huNyelv
Haza / Tudás / Tartalom

Tudás

A Plumbagin elnyomja az MSH ​​által kiváltott melanogenezist a B16F10 egér melanoma sejtekben a tirozináz aktivitás gátlásával 2. rész

May 09, 2023

3. Megbeszélés

A plumbagin egy növényi eredetű másodlagos metabolit, és számos biológiai funkcióval rendelkezik, beleértve a gyulladáscsökkentő, rákellenes, antiallergiás és antibakteriális hatásokat [8,9]. Nem ismert azonban, hogy a plumbagin gátló hatással volt-e a hiperpigmentációhoz és a melanomához kapcsolódó melanogenezisre. Ebben a tanulmányban kimutattuk, hogy a plumbagin erősen gátolja a melanogenezist a B16F10 melanomasejtekben, és ez a munka lehetőséget teremthet a plumbagin gyulladáscsökkentő, allergiaellenes, antibakteriális és anti-melanogenezis hatásaira épülő bőrápoló kozmetikumok kifejlesztésére.

A vonatkozó tanulmányok szerint a cisztán egy közönséges gyógynövény, amelyet "az életet meghosszabbító csodanövényként" ismernek. Fő összetevője a cistanozid, amely különféle hatásokkal rendelkezik, mint például antioxidáns, gyulladáscsökkentő és immunfunkciót serkentő. A cistanche és a bőrfehérítés közötti mechanizmus a cistanche glikozidok antioxidáns hatásában rejlik. Az emberi bőrben a melanin a tirozin tirozináz által katalizált oxidációjával keletkezik, az oxidációs reakcióhoz pedig oxigén részvétele szükséges, így a szervezetben lévő oxigénmentes gyökök a melanintermelést befolyásoló fontos tényezővé válnak. A Cistanche cisztanozidot tartalmaz, amely antioxidáns, és csökkentheti a szabad gyökök képződését a szervezetben, így gátolja a melanintermelést.

cistanche nedir

Kattintson a Rou Cong Rong előnyei a fehérítéshez elemre

További információért:

david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

Mivel a melanogenezis felszabályozása gyakran megfigyelhető rosszindulatú melanomában, ahol a vérben, valamint a daganatos szövetekben túlzottan expresszált tirozináz szint van, nyilvánvaló, hogy a melanogenezis a rosszindulatú melanómák kemoterápiájának potenciális célpontja [1]. Jelen tanulmányban azt találtuk, hogy a plumbagin közvetlenül gátolja a tirozináz aktivitást, függetlenül a melanogenezishez kapcsolódó transzkripciós mechanizmusoktól (6. ábra). Ezért eredményeink arra utalnak, hogy a plumbagin a rosszindulatú melanoma kezelésének megelőző és terápiás stratégiájának potenciális összetevője lehet. Valójában a plumbagin melanoma-terápiára gyakorolt ​​melanoma-ellenes, kemoszenzitizáló és sugárérzékenyítő hatásairól számoltak be [17–21].

cistanche gnc

A plumbagin rák- és gyulladáscsökkentő hatásaival foglalkozó korábbi vizsgálatokban körülbelül 5–10 µM plumbagint (magasabb, mint a jelen tanulmányban használt koncentráció) alkalmaztak in vitro modellekben [17,22 ,23]. Ezért a plumbagin toxikus hatását vizsgáltuk proliferatív sejtekben, beleértve a normál keratinocitákat (HaCaT) és a lencse hámsejteket (B3), amelyeket a bőrápoló kozmetikumok károsíthatnak. Eredményeink azt mutatták, hogy az alacsonyabb koncentrációk, körülbelül 0,5–1 µM plumbagin nem toxikusak a normál keratinocitákra és a lencse hámsejtekre, de elég hatékonyak a tirozináz aktivitás és a melanin szintézis csökkentésére. Ezenkívül azt is megállapítottuk, hogy a plumbagin hatékonyabban gátolja a melanogenezist, mint az 1 mM arbutin vagy a 0,2 mM kojinsav, amelyek jól ismert bőrfehérítő szerek. Ezek az eredmények azt sugallják, hogy a plumbagin biztonságosan használható bőrfehérítő kozmetikumok fejlesztéséhez.

