellariné, de a 4'-hidroxi-scutellarin gátló aktivitása magasabb volt, mint a kvercetin-3-o-glükozidé. Ezenkívül a koellin gátló hatása nagyobb, mint az apigeniné, de alacsonyabb, mint a luteolé. Feltételezhető, hogy a B-gyűrű szubsztituensei, különösen a hidroxilcsoport, fokozhatják atirozinázgátló aktivitással, a B-gyűrű orthodihidroxi-csoportja pedig nagyobb gátló hatással [29].