Jelen tanulmányunkban a plumbagin tirozináz enzimreakcióra gyakorolt ​​gátló hatásait vizsgáltuk L-DOPA oxidáción alapuló sejtes és sejtmentes tirozináz aktivitási vizsgálatokkal. Ennek ellenére nem javasoltunk pontos molekuláris mechanizmust arra vonatkozóan, hogy a plumbagin hogyan gátolja a tirozináz aktivitást. Ezt a mechanizmust tovább kell vizsgálni annak megállapítására, hogy a plumbagin közvetlenül kölcsönhatásba lép-e a tirozinázzal és gátolja-e annak oxidáz aktivitását, vagy vannak-e közvetett hatásai, amelyek a tirozináz aktivitás csökkenéséhez vezetnek.

4. Anyagok és módszerek

4.1. Reagensek és antitestek

A gombákból tisztított plumbagint, -MSH-t (M4135), arbutint (A4256), kojsavat (K3125), L-DOPA-t (333786) és tirozinázt (T3824) a Sigma-Aldrich-től (St. Louis, MO, USA) szereztük be. MITF (#12590), p-AKTS473 (#4060), p-AKTT308 (#13038), p-CREB (#9198), p-ERK1/2 (#4370), ERK1/2 (#9102) elleni antitestek, A H2AX-t (#9718), a PARP-t (#5625) és a kaszpázt-3 (#9665) a Cell Signaling Technology-tól (Danvers, MA, USA) vásároltuk. A tirozinázt (sc-7833) és a -tubulint (sc-9104) a Santa Cruz Biotechnology-tól (Dallas, TX, USA) vásároltuk.

cistanche norge

4.2. Sejtkultúra és sejtéletképességi vizsgálat

A B16F10 (egér melanóma sejtek), B3 (humán lencse epiteliális sejtek) és HaCaT (humán keratinocita) sejteket Dulbecco módosított Eagle tápközegében (DMEM) tenyésztettük, amelyet 10 százalék borjúmagzati szérummal és 25 mM glükózzal egészítettünk ki. A sejteket 95% levegőt és 5% CO2-t tartalmazó párásított atmoszférában inkubáltuk 37 °C-on. Az életképesség mérésére a sejteket dimetil-szulfoxidban (DMSO) oldott különböző koncentrációjú plumbaginnal 48 vagy 72 órán át inkubáltuk. Inkubálás után a tenyésztett sejteket PBS-sel mostuk, majd 0,5%-os kristályibolya festőoldattal inkubáltuk 20 percig szobahőmérsékleten. Az optikai sűrűség mérésére a megfestett sejteket 1%-os nátrium-dodecil-szulfát (SDS) oldattal inkubáltuk 15 percig szobahőmérsékleten, majd minden egyes lyuk optikai sűrűségét 570 nm-en (OD570) mértük egy abszorbancia-leolvasóval (BioTek, Winooski, VT, USA).

4.3. Immunblot vizsgálat

A tenyésztett sejteket 1% IGEPAL (oktil-fenoxi-polietoxi-etanol), 150 mM NaCl, 50 mM Tris-HCl (pH 7,9), 10 mM NaF és lízispufferben lévő proteáz inhibitor koktél alkalmazásával lizáltuk. A fehérjemintákat nátrium-dodecil-szulfát-poliakrilamid gélelektroforézissel (SDS-PAGE) választottuk el, majd az elválasztott fehérjéket polivinilidén-difluorid (PVDF) membránra vittük át (Millipore, Billerica, MA, USA). A membránokat egy éjszakán át elsődleges antitestekkel (1:1000) 4 ◦C-on, majd HRP-vel konjugált másodlagos antitestekkel (1:10 000) 1 órán át szobahőmérsékleten inkubáltuk. A fehérjéket ECL Prime kit (GE Healthcare Pittsburgh, PA, USA) segítségével tettük láthatóvá.

4.4. Az intracelluláris és extracelluláris melanintartalom mérése

A melanintartalom meghatározása és mennyiségi meghatározása egy korábban leírt módszerrel történt, kis módosítással [2,24]. A melanintartalom elemzéséhez a B16F10 sejteket fenolvörös-mentes DMEM-ben tenyésztettük, amely 10% magzati szarvasmarha szérumot tartalmazott. A B16F10 sejteket -MSH kezeléssel tenyésztettük plumbagin nélkül vagy jelenlétében 3 vagy 4 napig. A tenyésztett sejteket vagy tápközeget összegyűjtöttük, és a pelleteket 10% DMSO-t tartalmazó 1 N NaOH-ban oldottuk 80 °C-on 1 órán át. A melanintartalmat abszorbancia-leolvasóval mértük 475 nm-en (OD475), majd a melanintartalmat a celluláris fehérjekoncentrációra normalizáltuk.

does cistanche work

4.5. RNS izolálás és kvantitatív RT-PCR

A teljes RNS-t a B16F10 sejtekből TRIzol (Invitrogen, Waltham, MA, USA) segítségével extraháltuk, és 2 µg teljes RNS-t használtunk fel a cDNS szintézishez egy nagy kapacitású cDNS reverz transzkripciós kit (Applied Biosystems, Waltham, MA, USA) segítségével. A kvantitatív PCR-t SYBR Green PCR Master Mix (Applied Biosystems) segítségével végeztük. A PCR primerek szekvenciája (50-30 µm) a következő volt: TCAAGTTTCCAGAGACGGGT és CATCATCAGCCTGGAATCAA a MITF-hez; ATAGGTGCATTGGCTTCTGG és TCTTCACCATGCTTTTGTGG a TYR-hez; CATTTCCAG CTGGGTTTCTC és TGGTCTGTGAATCCTTGGAA a TYRP1-hez.

4.6. Celluláris tirozináz aktivitási vizsgálat

A celluláris tirozináz aktivitást egy korábban leírt módszerrel, módosítással határoztuk meg [25,26]. A tenyésztett B16F10 sejteket -MSH-val inkubáltuk plumbagin nélkül vagy jelenlétében, majd a sejteket mostuk és lizáltuk 1% nátrium-dezoxikolátot és 0,5% Triton X{{8}-t tartalmazó PBS-sel. }. A fehérjekoncentráció meghatározása után 50 µg fehérjét 2,0 mM L-DOPA-val és 0,1 M PBS-sel (pH 6,8) inkubáltunk 1 órán át 37 °C-on. Az L-DOPA oxidációját 475 nm-en (OD475) mértük abszorbancia-leolvasóval. Az aktivitást a következő képlettel mértük: tirozináz aktivitás ( százalék )=(OD475 a minta/OD475 a kontroll) × 100.

4.7. Sejtmentes tirozináz aktivitási vizsgálat

A plumbagin tirozináz aktivitásra gyakorolt ​​gátló hatásának meghatározására tisztított gomba tirozinázt 2 órán át inkubáltunk 0,1 M PBS-t (pH 6,8) és 2 mM L-DOPA-t tartalmazó reakcióelegyben plumbagin nélkül vagy jelenlétében. . Az L-DOPA dopakrómmá való oxidációját 475 nm-en (OD475) mértük abszorbancia-leolvasóval. Az aktivitást a következő képlettel mértük: tirozináz aktivitás ( százalék )=(OD475 a minta/OD475 a kontroll) × 100.

4.8. DPPH gyökfogó aktivitási vizsgálat

A plumbagin gyökfogó aktivitásának meghatározásához {{0}},2 mM DPPH metanolos oldatot készítettem és használtuk. Minden mintát desztillált vízzel hígítottunk 0,1, 0,2, 0,5, 1, 2 és 5 mg/ml (plumbagin) vagy { {13}}.005, 0.01, 0,05, 0,1, 0,2 és 0,5 mg/ml (C-vitamin). A reakció után az optikai sűrűséget (OD) 517 nm-en (OD517) mértük egy abszorbancia-leolvasóval. A szabad gyökfogó aktivitást a következő képlettel számítottuk ki: DPPH gyökfogó aktivitás ( százalék )=10 − ((ODs/ODc) × 100), ahol az ODs a minták abszorbanciáját jelenti, az ODc pedig a minták abszorbanciáját jelenti. járművezérlés.

4.9. Statisztikai analízis

Minden adatot párosítatlan Student-féle t-teszttel elemeztünk két kísérleti összehasonlításhoz, valamint egyutas varianciaanalízist (ANOVA) Tukey post hoc tesztjével Prism használatával (GraphPad Software Inc., La Jolla, CA, USA). Az adatokat átlag ± standard deviáció (SD) formában adjuk meg. Az átlagértékek közötti különbségeket statisztikailag szignifikánsnak tekintettük, ha a kapcsolódó p-érték kisebb volt, mint 0,05.

5. Következtetések 

A tanulmány fő megállapításai az, hogy a plumbagin (i) elnyomja az -MSH által kiváltott melaninszintézist a tirozináz aktivitás gátlásával; (ii) nem befolyásolja a MITF-hez kapcsolt transzkripciós gépezetet és jelátviteli kaszkádokat, beleértve a melanogenezishez kapcsolódó AKT és ERK1/2 aktiválást; és (iii) nem okoz toxicitást normál keratinocitákban (HaCaT) és lencse epiteliális (B3) sejtekben, ha koncentrációja 5 µM-nál kisebb volt. Összességében a plumbagin megszünteti az -MSH által kiváltott melaninszintézist azáltal, hogy gátolja a tirozináz aktivitást, függetlenül a CREB-MITF transzkripciós tengelyétől. Ezek az eredmények tehát egy ígéretes és biztonságos természetes termékre utalnak, a plumbagin a hiperpigmentáció csökkentésére bőrfehérítő kozmetikumok fejlesztésében történő felhasználásával.

cistanche and tongkat ali reddit

Köszönetnyilvánítás:Ezt a munkát a Konkuk Egyetem támogatta 2016-ban.
A szerző hozzájárulásai:Ji-Hong Lim kigondolta és megtervezte a kísérleteket; Taek-In Oh, Jeong-Mi Yun, Eun-Ji Park és Young-Seon Kim végezte a kísérleteket; Ji-Hong Lim, Taek-In Oh és Yoon-Mi Lee elemezte az adatokat; Ji-Hong Lim és Yoon-Mi Lee írta a kéziratot.
Összeférhetetlenség:A szerzők nem nyilatkoznak összeférhetetlenségről.

Rövidítések

-MSH alfa-melanocita-stimuláló hormon
TYR tirozináz
L-DOPA L-3,4-dihidroxi-fenilalanin
MITF mikroftalmia-asszociált transzkripciós faktor
TYRP1 tirozinázzal rokon fehérje 1
CREB cAMP válaszelemkötő fehérje
PKA protein kináz A
ERK1/2 extracelluláris szignál által szabályozott kináz 1/2

Hivatkozások

1. Riley, PA Melanogenezis és melanoma. Pigment Cell Res. 2003, 16, 548–552. [CrossRef] [PubMed]

2. Bae, JS; Han, M.; Yao, C.; Chung, JH A chaetocin gátolja az IBMX által kiváltott melanogenezist a B16F10 egér melanoma sejtekben az ERK aktiválásával. Chem. Biol. Egymásra hat. 2016, 245, 66–71. [CrossRef] [PubMed]

3. D'Mello, SA; Finlay, GJ; Baguley, Kr. e. Askarian-Amiri, ME Jelátviteli útvonalak a melanogenezisben. Int. J. Mol. Sci. 2016. [CrossRef] [PubMed]

4. Kim, HJ; Yonezawa, T.; Teruya, T.; Woo, JT; Cha, BY Nobiletin, egy polietoxi-flavonoid, csökkentette az endotelin-1 és az SCF által kiváltott pigmentációt az emberi melanocitákban. Photochem. Photobiol. 2015, 91, 379–386. [CrossRef] [PubMed]

5. Kang, SJ; Choi, BR; Lee, EK; Kim, SH; Yi, HY; Park, HR; Song, CH; Lee, YJ; Ku, SK Szárított gránátalmakoncentráció-por gátló hatása a melanogenezisre B16F10 melanomasejtekben; p38 és PKA jelátviteli útvonalak érintettsége. Int. J. Mol. Sci. 2015, 16, 24219–24242. [CrossRef] [PubMed]

6. Kim, JW; Kim, HI; Kim, JH; Kwon, OC; Son, ES; Lee, CS; Park, YJ A ganodermanondiol, a Ganoderma lucidum gyógygombából származó új melanogenezis gátló hatása. Int. J. Mol. Sci. 2016, 17, 1798. [CrossRef] [PubMed]

7. Tsao, YT; Huang, YF; Kuo, CY; Lin, YC; Chiang, WC; Wang, WK; Hsu, CW; Lee, CH A hinokitiol az AKT/mTOR jelátvitelen keresztül gátolja a melanogenezist a B16F10 egér melanoma sejtekben. Int. J. Mol. Sci. 2016, 17, 248. [CrossRef] [PubMed]

8. Padhye, S.; Dandawate, P.; Yusufifi, M.; Ahmad, A.; Sarkar, FH A plumbagin és analógjai gyógyászati ​​tulajdonságainak perspektívái. Med. Res. Rev. 2012, 32, 1131–1158. [CrossRef] [PubMed]

9. Gupta, SC; Kim, JH; Prasad, S.; Aggarwal, BB A tumorsejtek túlélésének, proliferációjának, inváziójának, angiogenezisének és metasztázisának szabályozása a gyulladásos utak táplálékkal történő modulálásával. Cancer Metastasis Rev. 2010, 29, 405–434. [CrossRef] [PubMed]

10. Jackson, JK; Higo, T.; Hunter, WL; Burt, HM topoizomeráz inhibitorok, mint ízületi gyulladás elleni szerek. Inflflamm. Res. 2008, 57, 126–134. [CrossRef] [PubMed]

11. Ahmad, A.; Banerjee, S.; Wang, Z.; Kong, D.; Sarkar, FH Plumbagin által kiváltott humán emlőráksejtek apoptózisát az NF-κB és Bcl-2 inaktiválása közvetíti. J. Cell. Biochem. 2008, 105, 1461–1471. [CrossRef] [PubMed]

12. Aziz, MH; Dreckschmidt, NE; A Verma, AK Plumbagin, egy gyógynövényből származó naftokinon, a hormon-refrakter prosztatarák növekedésének és inváziójának új gátlója. Cancer Res. 2008, 68, 9024–9032. [CrossRef] [PubMed]

13. Thasni, KA; Rakesh, S.; Rojini, G.; Ratheeshkumar, T.; Srinivas, G.; Priya, S. Ösztrogénfüggő sejtjelátvitel és apoptózis BRCA1-blokkolt BG1 petefészekrák sejtekben plumbagin és más kemoterápiás szerek hatására. Ann. Oncol. 2008, 19, 696–705. [CrossRef] [PubMed]

14. Gomathinayagam, R.; Sowmyalakshmi, S.; Mardhatillah, F.; Kumar, R.; Akbarsha, MA; Damodaran, C. A plumbagin, egy természetes vegyület rákellenes mechanizmusa nem kissejtes tüdőráksejteken. Anticancer Res. 2008, 28, 785–792. [PubMed]

15. Wang, CC; Chiang, YM; Sung, SC; Hsu, YL; Chang, JK; Kuo, PL A Plumbagin sejtciklus leállást és apoptózist indukál reaktív oxigénfajták/c-Jun N-terminális kináz útvonalakon keresztül humán melanoma A375.S2 sejtekben. Cancer Lett. 2008, 259, 82–98. [CrossRef] [PubMed]

16. Shih, YW; Lee, YC; Wu, PF; Lee, YB; Chiang, TA Plumbagin gátolja a májrák HepG2 sejtek invázióját és migrációját azáltal, hogy csökkenti a mátrix metalloproteináz-2 és az urokináz-plazminogén aktivátor termelését. Hepatol. Res. 2009, 39, 998–1009. [CrossRef] [PubMed]

17. Anuf, AR; Ramachandran, R.; Krishnasamy, R.; Gandhi, PS; Periyasamy, S. A Plumbago rosea és annak tisztított alkotórésze, plumbagin antiproliferatív hatásai SK-MEL 28 melanoma sejtvonalakon. Pharmacogn. Res. 2014, 6, 312–319.

18. Gowda, R.; Sharma, A.; Robertson, GP A celekoxib és a plumbagin szinergikus gátló hatásai a melanoma tumor növekedésére. Cancer Lett. 2017, 385, 243–250. [CrossRef] [PubMed]

19. Li, J.; Shen, Q.; Peng, R.; Chen, R.; Jiang, P.; Li, Y.; Zhang, L.; Lu, J. Plumbagin fokozza a TRAIL által közvetített apoptózist a halálreceptor felszabályozása révén humán melanoma A375 sejtekben. J. Huazhong Univ. Sci. Technol. Med. Sci. 2010, 30, 458–463. [CrossRef] [PubMed]

20. Nair, S.; Nair, RR; Srinivas, P.; Srinivas, G.; Pillai, MR A plumbagin sugárérzékenyítő hatása méhnyakráksejtekben az apoptotikus útvonal modulációján keresztül valósul meg. Mol. Carcinog. 2008, 47, 22–33. [CrossRef] [PubMed]

21. Prasad, VS; Devi, PU; Rao, BS; Kamath, R. A plumbagin sugárérzékenyítő hatása in vitro növesztett egér melanomasejtekre. Indian J. Exp. Biol. 1996, 34, 857–858. [PubMed]

22. Li, YC; Ő, SM; Ő, ZX; Li, M.; Yang, Y.; Pang, JX; Zhang, X.; Chow, K.; Zhou, Q.; Duan, W.; et al. A plumbagin apoptotikus és autofág sejthalált indukál a PI3K/Akt/mTOR útvonal gátlásán keresztül humán nem kissejtes tüdőráksejtekben. Cancer Lett. 2014, 344, 239–259. [CrossRef] [PubMed]

23. Checker, R.; Sharma, D.; Sandur, SK; Khanam, S.; Poduval, TB A plumbagin gyulladásgátló hatását a limfociták NF-κB aktivációjának gátlása közvetíti. Int. Immunopharmacol. 2009, 9, 949–958. [CrossRef] [PubMed]

24. Kim, B.; Lee, SH; Choi, KY; Kim, HS N-Nikotinoil tiramin, egy új niacinamid-származék, gátolja a melanogenezist azáltal, hogy elnyomja a MITF génexpressziót. Eur. J. Pharmacol. 2015, 764, 1–8. [CrossRef] [PubMed]

25. Lee, HY; Jang, EJ; Bae, SY; Jeon, JE; Park, HJ; Shin, J.; Lee, SK A Gauguin D, a Phorbas sp. tengeri szivacsból származó, nagymértékben oxigéndús diterpenoid melanogén hatása a tirozináz expressziójának és lebomlásának modulálásával. Március Drugs 2016, 14, 212. [CrossRef] [PubMed]

26. Winder, AJ; Harris, H. Új vizsgálatok a tirozináz tirozin-hidroxiláz és DOPA-oxidáz aktivitására vonatkozóan. Eur. J. Biochem. 1991, 198, 317–326. [CrossRef] [PubMed]

További információ: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

Akár ez is tetszhet